指导原则编号：【Z】GPT5-1中药、天然药物免

指导原则编号：【Z】GPT5-1中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究的技术指导原则（第二稿）二00四年三月十八日1目录[概述]…………………………………………………………………4一、定义……………………………………………………………4二、背景……………………………………………………………5三、适应范围………………………………………………………6四、重点内容………………………………………………………6[基本内容]…………………………………………………………...6一、基本原则…………………………………………………………6二、过敏反应…………………………………………………………7（一）试验中应考虑的问题…………………………………………7（二）I型过敏反应…………………………………………………..71．定义………………………………………………………………...72．主动皮肤过敏试验…………………………………………………83．主动全身过敏试验…………………………………………………84．被动皮肤过敏试验…………………………………………………85．抗体滴度检测………………………………………………………9（三）II、Ⅲ型过敏反应………………………………………………9（四）Ⅳ型过敏反应………………………………………………...10三、光变态反应………………………………………………………..10（一）皮肤光变态反应试验……………………………………………11（三）光变态反应试验中应考虑的问题………………………………11四、数据分析及评价……………………………………………………12五、常见问题及处理…………………………………………………..13六、不同剂型的中药、天然药物的一般要求………………………..15[参考文献]……………………………………………………………162[附录]…………………………………………………………………17一、主动皮肤过敏试验………………………………………………17二、主动全身过敏试验………………………………………………19三、被动全身过敏试验………………………………………………20四、Ⅲ型过敏试验……………………………………………………22五、Ⅳ型过敏试验……………………………………………………22（一）Buehler分析和豚鼠最大值法………………………………….22（二）啮齿类局部淋巴结试验………………………………………..23六、皮肤光变态反应试验……………………………………………25[起草说明]……………………………………………………………26[著者]…………………………………………………………………293中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究的技术指导原则[概述]一、定义免疫毒理学是毒理学中一门重要的分支学科，其目的是探讨外源性化合物对机体（人和实验动物）免疫系统产生的不良影响及机理。外源性化合物对机体免疫系统的损伤作用包括两类，一是免疫抑制，即免疫系统的广泛抑制，可致机体对感染的易感性增加及肿瘤发生率增高；另一是免疫增强，即免疫系统反应性过度增强，可能包括免疫性产生，超敏反应（变态反应）、自身免疫反应以及不良免疫刺激等。过敏反应指变态反应，又称超敏反应，是指机体受同一抗原再次刺激后产生的一种异常或病理性免疫反应。按抗原与抗体或细胞反应的方式和补体是否参加等，将过敏反应分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四型。其中Ⅰ型过敏反应是了解得最多的一种过敏反应，目前采用的过敏试验方法多数是根据Ⅰ型过敏反应发病机制的不同环节而设计建立的。光过敏反应为IV型过敏反应的特殊类型，是局部给药和全身给药后，分布在皮肤中的药物中所含的感光物质与光线产生复合作用使得用药后皮肤对光线产生的不良反应。