微生物的消毒与灭菌

1第六章微生物的分布、消毒与灭菌2•了解微生物在自然界及人体内的分布.•掌握灭菌、消毒、防腐、无菌、大肠菌群、正常菌群的概念•掌握高压蒸汽灭菌法的原理、操作、用途、注意事项；熟悉其他物理灭菌法（UV、干热法、过滤法等）•掌握化学消毒剂的作用机制，了解常用消毒剂的种类和用途本章要求11:383第一节微生物的分布一、在自然界的分布（一）水中的微生物•细菌、真菌、病毒等•判断水的污染程度的方法以测定水中细菌总数和大肠菌群数为指标•大肠菌群：一群在37℃、24h能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的G-•我国饮用水卫生标准:1ml水中细菌总数不超过100个，1L水中大肠菌群数少于3个•水有自净作用。判断自净效果用细菌为指标11:384（二）土壤中的微生物•条件：营养，pH，T，水•分布：地面下10～30cm，细菌多于放线菌、真菌（三）空气中的微生物•条件：缺乏营养、水，有辐射•分布：近地面空气污染严重，随高度上升数量下降。微生物的量随季节变化（夏季多些）；室内微生物的量与空气的流通有关11:385二、微生物在人体的分布•皮肤以及与外界相通的腔道中均有不同种类的微生物1、正常菌群：正常存在于人体外表和同外界相通的肠道、呼吸道等腔道中，人体免疫功能正常时，对宿主无害，有些还有利的微生物11:386人体常见的正常菌群部位主要菌类皮肽葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌、丙酸杆菌、白色念珠菌口腔表皮葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、类杆菌、梭杆菌鼻咽腔葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、肺炎球菌、奈瑟菌、乳杆菌眼结膜葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌外耳道白色葡萄球菌、干燥杆菌胃一般无菌肠道大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、类杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、双歧杆菌、乳杆菌、白色念珠菌尿道白色葡萄球菌、类白喉杆菌、非致病性分枝杆菌阴道乳杆菌、大肠杆菌、类白喉杆菌、白色念珠菌11:387正常菌群的生理作用1、生物拮抗作用：对外原致病菌的侵入有拮抗和防御作用，保护宿主2、刺激免疫应答：具有免疫原性，有促分裂和佐剂的作用，是机体抗感染免疫的重要组成部分3、合成维生素：如生物素、叶酸、B12、K4、促进代谢：参与糖、蛋白质、脂肪的代谢，促进消化吸收11:3882、菌群失调症：由于正常菌群中各菌比例失调而产生的临床症状引起菌群失调的原因：⑴机体免疫力下降：慢性病人⑵位置改变：E.coli从肠道到腹腔或泌尿生殖道⑶长期使用抗菌药物：广谱抗生素11:389第二节消毒与灭菌•对有害微生物的控制方法：消毒和灭菌•基本概念：Disinfection杀死物体表面上的病原微生物，达到控制微生物传染的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物灭菌：Sterilization杀灭物体上所有微生物的方法。无菌：Asepsis不存在活菌的意思。防腐：Antisepsis防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。消毒：11:3810热力灭菌法一、物理消毒灭菌法利用高温使微生物的蛋白质及核酸变性、破坏，杀灭細菌焚烧----最彻底的灭菌方法eg：衣物、动植物尸体灼烧----直接用火焰灭菌方法eg：接种环、针干烤----加热160-180℃2小时eg：玻璃器皿、金属制品、药品消毒与灭菌的方法：物理、化学、生物法热力、辐射、过滤等11:3811干烤法注意事项：1、洗净后再干烤，防止污物碳化2、玻璃器皿洗净、干燥后再灭菌，T40℃时开烤箱，防止炸裂3、物品包装不宜太大，所放物品不宜太多（2/3），以利于空气对流4、中途不能打开添加物品5、t计算从T达到时开始11:3812高压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法121℃20-30min煮沸消毒法水煮100℃5min(繁殖体)～2h(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15～30min(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（61～63℃30minor72℃15～30s）杀灭致病菌适用对象：耐高温的物品原理：饱和蒸气压与T成正比注意事项：加水适量；物品摆放疏松；排尽冷空气；计时时间；压力降至0后，方可开盖用于清洗玻璃器皿食品、食具、不耐高温的物品不耐热的含糖、血清、牛奶等的培养基11:3813湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