生化实验--血糖的测定-三组

血清葡萄糖浓度的测定主讲人：熊珍平第三小组成员:郑卓郑子勤刘璐黄巾帼1.血糖为何能保持恒定？2.什么是糖尿病？3.临床上一般如何测血糖？4.实验室测血糖方法及比较？5.如何酶法测血糖？血糖的来源、去路•如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。•低血糖：生理性和病理性。低于2.8mmol/L。•高血糖：生理性和病理性。高于7.1mmol/L。高于8.89mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖：糖尿病。•糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。•糖尿病诊断标准？糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。1.相关临床知识胰岛B细胞靶细胞胰岛素I型糖尿病（T1DM）别名：青年发病型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病。原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏。易发病人群：年龄轻，大多30岁治疗：依赖胰岛素治疗II型糖尿病（T2DM）别名：非胰岛素依赖型糖尿病原因：自身能产生胰岛素，但细胞无法对其做出反应。易发病人群：中老年人，肥胖者治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？•一般正常人进食后血糖都会暂时性升高，进食后30分种或60分种可升到最高峰，但血糖一般不超过8.9mmol/L；进食2小时后又会回到空腹水平，这就是人体对糖的耐受现象。•什么是口服葡萄糖耐量试验（Oralglucosetolerancetest，OGTT）？•有何临床意义？•口服葡萄糖耐量试验（Oralglucosetolerancetest，OGTT）是一种口服葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。•通过OGTT试验，可以早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病(DiabetesMellitus,DM)，是一种简单、快捷的诊断方法。•测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然后成人口服75g无水葡萄糖，溶于250ml水中，5~10分钟内饮完。饮后2小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。mmol/LIFG与IGT•空腹血糖损伤(ImpairedFastingGlucose,IFG)：空腹血糖≥6.1mmol/L,但＜7.0mmol/L•糖耐量受损(ImpairedGlucoseTolerance,IGT)：餐后2h血糖＞7.8mmol/L,但＜11.1mmol/L•IFG和IGT可以说是一种正常人向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿病，但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据有关研究报道，每年5-8%的IGT者将发展成为2型糖尿病。•无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常•无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿•无糖尿病史，有明显糖尿病家族史•有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不够标准•分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史的个体•不明原因肾病和视网膜病•妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者OGTT的适应症糖化血红蛋白A1血液内的红血球内含血红蛋白(HAEMOGLOBULINHB)。它们会和血液内中的葡萄糖结合而成糖化血红蛋白(HBA1C)。由于红血球在身体只存活8-12个星期，因此糖化血红蛋白(HBA1C)就可以显示在过去8-12星期的血糖水平。这个指数比起血糖更能显示糖尿病症是否受到控制。正常的糖化血红蛋白A1(HBA1C)的正常值为：5.89±0.9%(4.99-6.79%);超过7%显示控制糖尿的水平不佳。血糖测定方法•无机化学法：如Folin-Wu法•有机化学法：如邻甲苯胺法•酶法：己糖激酶法，•酶法：葡萄糖氧化酶法•原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使Cu2+还原成Cu+，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量•稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。•空腹正常血糖参考值4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL无机化学法：Folin-Wu法有机化学法：邻甲苯胺法•原理：•葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。•Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。•评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。酶法：葡萄糖氧化酶法（glucoseoxidase,GOD）•葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。•过氧化氢在过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物。•红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2H2O＋红色醌式物质过氧化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度实验试剂•0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)•酶试剂取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶于磷酸缓冲液80ml中，定容至100ml，置4℃保存•酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。•酶酚混合试剂将酶试剂和酚试剂等量混合，4℃下可存放1个月。•葡萄糖标准工作液：5mmol/L实验操作加入物空白管标椎管测定管血清(ml)－－0.020葡萄糖标准液(ml)－0.020－蒸馏水(ml)0.020－－工作液(ml)3.003.003.00•混匀，置37℃水浴保温25分钟，在510nm波长处比色，以空白管（B管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度计算其血糖浓度。计算：•葡萄糖标准液：5mmol/L•血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS×CS参考值：•3.9~6.1mmol/L本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。但是对测定结果无显著影响。实验误差分析：•葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。•对于血液样品需及时分离红细胞。因为红细胞的酵解将会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。注意事项•严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。•酶酚混合液一般现用现配。•葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。注意事项临床意义•1.肾性糖尿：正常人每分钟约有100毫克糖从肾脏排出，但经肾脏时又被重新吸收而进入血液循环，因此，正常人尿中是不会有糖。当肾脏有病时，如患了慢性肾炎、肾病综合症、老年性肾病等疾患时，肾脏的重新吸收能力会下降，于是便出现了糖尿。•2.神经性糖尿：某些疾病，如休克、外伤、脑出血等，使人体处于应激状态，引起神经—内分泌紊乱，肝糖元大量分解，血糖浓度上升，出现糖尿。•3.药物性糖尿：如长期使用激素，如糖皮质激素(肥仔药)以及吗啡、解热止痛药等，可使某些人出现糖尿。临床意义•4.妊娠性糖尿：妊娠妇女在妊娠中及后期，由于乳腺功能活跃，所分泌的乳糖增多，同时因妊娠使肾脏重新吸收葡萄糖的能力下降，都有可能使妊娠妇女血糖浓度升高，尿糖增高，尿糖检查阳性。•5.饮食性糖尿：当人们从食物中摄取大量的糖类物质时，可以从尿中验到糖，如甲状腺机能亢进或植物神经功能紊乱的病人，因其肠道对食物中的糖类吸收过快，可出现血糖水平升高过急，糖份经肾脏排出体外。