中药、天然药物为一种外源性物质，也可能作为过敏原引发机体产生过敏反应。由于免疫系统是增生活跃的系统，因此对外源性物质非常敏感，但每一种化学物质都有其特定的靶器官，因此不必盲目地对所有受试物进行免疫毒性监测，而是选择性地对某些受试物特别是以免疫系统为靶器官的毒物进行研究。用于某些适应症的药物，因其作用机制的特殊性，对人体免疫系统可能产生影响；另外，当受试物是已知的免疫调节剂的情况，或在安全性评价过程中初步发现对免疫系统有明显4影响的药物也应进行免疫毒性的评价。若需要进行其他免疫毒性评价的药物，建议可在其长期毒性试验中，增加免疫系统损伤的评价指标。二、背景从70年代后期开始，欧美等先进国家开始研究药物对机体免疫系统的毒性研究。90年代以来，逐渐将免疫毒性作为药物安全性评价的一项重要内容。随着中药走向世界，许多高新技术也广泛应用于中药新药的研发过程，其研究内容也日趋与国外化药新药研究接轨。中药作为一种外源性化学物质，进入机体后，同样对机体免疫系统产生不同程度的毒副作用。在中药新药研究过程中，研究其对机体免疫系统的影响及机理，是中药临床前安全性研究及评价的一项重要内容。以往中药新药的安全性研究中，很少关注或检查免疫系统，故也极少发现受试物的免疫毒性作用。因免疫系统方面的功能改变能在某种意义上预示药物的不良反应，且免疫系统对毒物具有很高的敏感性。因此，需在新药评价过程中，逐渐建立一套评价方法，在常规的安全性研究中探索并发现药物的免疫毒性以及及引起的免疫系统的功能性改变等。传统观念认为，中药平和、安全，但近年来，伴随中药及其新制剂的不断增多，如注射剂品种的不断增加，使用范围的日益扩大，由中药引起的不良反应特别是变态反应也在逐年增多。以下几方面可能是导致中药变态反应发生的主要原因：（1）中药自身的特点：中药成分复杂，按生理活性可分为有效成分、辅助成分、无效成分、组织物及杂质等，其中不乏有导致机体的过敏物质，如动、植物蛋白，多肽，多糖等大分子物质，它们同时具有免疫原性和反应原性,属于完全抗原，可直接刺激机体免疫系统产生免疫应答,使机体产生抗体或致敏淋巴细胞,最后导致变态反应；一些小分子化学物质属于半抗原，进入人体后与蛋白质结合成完全抗原而致敏。（2）中药及其制剂中的致5敏原，除药物本身成分外，其制剂中的添加剂、助溶剂、稳定剂、着色剂、稀释剂及在制备过程中产生的杂质和药物本身的氧化、还原、分解、聚合等形成的杂质均能成为过敏原而致机体过敏，从而诱发各种类型的变态反应。（3）中药复方制剂：复方制剂包含多种不同药物，混在一起制成煎剂、注射剂、丸剂及外用制剂等。各种药物成分在体外就有可能发生相互作用,进入体内后在消化、吸收及体内转化过程中,也会有互相作用发生,这无疑也会成为发生超敏反应的原因。鉴于此，中药免疫毒性特别是变态反应的研究是不可忽视的临床前安全性评价的重要内容之一。三、适用范围该技术指导原则适用于拟用人和/或已上市的中药、天然药物的免疫毒性研究。这些药物指非口服给药途径的中药、天然药物，包括中药注射剂及其他局部用药的制剂。四、重点内容本技术指导原则的重点内容主要包括免疫毒性评价中的过敏反应试验和光过敏试验内容。[基本内容]一、基本原则免疫毒性研究必须执行《药品非临床研究质量管理规范》（GLP）。在进行试验设计中，应遵循随机、对照、重复的原则。应在遵循安全性评价普遍规律的基础上，运用具体问题具体分析的方法，结合受试物的自身特点，充分考虑和结合药学、药效学、其他毒理学（长毒、急毒）及拟临床应用情况等信息，体现整体性、综6合性的原则，在阐明其研究方法或手段科学、合理的前提下进行规范性试验，对试验结果应进行全面分析和综合评价，以达到免疫毒性研究的目的。二、过敏反应试验（一）试验中应考虑的问题中药、天然药物应进行何种变态反应研究，可根据药物自身特点、临床适应症和给药方式确定。通常局部给药发挥全身作用的药物（如注射剂和透皮吸收剂等）需考察Ⅰ型过敏反应，如注射剂需进行全身主动过敏试验和皮肤被动过敏试验，透皮吸收剂需进行皮肤主动过敏试验等。Ⅱ和Ⅲ型过敏反应可在进行长期毒性试验中选择相关指标进行观察，如观察动物的体征、一般表现及免疫系统损伤的评价指标等。