红叶石楠 王永平

项目十红叶石楠的组织培养与快繁技术教学目标工作任务实践操作问题探究知识拓展教学内容作业教学终极目标会红叶石楠的组织培养和快速繁殖会采集红叶石楠枝条嫩梢为外植体能正确进行外植体消毒灭菌能诱导培养形成丛生芽并进行继代增殖会进行试管苗生根和驯化、移栽促成目标教学目标教学目标工作任务工作任务选择红叶石楠嫩梢为外植体并处理、消毒和接种任务1诱导无菌丛生芽和增殖芽苗任务2试管苗诱导生根任务3试管苗驯化和移栽基质配制任务4试管苗移栽及环境调控任务5外植体选择和消毒初代培养试管苗驯化、移栽实践操作实践操作茎段快繁技术生根培养继代培养剪取红叶石楠枝条上部嫩梢，长度约为10cm；洗洁精漂洗5min，自来水冲洗20min；70%酒精浸泡20s，无菌水漂洗1～2次；0.1%升汞浸泡6～8min，用无菌水漂洗5次；无菌滤纸吸干表面水分；切成带1～2个芽的小段。选择红叶石楠嫩梢为外植体并处理灭菌任务1在诱导培养基上，培养条件：温度为（25±1）℃，光照强度2000lx，光照为12~14h/d。2周后红叶石楠茎段分化出丛生芽。诱导无菌丛生芽和增殖芽苗任务2丛生芽或茎段切割，接种到继代培养基上，25d即可形成丛生芽，繁殖系数达到10以上。当试管苗长到5cm左右时，切成含3～4个小芽的小段，接种到生根培养基上诱导生根。7d后开始生根，15d后可长出3～5条，1～1.5cm长的红色或乳白色的根，生根率达100%。试管苗诱导生根任务3将高2～3cm，根系发达的小植株移入温室，打开瓶盖炼苗3d。然后洗去培养基，即可移栽。试管苗驯化和移栽基质配制任务4疏松通气、适宜的保水性、清洁卫生是组培苗对基质的基本要求。使用V（蛭石）∶V（珍珠岩）∶V（泥炭）＝6∶3∶1的基质，红叶石楠组培苗的成活率可达95％以上。试管苗驯化和移栽基质配制任务4试管苗移栽及环境调控任务5幼苗出瓶操作过程要小心仔细，可在容器中加适量水后，用玻璃棒轻轻搅动后倒出，再用镊子夹取，取出的幼苗用水将根部的琼脂等冲洗干净，移栽至苗床。试管苗移栽及环境调控任务5红叶石楠炼苗红叶石楠大田移栽褐变现象有的植物材料在接种后材料的表面出现褐色物质甚至培养基也呈褐色的现象，褐色会严重影响外植体的生长分化，成为植物组织培养的一大障碍。组织中的多酚氧化酶被激活，使酚类物质被氧化生产生棕褐色醌类物质而引起褐变。问题探究问题探究组培过程中如何防治褐变？三个选择：外植体、无机盐成分蔗糖浓度和激素水平、适宜的温度两个加入：活性碳、抗氧化剂一个连续：继代培养问题探究问题探究玻璃化苗：由于试管苗发生生理失调，而形成的发育不正常的组培苗。常常表现为叶片皱缩、易碎、嫩叶呈水浸透明状。移栽后常死亡。原因：①培养基中琼脂与蔗糖的浓度低；②细胞分裂素与生长素比例失调；③培养基中含氮量高；④培养温度高；⑤光照不足。问题探究问题探究玻璃化症状外形与正常苗有显著差异。叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩呈纵向卷曲，脆弱易碎；表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具栅栏组织，体内含水量高，干物质低。分化能力低，移栽难以成活。问题探究问题探究问题探究问题探究问题探究问题探究组培过程中如何防治玻璃化苗？两个“增加”：增加琼脂浓度；增加蔗糖含量；两个“增强”：增强容器通风；增强光照；两个“加入”：加入渗透剂；加入ABA；一个“减少”：减少培养基氮含量问题探究问题探究试管苗为什么要进行驯化？（一）试管苗驯化的目的如果试管苗直接移栽到室外，由于生存环境发生了剧烈的变化，绝大多数试管苗因为难以适应而死亡。驯化的目的是人为创设一种由试管环境逐渐向自然环境过渡的条件，促进试管苗在形态、结构、生理方面向正常苗转化，使之更能适应外界环境，从而提高试管苗移栽的成活率。（二）试管苗的驯化程序试管苗的驯化有两个阶段：一是在出瓶之前，将培养容器置于较强光下，逐渐打开封口增加通气，直至封口物全部去除，使试管苗逐渐适应外界环境，这个驯化过程多在驯化室内进行，试管苗不离开培养容器，因此也称“瓶内驯化”，一般需要10~20d；另一阶段是从培养室移出后定植到育苗容器或苗床，要经过一段保湿遮光阶段，称“瓶外驯化”。