k12获奖课件-实验室检验_邱军

1实验室检验血液的一般检验2血液的一般检验•红细胞压积容量（ＰＣＶ）测定•血红蛋白测定（Hb）•红细胞（RBC）计数•白细胞（WBC）计数•白细胞分类计数3红细胞压积容量（ＰＣＶ）测定是指将抗凝血液置于特制的温氏管中，并经离心沉淀，沉出压紧的红细胞体积所占全血体积的百分比。主要用于脱水程度及贫血的判定。4测定方法：红细胞压积管法（温氏法）1.用尾端装有橡皮乳头的长针头，吸取ＥＤＴＡNa2抗凝血液，插入温氏管底部，自下而上注入血液至刻度“10“处。2.将温氏管置于电动离心机中，以3000r/min速度离心30~60min，取出读取红细胞柱的高度数，即得红细胞压积值。正常值：家畜红细胞压积容量正常值（％）参见下表。标准制的换算：PCV(L/L)=PCV(%)╳0.01。例如马PCV30.2%，换算为标准制乘以0.01，即得0.302L/L。5家畜红细胞压积容量正常参考值（％）畜种PCV畜种PCV资料来源X±SX±S马30.2±2.96绵羊35.0±3.0牦牛值：由青海医学院测定。犬、猫值：谢慧胜编著《小动物疾病防治手册》其余：时玉声等主编《兽医临诊检验手册》骡32.77±2.88山羊29.74±2.76黄牛36.01±4.55奶山羊35.46±1.41水牛31.12±3.7哺乳仔猪40.68±5.15乳牛37.04±2.78后备仔猪39.47±3.81牦牛43.97±3.08犬45.5(37.0~55.0)骆驼32.8±2.43猫37.0(24.0~45.0)6诊断意义：可呈现增高或降低。1.红细胞压积容量值增高多因机体脱水而血液浓缩，使红细胞数相对增多所致。可见于各种脱水性疾病过程中。是判定动物脱水程度的标准之一，并可依此而计算补液数量，但要结合临床症状及其他检测方法综合判断之。•如病畜精神稍差，口粘膜轻度干涩，皮肤弹性实验持续时间2~4S，血浆蛋白8％~9%，PCV达50％，可提示为轻度脱水。•病畜精神差，喜卧少动，口粘膜干涩，皮肤弹性实验持续时间6~10S，血浆蛋白9％~10%，PCV达55％，可提示为中度脱水。•病畜精神极差，不能站立，口粘膜极干涩，皮肤弹性实验持续时间20~45S，血浆蛋白12g％，PCV达60％，可提示为重度脱水。72.红细胞压积容量值降低多为红细胞减少所致。可见于各型贫血及伴有贫血的其他疾病过程中。注意事项1.温氏管壁一侧自上而下标有0－10刻度，供测定血沉之用；另一侧自下而上标有0－10刻度，供测定PCV用，0－10之间共有100个刻度，测定时正确选用。2.抗凝剂宜选用EDTANa2，因其不改变细胞体积及形态。3.血样不能溶血，充入管内的血液不能有气泡。4.读取结果时，不能把细胞层最上层的灰白层（白细胞和血小板）计入。返回8血红蛋白测定（Hb）主要用于贫血的诊断测定方法：沙利氏法1.原理：红细胞与盐酸作用生成褐色盐酸高铁血红蛋白，再经稀释与标准色柱比色，即可求得血红蛋白含量。2.试剂：0.1mol/L盐酸溶液：浓盐酸8.5ml加蒸馏水至1000ml。3.操作：1)于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度“20“或重量刻度“2“处。92)用沙利氏吸血管吸取被检血液至“20“刻度处，并用棉球或纱布拭去管壁外血液。迅速将沙利氏吸血管插入测定管底部盐酸液中，缓慢挤出血液，再吸取上部清液，反复冲洗沙利氏吸血管2~3次，并混匀，静置10min。3)沿着管壁加入蒸馏水或0.1mol/L盐酸溶液，逐步稀释至与标准色柱色调一致后，读取重量（或百分）刻度值报告结果。正常值：标准制换算：血红蛋白(g/L)=血红蛋白（g/dl）╳10诊断意义1.血红蛋白含量增高常见于机体脱水而致血液浓缩的各种疾病过程中。2.血红蛋白含量降低可见于各种贫血性疾病，如各型贫血、马传染性贫血、重症寄生虫病等。10家畜血红蛋白正常参考值（沙利氏法）畜种血红蛋白(g%)畜种血红蛋白(g%)资料来源X±SX±S马12.77±2.05绵羊7.20±1.03牦牛值：由青海医学院测定。