室内检验员专业技术知识之重量、活力等测定

1室内检验员专业技术知识之重量、活力等测定2第十二章重量测定第一节概述一、种子千粒重的含义种子重量测定是指测定一定数量种子的重量,通常是指测定1000粒种子的重量,即千粒重。种子千粒重是指种子质量标准规定水分的1000粒种子的重量,以克为单位。千粒重测定原则是从充分混合的净种子中随机数取一定数量的种子,称其重量。3第一节概述二、千粒重测定目的和意义1.种子千粒重反映种子的饱满程度,是种子质量的指标之一。2.根据千粒重,可以做到精量播种,节约用种。3.千粒重是作物产量构成的要素之一。4第二节测定程序一、测定方法分为百粒法、千粒法和全量法三种。二、百粒法测定程序1.数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品8个重复,每个重复100粒。2.试样称重:8个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重。4.换算成规定水分下的千粒重。5.结果报告。5第二节测定程序三、千粒法测定程序1.数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品2个重复,大粒种子每个重复500粒,中小粒种子每个重复1000粒。2.试样称重:2个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重.两份重量的差数与平均数之比不能超过去5%,否则再做一份重复,直至达到要求.取差数最小的两份重复平均数来计算千粒重。4.换算成规定水分下的千粒重。p1525.结果报告。6第二节测定程序四、全量变法测定程序1.数取试样:数取净度分析后的全部净种子的种子总粒数。2.试样称重:小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.换算成规定水分下的千粒重。4.结果报告。7第十四章生活力的四唑测定实际工作中如种子贸易时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态则难以通过发芽测定得到结果。种子生活力测定可以满足这一需要，四唑测定可以测定出休眠种子样品的生活力百分率。四唑测定方法于1942年由德国的G.Lakon教授发明，第2次世界大战期间传入美国。随着四唑测定技术的发展，ISTA(国际种子检验协会)于1950年成立四唑测定技术委员会，致力于种子四唑测定技术的发展。2003年出版《ISTA四唑测定工作手册》，列有120种农业和122种林业种、属的四唑测定方法。8第一节概述一、生活力概念种子生活力（seedviability）是种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。9第一节概述二、种子生活力测定的意义1.可以测定休眠种子的生活力2.快速预测种子发芽能力种子贸易中，常因时间紧迫，不可能采用正规的发芽试验来测定发芽力，这是因为发芽试验所需的时间更长。林木种子可用生活力代替发芽力。10第一节概述三、四唑染色测定的原理在种子组织活细胞内脱氢酶的作用下，无色的氯化三苯基四氮唑，接收活种子代谢过程中呼吸链上的氢，在活细胞里变成还原态的红色、稳定、不扩散的三苯基甲月替(TriphenylFormazam)。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。112，3，5-氯化三苯基四氮唑三苯基甲月替(无色)(红色)12第一节概述种子有无生活力主要取决于胚和(或)胚乳(或配子体)坏死组织的部位和面积的大小，而不一定在于颜色的深浅。颜色的差异主要是将健全的、衰弱的和死亡的组织判别出来。根据以上理由和所用指示剂，把这种测定称为“局部解剖图形的四唑测定”(topographicaltetrazoliumtest)。这就是说，是根据种子胚和活营养组织局部解剖染色部位及颜色状况，鉴定种子胚的死亡部分，查明种子死亡的原因。