04基因组DNA的分析

实验四基因组DNA的纯度、浓度及质量分析1、实验目的：结合琼脂糖凝胶技术与紫外分光光度法检测基因组DNA的纯度、浓度，分析抽提质量。学习使用核酸蛋白定量仪2、实验原理：（1）基因组DNA浓度测定DNA或RNA在260nm处有最大的吸收峰。因此，可用260nm波长进行分光测定DNA或RNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml的双链DNA、40μg/ml的单链DNA或RNA、33μg/ml的单链寡核苷酸。如用1cm光径，用H2O或TE稀释DNA样品若干倍并以H2O或TE为空白对照，根据读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA含量（ug/ul）=50×OD260读数×稀释倍数/1000（2）基因组DNA纯度测定DNA纯品的OD260/OD280为1.8，RNA为2.0，因此根据OD260/OD280的比值可估计DNA或RNA的纯度。根据经验，当样品的OD260/OD280为1.8－2.0左右时，即认为已达到所要求的纯度。若比值较高说明含有RNA或RNA降解，比值较低说明有残余蛋白质甚至酚等存在，不能准确定量。（3）基因组DNA质量分析基因组DNA的完整性是检测基因组DNA质量的重要指标，利用琼脂糖凝胶电泳，可以检测基因组DNA的完整性。抽提较好的基因组DNA呈现大于10kb的清晰的一条带，如果出现弥散型的条带，说明基因组DNA被破坏。12345678