生物参考区间建立与验证

生物参考区间的建立和验证YourTopicGoesHere一、参考区间的概念•正常值•参考范围•Expectedvalues•参考区间（referenceintervals）两参考限之间包括两参考限的区间。注：参考区间是指从参考下限到参考上限的值的区间，通常是参考分布中间95%区间，在某些情况下只有一个参考限具有临床意义，通常是参考上限，这时的参考区间可以是0到参考上限。•医学绝对水平YourTopicGoesHere一、参考区间的概念•参考个体(referenceindividuals)按明确标准选择的用作检验对象的个体。注：通常是符合特定标准的健康个体。•参考人群(referencepopulation)由所有参考个体所组成的群体。注：通常参考人群的个体数是未知的，因此参考人群是一个推想的实体。•参考样本组(referencesamplegroup)从参考人群中选择的用以代表参考人群的足够数量的个体。•参考值(referencevalues)通过对参考个体某一特定量进行观察或测量而得到的值（检验结果）。注：参考值从参考样本组中获得。YourTopicGoesHere一、参考区间的概念•参考分布(referencedistribution)参考值的分布。注：参考人群的推想分布可用参考样本组的参考分布及合适的统计方法进行试验；参考人群推想分布的参数可用参考样本组的参考分布及合适的统计方法来估计。•参考限(referencelimit)一个来自参考分布用于分类目的的值。注：参考限通常是使规定部分的参考值分别小于等于或大于等于的下侧或上侧限值，参考限将参考值分类；参考值可能与其他类型的决定限不同。YourTopicGoesHere一、参考区间的概念参考个体参考人群参考样本组参考值参考分布参考限参考区间CompriseaFromwhichisselectedaOnwhicharedeterminedOnwhichisobservedaFromwhicharecalculatedThatmaydefineYourTopicGoesHere二、参考区间建立的意义•参考区间是临床检验结果的评价标准，可帮助临床医师做出正确的诊断和治疗决策•参照体外诊断试剂厂家提供的数据或文献报道，而这些数据多来源于其他国家二三十年前参考区间或小样本局部地区人群或数据库参考区间的研究结果•不同国家、地区、民族，生活环境、饮食、遗传背景、经济存在差异，生物学变异等存在决定不同国家和地区需建立符合本地人群特征的参考区间•方法学和检测技术不断更新，人民生活水平提高，许多项目参考区间不再适用YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法•2008CLISC28-A3文件《Howtodefineanddeterminereferenceintervalsintheclinicallaboratory——Approvedguidelines》•2012我国常用生化、血液项目参考区间建立和验证相关行业标准起草YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群募集募集人群来源分布知情同意：告知、自愿参考人群选择筛选标准：问卷、体检、实验室标本采集分析前质量控制，影响因素，标本类型标本检测性能验证、分析中质量控制统计分析离群值、建立参考区间、判断分组参考区间验证临床可接受YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群募集•参考人群来源：城市、农村、体检中心；性别比例；年龄分布•样本量：每个组别至少120人，2倍于目标人群•抽样方法：多级随机整群抽样原则城市、农村社区：分层（经济状况和卫生条件）逐级随机抽取下一级（区、县）街道、乡社区、村个体（性别/年龄比例）体检中心：分层（职业）单位YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群选择•何谓健康？相对、难定义•主观感觉？•潜在/亚临床疾病•界定方法：疾病？健康生活方式？自我感觉（农村）？影像学（脂肪肝）？对参考个体健康状况评估进行详细记录就显得尤为重要，可便于他人再次评估，且为其他实验室进行参考区间的转移和验证时提供参考依据YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群选择——调查问卷年龄吸烟、饮酒性别药物使用情况民族维生素摄入情况联系方式近期住院、手术职业环境近期输血、献血睡眠病史、家族史锻炼过敏史饮食针对女性的特殊问题YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群选择——体格检查•BMI、腰围、臀围•血压•全身全系统体格检查：一般情况，心肺腹查体，口腔、甲状腺、淋巴结、四肢、脊柱、关节等•问诊：症状、病史YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群选择——排除标准急慢性感染动脉粥样硬化、血管病烧伤和肌肉创伤心脏病、高血压慢性肾病糖尿病肝胆管疾病自身免疫性疾病过敏性疾病甲亢或甲减疾病血液系统疾病呼吸系统疾病吸烟量饮酒量2周内服用药物肥胖：BMI≥28怀孕或产后不足1年6个月内做过手术4个月内献血或输血YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考人群选择——实验室检查•尿检：正常•免疫学排除：HBsAg、HCV-Ab、HIV-Ab•生化学排除：血糖、血脂等YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法标本采集——分析前质量控制个体准备标本采集标本处理饮食环境运输空腹时间时间凝块药物、烟、酒体位血清/血浆分离运动标本类型储存应激技术据检测时间YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法标本检测——生化项目质量保证•精密度：使用高低浓度质控品，重复测定4次/天，测定5天；计算CV值，小于试剂说明书的标称指标（CLSIEP-15）•正确度：使用新鲜冰冻血清及NIST标物，重复测