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•目的要求:•1、了解常用化学消毒剂对微生物的作用。•2、了解渗透压、pH对微生物生长的要求。•3、学习生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。•(一)基本原理•常用化学消毒剂主要有重金属类、有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。不同化学消毒剂对微生物的影响不同。有机溶剂可使蛋白质及核酸变性,也可破坏细胞膜透性使内含物外溢;碘可使蛋白质失活;染料可选择性抑制或杀死微生物。•本实验采用滤纸片法测定化学消毒剂的杀(抑)菌作用。•(1)将已灭菌并冷至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌平皿中,水平放置待凝固。•(2)用无菌吸管吸取0.1mL的菌悬液加入到上述平板中,用无菌三角涂棒涂布均匀。•(3)将已涂布好的平板底皿划分成5等份,每一等份内标明一种消毒剂的名称:75%酒精、0.1%升汞、3%碘酒、5%苯酚、0.2%结晶紫。•(4)用无菌镊子将小圆滤纸片(D5mm)分别浸入装有各种消毒剂溶液的试剂瓶中浸湿。•无菌操作将滤纸片贴在平板相应区域。•注意取出滤纸片时保证滤纸片所含消毒剂溶液量基本一致,并在试剂瓶内壁沥去多余药液。•(5)将上述贴好滤纸片的含菌平板倒置于37℃培养箱中,24h后取出观察抑(杀)菌圈的大小。•(一)基本原理•在等渗溶液中,微生物正常生长繁殖;在高渗溶液(例如高盐、高糖溶液)中,细胞失水收缩,而水分为微生物生理生化反应所必需,失水会抑制其生长繁殖;在低渗溶液中细胞吸水膨胀,细菌、放线菌、霉菌及酵母菌等大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁,而且个体较小,受低渗透压的影响不大。•不同类型微生物对渗透压变化的适应能力不尽相同,大多数微生物在0.5%~3%的盐浓度范围内可正常生长,10%~15%的盐浓度能抑制大部分微生物的生长,但对嗜盐细菌而言,在低于15%的盐浓度环境中不能生长,而某些极端嗜盐菌可在盐浓度高达30%的条件下生长良好。•(1)将含不同浓度0、2.5、5.0、10%NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化、倒平板。•(2)在已凝固的平板皿底用记号笔划成二部分,分别标记,两位同学各接一边。•(3)将上述平板置于37℃培养箱中,24h后观察并记录含不同浓度NaCl的平板上细菌的生长状况。•(一)基本原理•pH对微生物的生命活动的影响是通过以下几方面实现的:一是使蛋白质、核酸等生物大分子所带电荷发生变化,从而影响其生物活性;二是引起细胞膜电荷变化,导致微生物细胞吸收营养物质能力改变;三是改变环境中营养物质的可给性及有害物质的毒性。不同微生物对pH条件的要求各不相同,它们只能在一定的pH范围内生长,这个pH范围有宽、有窄,而其生长最适pH常限于一个较窄的pH范围,对pH条件的不同要求在一定程度上反映出微生物对环境的适应能力。•(1)无菌操作吸取5mL不同pH(3、5、7、9、11)的牛肉膏蛋白胨液体培养基于无菌试管中。•(2)接种:每支试管分别接入0.1mL待鉴定细菌的菌悬液。•(3)培养:5支试管置于37℃培养箱保温24h。•(4)观察记录:将上述试管取出,观察细菌生长状况(混浊程度)。•(一、基本原理•微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境,碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等都是微生物生长所必需的,缺少其中一种,微生物便不能正常生长、繁殖。•在实验室条件下,人们常用人工配制的培养基来培养微生物,这些培养基中含有微生物生长所需的各种营养成分。如果人工配制一种缺乏某种营养成分(例如碳源)的琼脂培养基,涂布菌液于该培养基平板上,再将所缺乏的营养物质(各种碳源)点植于平板上,在适宜的条件下培养后,如果接种的这种微生物能够利用某种碳源,就会在点植的该种碳源物质周围生长繁殖,呈现出由许多小菌落组成圆形区域(菌落圈),而该微生物不能利用的碳源周围就不会有微生物的生长,最终在平板上呈现一定的生长图形。由于不同类型微生物利用不同营养物质的能力不同,它们在点植有不同营养物质的平板上生长图形就会有差别,具有不同的生长谱,故称此法为生长谱法。该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的需求,在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品质量检测等诸多方面具有重要用途。•(1)将基础培养基熔化并冷却至50℃左右,倒平板。•(2)接种:加入0.1mL菌悬液,涂布均匀。•(3)在皿底用记号笔划分成五个区域,并标明要点植的各种糖。•(4)用5张滤纸片分别浸取5种糖液对号点植。•注意点植时滤纸片不能含有过多糖液,糖过多时,糖溶液扩散区域过大会导致不同的糖相互混合。•(5)将平板倒置于37℃培养箱中培养24h,观察各种糖周围有无菌落圈。•注意:点植糖后不要匆忙将平板倒置。本次实验要求:1、结果记录:•(1)化学因素:记录抑菌圈大小,以此比较判断各试剂抑菌能力。•(2)渗透压:“-”表示不生长、“+”表示生长、“++”表示生长良好。•(3)pH:同渗透压。将培养液充分震荡后观察。•(4)营养要求:观察各滤纸片周围有无菌落圈及菌落圈大小,以此判断未知菌对五种碳源的利用情况。•2、思考题:要含有化学消毒剂的滤纸片周围形成的抑(杀)菌圈表明该区域培养基中的原有细菌被杀死或被抑制而不能生长,你如何用实验证明抑(杀)菌圈的形成是由于化学消毒剂的抑菌作用还是杀菌作用?•3、综合实验结果,对自己分离到的细菌进行初步鉴定。(实验报告单独写)
本文标题:实验九
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