13第一节概述四、四唑测定适用的范围收获后需马上播种的种子；具有深休眠的种子；发芽缓慢的种子；要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于测定发芽末期个别种子的生活力，特别是怀疑有休眠时；测定已萌发种子，或收获期间存在的不同类型和/或加工的损伤（热害、机械损伤或虫蛀等）种子；解决发芽试验中存在的问题，如不清楚不正常幼苗产生的原因或怀疑杀菌剂的处理效果等。14第一节概述五、四唑测定方法的特点四唑测定是一种世界公认、广泛应用、实用方便、省时快速、结果可靠的种子生活力检验方法。具体地说具有以下几个特点：1.原理可靠，结果准确。如能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3%～5%。2.不受休眠限制。3.方法简便、省时快速。4.成本低廉。四唑测定也有其缺陷：如对种子检验员经验和技能要求较高；结果不能提供休眠的程度；处理种子不会像发芽试验能反映药害情况。15第二节试剂的配制和仪器设备一、试剂的配制1．四唑溶液2．磷酸缓冲液3．乳酸苯酚透明液采用乳酸苯酚透明液，是使小粒豆类和牧草种子经四唑染色后使种皮、稃壳或胚乳变为透明,以便透过这些部分清楚地观察其胚主要构造的染色情况。16第二节试剂的配制和仪器设备二、仪器和设备四唑测定的主要仪器设备与发芽试验设备相同，可采用其设备：如电热恒温箱或发芽箱、冰箱。四唑测定需配备的小器具有：种子切割工具如解剖刀或刀片、小针、切割垫板等；种子预湿需要纸、毛巾、烧杯等器具；染色时，要准备有盖的不同规格的染色盘、棕色加液器、镊子、吸管等；观察器具如体视显微镜或放大镜；以及保护器具如手套、眼睛保护镜、废液处理容器等。17第三节四唑测定程序一、试验样品的来源数取试验样品来源必须是净种子。净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样品中直接随机数取。一般随机数取100粒种子，2～4个重复或少于100粒的若干副重复。如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子。委托检验可以直接从经充分混合的种子样品中随机数取种子。18第三节四唑测定程序二、种子预处理在正式测定前，对所测种子样品需经过预处理（预措预湿），其主要目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备和促进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。19第三节四唑测定程序预措---是指在种子预湿前除去种子的外部附属物和在种子非要害部位弄破种皮，如水稻种子需脱去内外稃壳，豆科硬实种子刺破种皮等，但须注意，预措不能损伤种子内部胚的主要构造。绝大多数种子不须进行预措处理，但有一些种子在预湿前要进行预措处理。预湿是四唑染色测定的必要步骤。预湿方法目前常用的有以下两种方法：20第三节四唑测定程序1．缓慢润湿缓慢润湿是按种子发芽试验所采用方法，将种子放在纸床上或纸巾间，让其缓慢吸湿。该法适用于那些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及已经劣变的种子或过分干燥的种子。缓慢润湿可采用下面两种方法：①纸卷或纸间预湿②纸床上预湿21第三节四唑测定程序2．水中浸渍水中浸渍是将种子完全浸入水中，种子吸水快、均匀，并可缩短预湿时间。该法适用于种子直接浸入水中不会造成组织破裂损伤，并不会影响鉴定结果的种子种类，包括水稻、小麦、大麦、燕麦、黑麦草、黑麦、玉米等，详见表14-l。浸种温度一般采用20～30℃或30℃水温。22第三节四唑测定程序三、染色前的样品准备为了使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的主要构造，大多数种子在染色前必须采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营养组织暴露出来。23第三节四唑测定程序1．不须样品准备种皮渗水性良好的豆类种子，在四唑溶液里染色时，就能随着四唑溶液的渗入而吸胀，并在染色后剥去种皮就可正确鉴定，这类种子不须样品准备。2．沿胚纵切3．近胚纵切24第三节四唑测定程序4．上半粒纵切5．斜切种子6．剥去种皮7．横切胚轴和盾片8．