噬菌体

第七节噬菌体phage江南大学生物工程学院病毒virusAnyofvarioussimplesubmicroscopicparasitesofplants,animals,andbacteriathatoftencausediseaseandthatconsistessentiallyofacoreofRNAorDNAsurroundedbyaproteincoat.Unabletoreplicatewithoutahostcell,virusesaretypicallynotconsideredlivingorganisms.病毒的大小非细胞生物•真病毒euvirus：至少含有核酸和蛋白质两种组分•亚病毒subvirus类病毒viroid：只含具单独侵染性的RNA组分拟病毒virusoid：只含不具单独侵染性的RNA组分朊病毒prion：只含蛋白质一种组分真病毒的定义一类超显微的非细胞生物，每种病毒只含有一种核酸；它们只能在活细胞内营专性寄生，靠寄主代谢系统的协助来复制核酸、合成蛋白质等组分，然后进行装配而得以增殖；在离体条件下，它们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。病毒的分类•依据宿主范围植物病毒动物病毒微生物病毒•噬菌体是感染细菌和放线菌的病毒。痘病毒棒状病毒腮腺炎病毒噬菌体疱疹病毒乳头状瘤病毒AIDS病毒病毒的化学组成与构造•化学组成核酸(DNA或RNA)蛋白质•构造基本构造核衣壳：核酸、衣壳非基本构造包膜、刺突典型形态的病毒1、螺旋对称TMV病毒典型形态的病毒2、二十面体对称腺病毒典型形态的病毒3、复合对称T偶数系列噬菌体HIV病毒第六节噬菌体Bacteriophage,phage噬菌体是一类感染细菌或放线菌的病毒。一、噬菌体的特点1、无细胞结构，仅含一种核酸；2、不能进行独立的代谢作用；3、严格的活细胞寄生；4、个体极小，能通过细菌滤器二、噬菌体的形态与构造1、形态噬菌体的基本形态有蝌蚪形、微球形和丝状三种。噬菌体的类型类型形状结构核酸噬菌体1蝌蚪形六角形头部，可收缩性尾部dsDNAT2,T4,T62蝌蚪形六角形头部，非收缩性长尾dsDNAT1,T5,l3蝌蚪形六角形头部，非收缩性短尾dsDNAT3,T74微球形六角形头部，12个顶角各有一个较大的壳粒ssDNAFx174,S135微球形六角形头部，12个顶角各有一个较小的壳粒ssRNAf2,Qb,MS26丝状丝状(线状)ssDNAfd,f1,M132、构造E.coliT4构造：头部（正二十面体）颈环尾鞘、尾髓基片、刺突、尾丝T4Bacteriophage3、大小T4：头部65×95nm，尾部20×95nmf2：f20~25nm4、化学组成•蛋白质•核酸：dsDNA,dsRNA,ssDNA,ssRNAT4Bacteriophage三、噬菌体的生长和繁殖1、吸附adsorption•噬菌体的吸附器官与受体细胞的特殊位点的接触与结合•吸附的专一性：寄主专一性：位点专一性：T3、T4、T7----脂多糖；T2、T6----脂蛋白；雄性专一噬菌体----性纤毛。•过程：尾丝散开，刺突固着于特异性位点T4吸附对于T类噬菌体的吸附器官是尾丝和刺突，尾丝首先触及寄主细胞表面，然后刺突固定。2、侵入penetration噬菌体核酸物质进入受体细胞•T4：尾部的酶水解细菌细胞壁肽聚糖层产生一小孔,尾鞘收缩,尾髓伸入细胞中,头部的核酸被压进细菌细胞,蛋白质外壳留在细胞外。•M13,f1,fd：其DNA自性纤毛中空管侵入寄主细胞。T4核酸的侵入过程M133、增殖replication噬菌体核酸物质及蛋白质在寄主细胞内的合成•早期及次早期的转录与转译作用•细菌DNA被DNase破坏•噬菌体核酸的复制•后期的转录与转译作用•T4DNA复制的特点：一是由于T4DNA中的胞嘧啶被羟甲基胞嘧啶取代，所以在其DNA复制之前，必须由噬菌体编码的酶合成羟甲基胞嘧啶，并且在T4DNA合成后，羟甲基胞嘧啶被葡萄糖基化，以保护T4DNA免遭E.coli核酸酶破坏。