血浆GPT

转氨酶测定2目的要求通过实验加深对转氨作用的认识，了解酶活力测定的基本原理及掌握酶活力的测定方法。丙氨酸氨基转移酶（ALT），又称为谷丙转氨酶（GPT）。催化丙氨酸与-酮戊二酸之间的氨基移换反应，是氨基酸代谢中的一个重要的酶。转氨酶测定3转氨酶的来源转氨酶是一组参与细胞内蛋白质代谢的氨基转移酶，几乎存在于所有器官和组织细胞中，但以肝脏含量最为丰富。人体内转氨酶有20多种，临床用于血清学诊断的主要为丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）。肝细胞内ALT浓度比血清高7000倍，肝细胞轻度损害时，血清ALT即可明显升高。1％的肝细胞坏死即可使血清转氨酶升高1倍。转氨酶测定4肝转氨酶测定5转氨酶转氨酶测定6转氨酶活性测定原理本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸的混合液为底物，加入血浆液(含ALT)保温后，生成反应产物丙酮酸(和谷氨酸)，丙酮酸在强碱条件下与2,4-二硝基苯肼产生棕色反应，颜色愈深，光密度愈大，表示丙酮酸生成愈多，即ALT活性愈高。即可求得ALT活性单位。转氨酶测定7酶活性测定模式：SPEt酶的量要適中生成物要能测得底物要过量反应时间恰当10xKm酸碱度温度vo=Pt转氨酶测定8酶活性测定和酶活性单位酶活性：酶的催化能力,以酶促反应速度来衡量。测定条件:适宜的特定的反应条件酶活性单位：指酶促反应在单位时间（s,min,h）内生成一定量（mg,μg,μmol）的产物或消耗一定量的底物所需的酶量。一个国际单位（IU,1976年）：在特定条件下,25℃,1min内催化1μmol底物转变为产物所需的酶量。转氨酶测定9转氨基作用•由转氨酶催化,将-氨基酸的氨基转移到-酮酸酮基的位置上，生成相应的-氨基酸，而原来的-氨基酸则转变为相应的-酮酸。•特点：a.可逆，受平衡影响b.氨基大多转给了α-酮戊二酸（产物谷氨酸）提问：为什么多转给α-酮戊二酸？答案：来源有保证，谷氨酸可由氧化脱氨迅速降解产生α-酮戊二酸。转氨酶测定10实验步骤•样品(兔血浆)•配制试剂•保温反应•比色测定•计算酶活力•注意事项转氨酶测定11样品兔血浆兔心脏抽血约50ml，加抗凝剂，4000rpm，10‘，吸取上层血浆，待用。转氨酶测定12试剂转氨酶测定13制作标准曲线（按讲义）试剂\管号标空标准样空样品猪肝浸出液/ml————0.10.1缓冲液/ml0.1——————丙酮酸/ml——0.1————基质液/ml——0.5——0.5混匀，37℃水浴保温60min(准确)基质液/ml0.5——0.5——硝基苯肼/ml0.50.50.50.5混匀，37℃水浴保温20min0.4NNaOH/ml5.05.05.05.0充分摇匀后，在520nm波长下比色，以蒸馏水校正光吸收为零各管A520值取4支试管,按下表加入试剂及样品:转氨酶测定14实验现象0—标准空白管，1—标准管；4—血浆空白管，5—血浆管。转氨酶测定15结果计算•标准管测定法•ALT(U)/100ml=样品管A×0.2×100标准管A0.1=样品管-样品空白管×200标准管-标准空白管转氨酶测定16注意事项本实验不做标准曲线，只做样品测定部分。样品和试剂因需用量少（0.1ml），为求准确与快捷，均备有进样枪，硝基苯肼和NaOH专枪专用，留意枪上标有的字样。加入所有试剂后都应充分摇匀，使反应完全。测定前用蒸馏水校正比色皿（1cm），记录各皿的读数，选取较小读数的皿作蒸馏水空白管。以蒸馏水管调零，测定其余3管A520nm（各皿需用原液洗1遍），记录各管读数。测定完毕，在仪器本上登记。转氨酶测定17查肝功为什么要抽血化验转氨酶指数呢？•提示：肝细胞中转氨酶活力比其他组织高出许多，是血清的7000倍。•抽血化验若转氨酶比正常水平偏高则有可能肝组织受损破裂，肝细胞的转氨酶进入血液（结合乙肝抗原等指标进一步确定是什么原因引起的）转氨基本质上没有真正脱氨。