2008-2009第二学期基因工程原理课程考试试卷(B)参考答案

B卷第1页共3页长江大学试卷院(系、部)专业班级姓名学号…………….…………………………….密………………………………………封………………..…………………..线……………………………………..2008─2009学年第2学期《基因工程原理》课程考试试卷(B卷)参考答案专业:生物技术年级:2006考试方式:闭卷学分:4考试时间:120分钟题号一二三四五六七八总分阅卷人得分得分一、名词解释(每小题2.5分，共15分)1、基因工程：是指在分子水平上进行的遗传操作，指将一种或多种生物提（供体）的基因或基因组提取出来，或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组，转移到另一种生物体（受体）的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。2、Klenow片段：用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶I可以切掉N端的5’3’外切酶活性部分，就成为Klenowfragment。3、置换型载体：两个多克隆位点区以反向重复形式分别位于DNA的非必须区两端，用酶切后，可以将中间的区段切下来，与用同样酶切成的外源DNA片断置换。4、引物：人工合成的单链DNA小片断，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5‘端相同。5、转化：大肠杆菌捕获质粒DNA的过程。6、噬菌粒：噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。得分二、填空题(每小题1分，共10分)1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA时，具有两方面的作用，分别为变性剂和抑制了DNase。2、Plasmid能进行自我复制，大多数为双链闭合环状DNA分子。3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫内切酶，另一种叫修饰酶。4、反转录酶来自AMV或Mu－MLV，即依赖于RNA的DNA聚合酶，它有聚合酶活性，但无外切酶活性。5、末端转移酶来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加于DNA分子的3'羟基端。得分三、选择题(每小题1.5分，共15分)1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）。A、既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNA；B、只能作用于单链DNA；C、只能作用于双链DNA；D、只能作用于RNA。2、下列哪一种酶作用时需要引物(B)。A、末端转移酶；B、反转录酶；C、DNA连接酶；D、限制酶。3、DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能(D)。A、蛋白质（如BSA）同DNA结合；B、有外切核酸酶污染；C、酶失活；D、酶切条件不适合。4、以下各项中不是PCR反应所必须的是（D）。A、模板和引物；B、dNTP；C、Taq酶和buffer；D、甘油。5、关于PCR技术的叙述，下列哪项是错误的？（B）A、以DNA复制为基础而建立起来的技术；B、利用PCR技术可完全无误地扩增基因；C、反应体系需模板、一对引物、4种dNTP、耐热DNA聚合酶和缓冲溶液；D、以变性-退火-延伸为一周期。6、以下不是表达载体所必须的条件是（C）。A、必须具备很强的启动子；B、必须具备很强的终止子；C、启动子需要受控制；D、所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。7、以下不属于核酸探针的是（D）。A、RNA探针；B、基因组探针；C、cDNA探针；D、抗体。8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（B）。B卷第2页共3页A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶；D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。9、从细胞或组织中分离DNA时常用蔗糖的作用是(C)。A、抑制核酸酶的活性；B、加速蛋白质的变性；C、保护DNA，防止断裂；D、有利于细胞破碎。10、氯霉素的工作原理为（D）。A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖50S亚基结合并抑制蛋白质合成。得分四、简答题(每小题5分，共25分)1、简述SSR标记的原理及基本步骤。答：又叫微卫星DNA标记，它是指基因组中存在的由2-5个核苷酸为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列，广泛分布于真核生物基因组中。生物体内一些较短的重复单位首尾相连，多次重复而成。基本步骤：1)核酸提取；2)PCR扩增；3)电泳；4)统计分析。2、质粒载体具备那些优点？答：1)较小的分子和较高的拷贝数；2)多个单一的限制性内切酶位点；3)两种以上的选择标记；4)易导入宿主细胞并复制和表达。3、试回答影响DNA连接酶连接效率的因素？答：1)插入片段与载体的浓度比例；2)反应温度；4、简述反向PCR的工作原理。答：扩增两个引物外侧的未知序列；技术关键：把线性DNA模板转变成环形分子。5、简述cDNA第二链合成的方法。答：随机引物法；末端转移酶法；瞄定法。B卷第3页共3页得分五、问答题(每小题10分，共20分)1、已知拟南芥FAE1基因序列，如何得到该物种近缘物种甘蓝型油菜的FAE1基因（利用高保真酶），请谈谈它的基本步骤？答：1)从Genbangk下载拟南芥FAE1基因序列；2)根据拟南芥FAE1基因序列设计用于扩增甘蓝型油菜的FAE1基因引物；3)提取甘蓝型油菜RNA；4)将RNA逆转录为cDNA；5)PCR扩增；6)胶回收、连接、转化、检测；7)测序。2、一个携带有LacZ和氨苄青霉素抗性基因的质粒仅在LacZ基因中有PstⅠ识别位点。消化后与目的DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的E.coli菌株，试问：（1）利用什么方法筛选接受了质粒的宿主细胞和没有接受质粒的宿主细胞？（2）如何区分接受了含有目的DNA的重组质粒和空质粒的克隆？答：（1）：用氨苄青霉素筛选，抗氨苄青霉素的为带有质粒的宿主细胞。（2）：用蓝白斑筛选，显示白斑并抗苄青霉素的为含有目的DNA的重组质粒的宿主细胞。得分六、综合题(15分)当前，甲型H1N1流感疫情迅速从墨西哥和美国蔓延至包括中国在内的几十个国家。快速有效的诊断是有效的防治该疾病的重要措施之一，请根据基因工程的相关知识，设计一种高效、快速的检测H1N1的方法？答：1)从病人体内分离H1N1病毒；2)测序；3)设计特异引物；4)在群体中鉴定引物特异型；5)取疑似样本；6)PCR扩增。7)电泳。