二是在T4DNA复制过程中，由6—8个拷贝结合形成非常长的DNA链。(多连体)增殖过程4．成熟maturity/(装配)（assembly）在增殖期合成的噬菌体的核酸和蛋白质按一定的顺序装配成噬菌体颗粒5．释放release子代噬菌体脱离寄主细胞而得以释放四、噬菌体一步生长曲线OneStepGrowthCurveT2•潜伏期latentphase从噬菌体吸附细菌细胞至细菌细胞释放出新的噬菌体的最短时间。•裂解期risephase从被感染的第一个细胞裂解至最后一个细胞裂解完毕所经历的时间。•平稳期plateau指被感染的宿主已全部裂解，溶液中噬菌体数达到最高点后的时期。裂解量burstsize每个被感染的细菌释放新的噬菌体的平均数不同的噬菌体的裂解量不同，T2为150左右（5~447），T4约100，fx174约1000，而f2则可高达10000。潜伏期平均噬菌体数裂解期末平均噬菌体数裂解量五、溶源性lysogeny1．名词解释(1)敏感细菌sensitivebacteria(2)烈性噬菌体virulentphage(3)温和性噬菌体temperatephage(4)原噬菌体prophage(5)溶源性细菌lysogenicbacteria：E.coliB(l)(6)溶源化lysogenization2．溶源性细菌的基本特征(1)具有遗传性(2)能自发裂解(3)能被诱发裂解(4)具免疫性(5)可以复愈(6)可获得新的生理特性3．温和性噬菌体的存在状态(1)游离态：游离的具有感染性的噬菌体粒子(2)整合态：整合或附着在细菌染色体上处于原噬菌体的状态(3)营养态：在寄主细胞内处于复制和装配的状态六、噬菌体的生活史1．烈性噬菌体的生活周期（lyticlifecycle）2．温和性噬菌体的生活周期lyticandlysogeniclifecycle七、噬菌体的分离检查•分离样品的制备根据感染特征，选择所需采集的标本的种类除去杂菌(离心或过滤)诱导噬菌体的产生(uv或丝裂霉素C)•样品接种噬菌体标本可接种于生长在培养液或营养琼脂平板中的细菌培养物。•噬菌体存在的表现细菌培养液变清或细菌平板上出现噬菌斑1．噬菌斑（plaque）在细菌菌苔平板上，由于噬菌体感染，使寄主细胞不断裂解而形成的肉眼可见的空斑。空斑中的细菌被全部或部分裂解。•噬菌斑形成：噬菌体宿主细胞培养基一些噬菌斑的形状2．噬菌体效价测定方法效价（titer）：每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位（plaque-formingunit,PFU）。(1)双层琼脂法：方法：底层：2%营养琼脂，上层：3~4ml1%营养琼脂+0.2ml宿主菌液+0.1ml样品液；培养16~24hrs后观察。优点：定量性好，结果清晰；缺点：费时，麻烦。(2)单层琼脂法:(3)载片快速法:八、噬菌体的污染与防治1.污染现象2.污染原因3.预防措施(1)严格控制活菌体排放，使噬菌体在环境中得不到繁殖。(2)选育和使用抗噬菌体的菌种。(3)几株亲缘不同的菌种定期轮换使用。(4)药物防治4.污染后的补救九、酵母的病毒（Killer因子）1.杀伤因子：Saccharomycescerevisiaekiller是具有dsRNA作遗传物质的病毒样颗粒(virus-likeparticles，VLP)，其本质是酵母的拟病毒，需要辅助病毒L-Amycovirus(dsRNA)。2．有关酵母菌的类型：•毒性株：能分泌一种多肽毒素或糖蛋白毒素•中性株：不分泌毒素，也不为毒性株所杀死•敏感株：不分泌毒素，但能为毒性株所杀死