试管苗的驯化的时间、时机和方式依植物的种类而异，一般经过继代培养的有效芽转入生根培养基以后，即可将生根状态理想的试管苗连同培养容器从培养室取出，置于较强的光照下进行光照适应性锻炼。试管苗驯化应注意以下几点：1.在生根培养基中培养的时间2.生根的状态3.炼苗时的光照强度4.驯化的时间5.容器开口的把握如何进行试管苗的移栽？怎样才能提高试管苗驯化移栽的成活率？（一）试管苗的移栽试管苗经过一定阶段的驯化以后，对自然环境有了一定适应能力，即可以将其移栽到先保湿后敞开的空间了。移栽方式：容器移栽大田移栽问题探究问题探究容器移栽是指将驯化的试管苗先移栽到穴盘、营养钵等育苗容器中。在育苗容器中经一段时间培育，达到商品苗或大田移栽要求后，在进行出售或定植。对于树木试管苗，容器移栽后经过一段时间培育，待幼苗长大后，还需移到大田，称为大田移栽。试管苗移栽应注意以下问题：1.从瓶中取苗，要轻，防止扯断苗根。2.试管苗清洗时，清洗掉附于根上的琼脂。3.移栽基质以疏松、排水性和透气性良好者为宜。4.保持一定的湿度，如果光照强度过大应该进行适当遮荫。5.植苗入盘的时间，最好选在无风阴湿的天气，6.移栽时先在营养钵或穴盘中装入基质至1/4处，左手轻拿试管苗，右手将苗根均匀地分布于营养钵中。容器移栽的具体做法：从瓶中小心取出试管苗，在20℃左右的温水中浸泡约10min并换水两次，将黏附于试管苗根部的培养基清洗干净，栽入装有经过消毒处理基质的育苗盘中，喷洒一定剂量的杀菌药，然后放在干净、排水良好的温室或塑料保温棚中，在初期应保持较高的空气湿度，并适当遮荫，大约需时20d。移栽1.移栽过渡苗床制作（1）苗床准备过渡苗床可建在普通塑料大棚内，床宽1.2m左右，床周用砖砌高30cm，床底整平，上铺20～25cm厚的栽培基质。组培苗的移栽成功与否，栽培基质是否适宜是一个重要因素，疏松通气、适宜的保水性、清洁卫生是组培苗对基质的基本要求。使用V（蛭石）:V（珍珠岩）:V（泥炭）＝6∶3∶1的基质，红叶石楠组培苗的成活率可达95％以上。（2）基质配制（3）苗床消毒基质重复使用时，一定要进行细致消毒，使用（1000~1500）×10-6敌克松溶液浇透整床基质，再用0.15％高锰酸钾溶液喷洒苗床表面及四周，24h后即可移栽小苗。也可用800倍福尔马林溶液喷洒苗床表面，用塑料薄膜密封24h以上，再通风12h即可使用，以上两种方法均能取得较好的效果。2.过渡移栽管理（1）组培苗出瓶移栽组培苗出瓶是保证移栽成活的第一步，是从无菌，温、光、湿度稳定环境中进入到自然环境中，从异养过渡到自养过渡的一个炼苗过程。（2）防病管理保持环境清洁、尽量减少污染是组培苗移栽成活的根本所在。幼苗浇灌时应尽可能选择清洁的水源，移栽当天喷施（0.33~0.50）MS营养液，并喷施800~1000倍甲基托布津或百菌清或500倍多菌灵药液，每隔一周左右喷施一次，连续喷施3~4次，前后两次交替使用不同杀菌剂效果更好。（3）湿度管理有效的湿度管理也是保证组培苗移栽成功的关键因素之一，红叶石楠组培苗出瓶前是在100％相对湿度条件下生长的，出瓶初期保持高湿的小环境至关重要。红叶石楠移栽初期3~5d棚内空气湿度需保持在95％以上，5d后仍需半封闭保持80％相对湿度2~3周。移栽后也要注意基质湿度的控制，除淋足定根水后，以后2~3d淋水一次。（4）光照、温度管理组培苗室内生长环境是在弱光、基本恒温下，因此移栽后应注意遮光及控温。一般移栽初期应遮光70％一周，以后用50％遮光，2~3周即可除去遮阳网。移栽时应选择适宜的季节，红叶石楠在9月下旬到次年5月中旬移栽成活率较高，冬季及早春移栽成活率最高，冬季应在大棚内加盖内棚，苗床基质保持在15℃以上，成活率一般可达90％以上。3.大田移栽红叶石楠组培苗经过过渡苗床移栽成活长出新叶后，一般在苗床过渡40d左右即可移入大田，移入大田后可与其它繁殖方法生产的种苗一样管理。移栽到大田后的幼苗上部新生叶有绿色变为鲜红色，老叶叶色变为浓绿色，带光泽，表现出品种的特点，当年苗可长至50cm。成活率可达90%。园林绿化苗木市场的新宠——彩叶树种红叶石楠彩叶马醉木基本功训练配制红叶石楠初代培养基并灭菌。课后作业思考题如何提高红叶石楠组培苗移栽成活率？谢谢！