经皮给药制剂（包括经皮给药发挥全身作用或局部作用的药物）应进行IV型过敏反应试验。具体试验方法的选择应根据给药途径、过敏反应发生机制、影响因素和临床意义等为基础进行选择，如皮肤主动过敏试验、全身主动过敏试验、皮肤被动过敏试验、小鼠耳廓肿胀试验（MEST）、啮齿类局部淋巴结实验（LLNA）、Buehler分析法、豚鼠最大值法（GPMT）等，也可采用其它的检测方法，但需阐明其合理性并说明具体方法及操作流程。过敏试验均应设立阳性对照和阴性对照。可选择多个剂量进行试验，尽可能找出无过敏反应的剂量，以提示临床进行脱敏处理的起始剂量；也可避免因剂量过低而出现假阴性结果；另外，可帮助判断阳性结果是否因强刺激反应而引起。过敏试验中的受试物应能充分代表临床试验受试物和上市药品，因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样7品，一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等。如不采用中试样品，应有充分的理由。如果由于给药容积或给药方法限制，可采用原料药（提取物）进行试验。试验中所用溶媒或赋形剂应标明批号、规格、生产厂家。（二）Ⅰ型过敏反应试验1、定义Ⅰ型超敏反应又称速发型，药物分子本身为过敏原,进入机体刺激免疫系统产生相应的IgE抗体，IgE抗体附着在肥大细胞及嗜碱性细胞上使之致敏，当同一变应原再次进入机体后，即与肥大细胞及嗜碱性细胞表面的IgE抗体发生抗原抗体反应，导致肥大细胞及嗜碱性细胞脱颗粒并释放生物活性介质，作用于不同的组织和器官，产生不同的病理生理反应。临床表现为过敏性休克、支气管哮喘、变应原鼻炎、胃肠道与皮肤过敏反应等。Ⅰ型超敏反应通常用皮肤主动过敏试验（ACA）、全身主动过敏试验（ASA）和皮肤被动过敏试验（PCA）等考察，对于吸入途径药物常采用呼吸道敏感性检测。2、主动皮肤过敏试验（ActiveCutaneousanaphylaxis,ACA）皮肤过敏是一种受试物产生免疫学传递的皮肤反应。当动物初始接触受试物后至少1周，再进行受试物的激发接触，有可能导致过敏状态。本试验的目的就是要观察受试物经皮肤重复接触受试物后，机体免疫系统反应在皮肤上的表现，即有无过敏反应及过敏强度如何。3、主动全身过敏试验（Activesystemicanaphylaxis,ASA）当药物作为抗原或半抗原初次进入体内，刺激机体产生相应的抗体（IgE）。当同样药物再次进入机体，抗原与抗体结合形成的抗原抗8体复合物，刺激肥大细胞及嗜碱性细胞释放活性介质，从而引起局部水肿、抓鼻、竖毛、呼吸困难、窒息、痉挛，甚至休克死亡。本试验的目的即观察受试物给药后对动物引起的过敏反应。中药注射剂引起的过敏反应临床上较多见，尤其是引起全身性过敏反应，甚至过敏性休克等非常严重的副反应。因此，中药注射剂全身主动过敏试验更显得有特殊意义。4、被动皮肤过敏试验（PassiveCutaneousAnaphylaxis,PCA）被动皮肤过敏试验是一种较敏感的测试特异抗体滴度的方法。将受试物致敏动物的血清（含丰富的IgE抗体）给正常动物皮内注射，IgE的Fc端与皮肤的肥大细胞表面的特异受体结合，形成IgE的复合物，使肥大细胞致敏。当抗原攻击时，抗原与肥大细胞表面上IgE的Fab端结合，导致IgE分子结构的改变，引起肥大细胞脱颗粒，释放过敏介质如组胺、慢反应物质等，使皮肤局部血管的通透性增加，使静脉注射抗原的同时注入的伊文思蓝染料在该皮肤处渗出着色。根据局部皮肤蓝染范围或程度，可判定血管通透性变化的大小，继而判定皮肤过敏反应的程度。5、抗体滴度测定IgE是引起I型变态反应的主要原因，检测血清或体液中的IgE水平对明确是否存在I型变态反应和认识药物诱发变态反应的机制具有重要意义。当过敏试验出现阳性或可疑阳性，以及一些具有潜在致敏性的物质，建议进行本试验。6、试验方法可参见附录中试验方法。（三）Ⅱ型和Ⅲ超过敏反应Ⅱ型过敏反应又称细胞毒或溶细胞型。药物分子进入机体后附着在细胞膜（通常是血细胞）上，并刺激免疫系统产生相应抗体，参与9