定5次，连续2天；计算偏倚(bias)与1/2TEa比较，超出，查找原因（试剂、校准、参数、仪器等）•室内质控：每天不同时段分析质控品5次，连续4天，计算质控品的均值和标准差，质控图，符合质控规则YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法标本检测——血液项目质量保证•精密度：使用3个浓度全血质控品，重复测定4次/天，测定5天；计算CV值（CLSIEP-15）•正确度：5支新鲜血标本（8h内），每份新鲜血标本测定2次，计算bias•室内质控：3个浓度，连续3天不同时间段测定，计算10-20次检验结果均值，至少用13s，22s规则•机器报警，涂片镜检YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法统计分析——离群值处理•Dixon法则即1/3规则：疑似离群值与其相邻值的差值D和数据全距R相除，D/R≥1/3则为离群值•Horn法则：四分位值P25（Q1）P50（Q2）P75（Q3)四分位间距Q=Q3-Q1（Q1-1.5×Q，Q3+1.5×Q）YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法统计分析——参考区间计算•建立参考区间：分布判断参考值95%的分布范围x-1.96s，x+1.96sP2.5—P97.5YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法统计分析——分组判断Z=Z*=3(naverage/120)1/2=3[(n1+n2)/240]1/2•Z检验（正态分布，或接近正态分布）•判断标准：如果Z值大于Z*值，或者较大SD大于较小的1.5倍，建议分组，临床可接受YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法特殊人群参考区间的建立•特殊人群：儿童、妊娠、少数民族•必要性：不适用性（HbA1c妊娠妇女4-5.5%，非妊娠妇女4.8-6.2%；D-D妊娠妇女高；甲状腺激素不同孕期参考区间）•困难更大：人群募集、标本采集、情绪饮食控制YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法多中心实验室联合建立参考区间的趋势•工程浩大：数量、质量•各医院参考区间不同：医生、患者、医疗资源•CLSI：相同项目不用试剂仪器厂家、实验室参照相同标准，检测值可互换——多中心共同参考区间成为可能•通用参考区间：人群、可比•室间质评、检验标准化、医改检验结果一致性工作推进，提供良好基础和技术保障YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法多中心实验室联合建立参考区间的趋势序号地理区域承担单位1东北地区中国医科大学附属第一医院2华北地区北京大学第三医院3华东地区复旦大学附属中山医院4西北地区第四军医大学第一附属医院5西南地区四川大学华西医院6华南地区广东省中医医院本标准参考区间基于中国人群多中心研究结果，检验结果可溯源至国际公认参考方法。基于中国人群多中心研究结果，可溯源至国际公认参考方法，广泛征求临床意见YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法中国成人肝脏功能项目和电解质项目的参考区间项目单位性别参考区间血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）U/L男9～50女7～40血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)U/L男15～40女13～35血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)U/L男10～60女7～45血清碱性磷酸酶(ALP)U/L男45～125女20-49岁：35～10050-79岁：50～135血清总蛋白(TP)g/L男/女65～85血清白蛋白(ALB)g/L男/女40～55血清球蛋白(GLB)g/L男/女20～40白蛋白/球蛋白(A/G)男/女1.2～2.4血清钾离子(K＋)mmol/L男/女3.5～5.3血清钠离子(Na＋)mmol/L男/女137～147血清氯离子(Cl－)mmol/L男/女99～110YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法中国成人血细胞分析项目的参考区间（仪器法）项目单位性别参考区间白细胞(WBC)×109/L男/女3.5～9.5中性粒细胞绝对值(Neut#)×109/L男/女1.8～6.3淋巴细胞绝对值(Lymph#)×109/L男/女1.1～3.2嗜酸性粒细胞绝对值(Eos#)×109/L男/女0.02～0.52嗜碱性粒细胞绝对值(Baso#)×109/L男/女0～0.06单核细胞绝对值(Mono#)×109/L男/女0.1～0.6中性粒细胞百分数(Neut%)％男/女40～75淋巴细胞百分数(Lymph%)％男/女20～50嗜酸性粒细胞百分数(Eos%)％男/女0.4～8.0嗜碱性粒细胞百分数(Baso%)％男/女0～1单核细胞百分数(Mono%)％男/女3～10红细胞(RBC)×1012/L男4.3～5.8女3.8～5.1血红蛋白(Hb)g/L男130～175女115～150红细胞比容(Hct)L/L男0.40～0.50女0.35～0.45平均红细胞容积(MCV)fl男/女82～100平均红细胞血红蛋白量(MCH)pg男/女27～34平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)g/L男/女316～354血小板(PLT)×109/L男/女125～350YourTopicGoesHere三、参考区间的建立方法参考区间转移与验证•前提：人群特征一致，室间质评——结果可比•采集20名（不分组）健康个体新鲜血，使用现用检测系统进行参考区间验证•如果每个亚组20参考个体中只有≤2例，则通过验证。若有≥2例超出参考限，则没有通过验证，应再选20个参考个体进行验证Thanks！