平切果种皮和胚乳，暴露出胚的构造9．穿刺或切开胚乳10．切去种子基端11．横切胚乳25图14-1一些常见作物种子的准备示意图1．禾谷类和禾本科牧草种子通过胚和约在胚乳四分之三处纵切。2．燕麦属(Avena)和禾本科牧草种子靠近胚部横切。3．禾本科牧草种子通过胚乳末端部分横切和纵切。4．禾本科牧草种子刺穿胚乳。5．通过子叶末端一半纵切，如莴苣属(Lactuca)和菊科(Asteraceae)中的其他属。6．纵切面表明似上述第5种方式进行纵切时的解剖刀部位。7。沿胚的旁边纵切[伞形科(Apiaceae)中的种和其他具有直立胚的种]8．针叶树种子沿胚旁边纵切。9．在两端横切，打开胚腔，并切去小部分胚乳(配子体组织)o26第三节四唑测定程序四、四唑染色四唑溶液必须完全淹没种子，溶液不能直接露光，因为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效果。按表14-1（GB/T3543.7-1995表1）的要求，将经过样品准备或不须准备的规定数量种子分别放入四唑溶液里染色。小粒种子可用直径6cm培养皿，大、中粒种子可用9cm培养皿或更大的容器，特别细小的种子可包在滤纸内，分别放入容器里。然后加入适宜浓度的四唑溶液，移置一定温度的恒温箱内进行染色反应。27第三节四唑测定程序五、鉴定前处理为了确保鉴定结果的正确性，还应将已染色的种子样品，加以适当的处理，再进一步使胚的主要构造和活的营养组织明显地暴露出来，以便观察鉴定。1．不须处理，直接观察适用于染色前已进行样品准备的整个胚、摘出的胚中轴、纵切或横切的胚等样品。因为这些种子胚的主要构造已暴露在外面，所以不须附加处理，就可直接观察鉴定。28第三节四唑测定程序2．轻压出胚，观察鉴定3．扯开营养组织，暴露出胚4．切去一层营养组织，暴露出胚和活营养组织5．沿胚中轴纵切，暴露胚的构造6．沿种子中线纵切，暴露出胚和活营养组织29第三节四唑测定程序7．剥去半透明的种皮或种子组织，暴露出胚8．切去切面碎片或掰开子叶，暴露出胚9．剥去种皮和残余营养组织，暴露出胚10．乳酸苯酚透明液的应用加入2—4滴乳酸苯酚透明液，适当摇晃，使其与种子良好接触，38℃恒温箱保持30～60min，经清水漂洗或直接观察。30第三节四唑测定程序六、观察鉴定一般鉴定原则是，凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染色部分已超过二分之一，或超过容许范围，以及组织软化的，完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软化腐烂或异常、虫蛀、损伤的均为无生活力种子。31123456789101112图14-2玉米种子四唑染色图谱1.有生活力——胚全染成深红色。2.有生活力——仅盾片两端少部不染色。3.有生活力---仅盾片先端及胚芽鞘先端及少部不染色4.有生活力——胚芽鞘先端不染色.5.有生活力—胚芽鞘先端及胚根顶端2／3以下不染色，种子根区染色6.无生活力——胚根大部不染色，已波及种子根区。7.无生活力——胚芽全不染色。8.无生活力——胚轴不染色。9.无生活力—盾片与胚轴连接处不染色。10.无生活力——盾片两端不染色部份已超过1／2。11.无生活力——盾片1／2以上不染色。12.无生活力——胚全不染色。3212345678910图14-3水稻种子四唑染色图谱1.有生活力——胚全染成深红色（不染部分属胚芽鞘和盾片间隙）。2.有生活力——盾片先端染色稍浅。3.有生活力---盾片先端及胚芽鞘先端不染色4.无生活力——胚根全不染色.5.无生活力—胚芽先端、胚芽鞘及盾片先端染色较浅。6.有生活力——胚全染成红色。7.有生活力——盾片全部染色，胚根胚芽鞘部分染色较浅。8.无生活力—盾片全不染色。9.无生活力——胚大部分染色较浅。10.无生活力——胚全不染色。33123456789图14-4棉花种子四唑染色图谱1.有生活力——染色后将子叶分开的胚可见两片子叶及怔根均染成红色。2.有生活力——胚全染成深红色3.无生活力——胚根中段不染色。4.无生活力——子叶关键部位不染色。5.无生活力——子叶基部不染色。6.无生活力——胚根中部很长一段不染色。7.无生活力——