流式细胞仪在临床检验中的应用

流式细胞术在临床检验中的应用迈瑞公司谭伟峰1342流式细胞术的基本原理流式的临床应用迈瑞流式介绍专家对迈瑞流式的评价目录©2014MindrayConfidential21342流式细胞术的基本原理流式的临床应用迈瑞流式介绍专家对迈瑞流式的评价目录©2014MindrayConfidential3流式细胞术的定义流式细胞术是以高能量激光照射高速流动状态下经荧光标记的单细胞（生物颗粒），通过检测产生的散射光和荧光素发射荧光的强度，从而对细胞进行定性或者定量检测，实现对目的细胞分析或分选的技术。©2014MindrayConfidential4©2014MindrayConfidential传统流式检测流程图NatRevImmunol.;12(3):191–200.FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40670LP785/60491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光镜tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光镜tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1FL2FL3FL5流式细胞仪工作原理模拟图©2014MindrayConfidential流式细胞仪与常用检验仪器的比较项目流式细胞仪血球仪生化分析仪免疫分析仪测试对象细胞，血清细胞(测量设置全部固定化）血清血清测试目标物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、DNA含量）；小分子物质（如抗原，抗体）物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、DNA含量）化学成分和一些小分子物质（如钾、钠、钙、酶）小分子物质（如抗原、抗体、激素）测试原理流式细胞术+抗原抗体反应流式细胞术化学比色法抗原抗体反应计量百分比或绝对计数（如%、**个/uL）；物质的量或定性判定（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）百分比和绝对计数（如%、**个/L）物质的量（mol/L）物质的量或定性判定（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）宏观和微观测量宏观对象（细胞）上的微观物质（抗原、看不见、摸不到）测定宏观对象（细胞）上的宏观物质（物理、复杂度、含量，看得见、摸得到）测量微观物质（可溶性成分和一些小分子物质，看不见、摸不到）测量微观物质（小分子物质，看不见、摸不到）输出©2014MindrayConfidential生命科学领域的应用制药工业药物筛选，疫苗研究…生物学研究遗传，生殖，微生物，细胞生物，毒理，分子生物…环境研究湖泊、海洋生态研究…临床诊断、研究血液，肿瘤，药理，免疫…农业畜牧业选种，育种…食品工业©2012MindrayConfidential9flowcytometry+tumor010002000300040005000199019921994199619982000200220042006200820102012flowcytometry+Transplant0200400600800100012001990199219941996199820002002200420062008201020120100200300400500600199019921994199619982000200220042006200820102012flowcytometry+Autoimmunediseases0200400600800199019921994199619982000200220042006200820102012flowcytometry+leukemia020004000600080001000012000199019921994199619982000200220042006200820102012flowcytometry总结可以预计未来流式细胞仪在临床上的应用一定会有更大的发展！1342流式细胞术的基本原理流式的临床应用迈瑞流式介绍专家对迈瑞流式的评价目录流式细胞术在临床检验中的应用©2014MindrayConfidential11∞淋巴细胞亚群分析∞HLA-B27检测∞白血病免疫分型和MRD急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD)淋巴瘤∞造血干细胞分析造血干细胞绝对计数；∞阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）CD55/CD59/FLAER检测∞血小板相关分析血小板计数、血小板免疫表型分析∞细胞周期与DNA倍体分析。。。2010年全国三级医院检验科流式项目分布流式细胞术分析淋巴细胞亚群的原理©2014MindrayConfidential12TBNK淋巴细胞的检测及临床指导意义诊断与鉴别诊断疾病临床分期治疗效果评估指导临床用药。。。©2014MindrayConfidential13淋巴细胞分类百分比和绝对计数淋巴细胞种类特异性分子标记T淋巴细胞CD3+T辅助/诱导淋巴细胞CD3+CD4+T抑制/细胞毒淋巴细胞CD3+CD8+B淋巴细胞CD3-CD19+NK淋巴细胞CD3-CD16+CD56+TBNK淋巴细胞检测在临床科室中的应用©2014MindrayConfidential14流式在风湿免疫科的应用流式在肿瘤的应用流式在移植中心的应用流式在血液科的应用流式在感染科的应用流式在心血管内科的应用流式在其他科室的应用流式在健康体检的应用15胃癌及其不同临床分期淋巴细胞亚群的变化©2014MindrayConfidential16肿瘤术后淋巴细胞亚群的变化©2014MindrayConfidential17乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化传染病信息.2011.24.206-210©2014MindrayConfidential©2014MindrayConfidential18（WorldJGastroenterol.2008,14:3710-8.）乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化HIV/AIDS病人的诊断与分期©2014MindrayConfidential19成人及15岁以上青少年HIV/AIDS的临床分期及其分期标准临床分期CD4细胞计数（个数/mm3）HIV抗体检测HIV核酸检测主要临床表现一般持续时间Ⅰ期6个月~12个月ⅠA期＞500或一过性降低﹣或±＋急性HIV感染综合征或无症状1周~3周ⅠB期≥500血清阳转或＋＋无症状或PGL6个月~12个月Ⅱ期6年~7.5年ⅡA期≥350＋＋无症状或A组临床表现ⅡB期200~349＋＋B组临床表现Ⅲ期﹤200＋＋C组临床表现2~3年（WS293-2008艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准）肺部疾病的鉴别诊断疾病类型例数BALF淋巴细胞亚群（%）CD3+CD4+CD8+CD4/CD8结节病1491.8±5.6270.6±11.214.5±8.46.9±3.12IPF1694.5±3.9114.7±3.1278.4±7.920.2±0.04肺结核674.3±5.6142.3±1.9232.1±1.211.3±0.05肺部肿瘤767.5±10.424.3±5.2435.1±9.620.7±0.13©2014MindrayConfidential20（中华检验医学杂志.2000,23:214-216）利妥昔单抗治疗效果监测©2014MindrayConfidential21(ArthritisResearch&Therapy2009,11；R131)利妥昔单抗(美罗华)：针对B细胞特异性抗原CD20的人-鼠嵌合单克隆抗体用于复发或耐药的CD20阳性滤泡性淋巴瘤是首个以B细胞为靶标治疗类风湿性关节炎的药物外周血B细胞百分比显著下降而骨髓B细胞略下降移植病人免疫抑制剂治疗指导©2014MindrayConfidential22A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天69例（50例没有排斥，19例发生排斥）CD4在移植后有一个缓慢的下降过程CD4如果升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药的治疗方案（Neuroimmunomodulation.2014,214:206-12.）老年人身体状况评估©2014MindrayConfidential23（ClinicalandAppliedImmunologyReviews.2002,2:129–139.）慢性疲劳综合征与淋巴亚群分析©2014MindrayConfidential24（MechanismsofAgeingandDe6elopment.1998,100:121–132.）体育锻炼对淋巴亚群的影响©2014MindrayConfidential25临床需要监测免疫功能的常见疾病©2014MindrayConfidential26疾病类别内容原发性免疫缺陷B细胞免疫缺陷、T细胞免疫缺陷、联合免疫缺陷…继发性免疫缺陷感染（HIV、CMV…）免疫抑制剂的使用肿瘤代谢性疾病、营养不良、衰老自身免疫病SLE、RA…血液肿瘤白血病/淋巴瘤其他手术（KubyImmunology,7th,2013）TBNK淋巴细胞亚群检测©2014MindrayConfidential27CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APCCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APCHLA-B27检测与脊柱关节病©2014MindrayConfidential28脊柱关节病（Spondyloarthritis,SpA）疾病HLA-B27阳性率(%)强直性脊椎炎90Reiter’s综合症70~90银屑病性关节炎50~60急性前葡萄膜炎40~50溃疡性结肠炎伴关节病5~10正常人群2~7©2014MindrayConfidential29强直性脊柱炎•强直性脊柱炎（AS）定义：一种慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病（SpA）中最具代表性的疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。•实验室检查：CRP升高血沉加快HLA-B27阳性类风湿因子阴性HLA-B27检测与AS辅助诊断©2014MindrayConfidential301984年修订的纽约标准；1991年欧洲脊柱关节病研究组（ESSG）标准；2009年国际脊柱关节病评估工作组（ASAS）SpA诊断标准标准—增加HLA-B27作为重要的诊断指标RudwaleitM.CurrOpinRheumatol.2010,22:375-380）©2014MindrayConfidential31HLA-B27检测在AS中的诊断价值•临床意义：1.辅助疾病早期确诊,早期治疗;2.鉴别诊断症状相似的疾病;3.对高危人群进行预测;HLA-B27+HLA-B27+的ASHLA-B27-的AS约5-10%的AS患者为HLA-B27-HLA-B27阳性率在我国为2~7%，AS的患病率为0.1%，因此大部分HLA-B27+并不患ASAS患者中HLA-B27+达90~95%不同HLA-B27检测方法比较©2014MindrayConfidential32方法检测手段优点缺点MLCT显微镜人工观察经济，无需昂贵的设备操作步骤繁琐、费时，且易受血清、补体、单抗的品质以及操作者主观因素的影响，常出现误判漏判。灵敏度、特异性和重复性均较差。目前，仅少数实验室使用。ELISA酶标仪测定吸光度敏感性较高，设备简单，可进行高通量检测操作步骤较多，洗涤步骤复杂、要求严格，易污染导致假阳性，重复性一般。PCRDNA扩增后，电泳紫外分析敏感性、特异性高实验室常用方法，耗时长，需要提取DNA、PCR扩增后还需要电泳分析；容易污染，假阳性率高：空气中DNA气溶胶极易污染扩增产物，对环境要求高。FCM计算机数据分析操作步骤简单、快捷，敏感性和特异性高实验室常用方法，需配备流式细胞仪；注意抗原/抗体交叉反应。HLA-B27检测的敏感性和特异性©2014MindrayConfidential33（Rudwaleit