原因1、有水的环境中细菌菌体蛋白较易变性2、湿热的蒸汽穿透力比干热强3、湿热的蒸汽有潜热11:3814辐射杀菌法紫外线（UV）杀菌机理：波长200～300m的紫外线具有杀菌作用干扰DNA的复制与转录（形成TT二聚体）紫外线穿透力较弱不耐热物品的表面消毒特点：应用范围：空气消毒手术室、传染病房、细菌实验室原理：利用电磁波杀死微生物包括：微波、UV、X射线、γ射线11:3815•影响因素：光源的强度；与被照物的距离；照射t，湿度等•一般无菌室内用30W，30min，可杀死空气中的微生物•注意：UV的光复活作用T=TT+T可见光光复活酶11:3816过滤除菌原理：用致密的过滤材料滤去液体或气体中的微生物，但不能杀死微生物常用介质：孔径0.22～0.45um的硝酸纤维素滤膜、醋酸纤维素滤膜、玻璃纤维、棉花等适用对象：不耐热，不能用化学方法除菌的液体、气体例：抗生素、血清、酶、生产中的无菌空气缺点：无法滤去病毒、支原体等能通过细菌细菌滤汽的微生物11:3817滤菌过程11:3818低温:主要抑制微生物的生长繁殖常用于菌种保藏eg：4℃、-70℃、-20℃其他物理方法1、超声波频率高于2万赫兹的超声波，可使细胞壁破裂，是细胞破碎的常用方法2、干燥使细胞脱水和胞内盐浓度升高而死亡用于食品、药品保存，抑制微生物的生长11:3819二、化学方法化学药品消毒剂：表面防腐剂：抑制灭菌剂：无活菌针对的对象不同、使用的浓度不同11:3820（一）常用的消毒剂1、醇类1）乙醇用于皮肤、器具的消毒（对芽孢效果不好）机制：含水，极性与细胞膜接近，溶解脂质，可迅速透过细胞膜，使蛋白质变性(70％（w/w）效果好)2）苯氧乙醇无色油状液体，微溶于水对铜绿假单胞菌有较强的杀灭作用11:38212、醛类原理：破坏蛋白质的氢键或氨基1）甲醛:对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用浓度：10％的甲醛加热熏蒸适用对象：对密闭容器或房间内的物品、空气进行消毒，不适于食品、药品存放地空气的消毒2）戊二醛对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用浓度：2％（pH8.0左右）有强杀菌作用适用对象：精密仪器、医疗器械、实验室消毒11:38223、卤素类原理：有氧化性，使蛋白质变性、酶失活，膜破坏1）Cl2适用对象：自来水消毒2）漂白粉（Ca(ClO)2+NaClO）5%～10%用于手、家具消毒。芽孢无效3）I2及含I2消毒剂（2％）用于皮肤粘膜、创面的消毒Cl2+H2OHClO11:38234、酚类原理：蛋白质变性，损伤细胞膜1）苯酚（石炭酸）浓度：3～5％适用对象：地面、家具、器皿的消毒，因其毒性，现用于评价其他消毒剂的杀菌强度2）煤酚皂溶液（来苏儿）：甲醛和肥皂水的混合液1～5％用于家具、地板、墙面消毒11:38245、烷化剂气体消毒剂环氧乙烷（第二代消毒剂）原理：与蛋白质、核酸中的-NH2、-OH、-COOH、-SH反应，使蛋白质和核酸结构改变杀菌适用对象：纸张、木材、皮草、生物制品、医药制剂等11:38256、氧化剂类原理：氧化蛋白质的活性基团，使蛋白质变性1）H2O2：3％的用于伤口及口腔粘膜消毒，1～1.5％用于漱口，可治疗和预防口腔炎、咽炎2）过氧乙酸0.2～0.5%用于皮肤、玻璃、纤维等消毒3）臭氧O3—强氧化剂用于水、空气、设备消毒4）KMnO4—强氧化剂0.1%的KMnO4用于皮肤，水果、蔬菜的消毒11:38267、季铵盐类原理：是阳离子表面活性剂（正电），改变细胞膜的渗透而引起菌体破裂，同时使蛋白质变性。0.05～0.1%的新洁尔灭用于皮肤、、粘膜、手术器械的消毒11:38278、其他消毒剂甲基紫—碱性染料，带正电，干扰细胞代谢重金属汞—与蛋白质的-SH结合，使之变性AgNO3—使蛋白质变性，用于皮肤、新生儿滴眼睛11:3828（二）化学消毒剂的作用原理1、蛋白质变性2、破坏细胞的表面结构3、干扰和破坏酶的活性，影响细胞的新陈代谢11:3829影响消毒剂作用的因素消毒剂细菌环境种类浓度作用时间菌龄种类有机物温度酸碱度11:3830类别作用机制代表酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫常用消毒剂种类11:3831种类使用浓度用途石炭酸3%～5%地面、器具表面、皮肤消毒乙醇70％皮肤、体温计消毒高锰酸钾0.1%皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞2%皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞0.01%～0.1%皮肤消毒、手术部位消毒过氧乙酸0.2%～0.5%塑料、玻璃器材消毒碘酒2.5%皮肤消毒新洁而灭0.05%～0.1%手术洗手、浸泡手术器械龙胆紫2%～4%浅表创伤消毒各种消毒剂的应用11:3832选择适当的消毒剂低毒价廉低破坏易贮藏方便有效11:3833三、保持无菌状态掌握无菌操作技术11:38