犬、猫值：谢慧胜编著《小动物疾病防治手册》其余：时玉声等主编《兽医临诊检验手册》骡12.74±2.18奶山羊8.33±0.75黄牛10.99±3.02山羊7.0±11.0水牛9.5±1.0猪11.16±1.42乳牛12.3±1.66犬14.9(12.0~18.0)牦牛11.17±1.06猫12.0(8.0~14.0)骆驼11.80±1.03鸡6.14±1.03返回11红细胞（RBC）计数是将一定量的供检血液经一定倍数稀释后，计数一定容积内的红细胞数，并换算为每1L血液中的红细胞数。主要用于贫血性疾病的判定。12计数法：用显微镜计数法1.红细胞稀释液1)0.9%氯化钠溶液2)赫姆氏液配法为氯化钠1g，氯化汞0.5g，结晶硫酸钠5g，加蒸馏水溶解至总量200ml，再加石炭酸品红溶液数滴，借以与白细胞稀释液区别。2.计数方法1)血液稀释：取清洁、干燥小试管一支，加红细胞稀释液4ml，而后用沙利氏吸血管吸取供检血液至10刻度(10μl)处，用棉球或纱布拭去管壁外血液，将沙利氏吸血管插入小试管内稀释液中，挤出血液，并吸洗2~3次，混匀。血液被稀释400倍（因家畜红细胞比人多，200倍稀释不易计数）。132)充液：取清洁、干燥的计数板和专用于计数板的盖玻片。将盖玻片紧密覆盖于血细胞计数板上；将计数板于显微镜载物台上，用低倍镜先找到计数室；然后用小吸管吸取已经摇匀稀释血液，使吸管尖端血接触盖玻片边缘和计数室交界处，稀释血液即可自然流入并充满计数室。3)计数：计数室充液后，应静置1~2min，待红细胞分布均匀并下沉后开始计数。计数红细胞应使用高倍镜。一般计数红细胞计数室四角及中央一个中方格或呈对角线中方格（共5个中方格）内的红细胞数（即80个小方格内的细胞数）。为避免重复和遗漏，计数每个中方格内红细胞数时，均应从左至右，再从右至左，计数完16个小方格内的红细胞数。14在计数每个小方格内红细胞时，只计压在上边和左边线上的红细胞，不计压在下边和右边线上的红细胞。即所谓“数左不数右，数上不数下“的计数法则。红细胞呈圆形中央透亮，勿与异物混淆。4)计算按下式计算红细胞计数（万/mm3=R╳5╳10╳400=R╳20000R-----计数得5个中方格（80个小方格）内红细胞数。5------因为所计数5个中方格的面积为1／5mm2，要换算为1mm2时，应乘以5。10-----因为计数室深度为0.1mm，要换算为1mm时，应乘以10。400----为血液被稀释倍数。15标准制的换算：红细胞（1012／L）＝红细胞（万／mm3）╳0.01╳1012／L。例如正常值为652万／mm3，则每升血液中红细胞数＝652╳0.01╳1012／L＝6.52╳1012／L。正常值健康家畜红细胞正常值（万／mm3）约为：马、牛600~700，绵羊900，山羊1300，猪600，鸡350，犬6700。详见下页表。诊断意义1.红细胞数增多可分为相对性和绝对性增多。相对性增多，常见于脱水而致血液浓缩的疾病过程中；绝对性增多，可见于因患慢性心、肺疾病导致机体长期缺氧，或长期生活在高原低氧地区等情况下。2.红细胞数减少常见于各种贫血性疾病过程中，为贫血的特征。16家畜红细胞正常值（单位：万／mm3）畜种红细胞正常值畜种红细胞正常值资料来源X±SX±S马793.3±140.1奶山羊1720.0±303.0牦牛值：由青海医学院测定。犬、猫、兔值：谢慧胜编著＜＜小动物疾病防治手册＞＞其余：时玉声等主编＜＜兽医临诊检验手册＞＞骡755.4±130.2猪550.0±33.5驴542±23.2仔猪626.0±84.0黄牛724.2±157.4鸡227.0±31.0水牛591.0±98.0鸭296.0±50.0乳牛597.5±86.8鹅297.0±15.3牦牛737±156犬680.0(550.0~850.0)骆驼988.0±178.0猫750.0(550.0~1000.0)绵羊842.0±12.0家兔570.0(450.0~700.0)返回17返回18白细胞（WBC）计数是用冰醋酸将血液中的红细胞破坏后，计数一定容积的白细胞数，再推算出每升血液中的白细胞数（109／L；旧单位：个／mm3）19计数法：用显微镜计数法1.白细胞稀释液1％－3％冰醋酸溶液或1％盐酸溶液，均可作稀释液。其中加1％结晶紫数滴，使溶液呈淡紫色，以便与红细胞稀释液相区别。2.计数方法1)血液稀释：试管稀释法：取清洁、干燥小试管一支，加白细胞稀释液0.38ml，用沙利氏吸血管吸取供检血液至20刻度(20μl)处，加入试管内，混匀，即可得20倍稀释的血液。20白细胞稀释管稀释法：用白细胞稀释管吸取供检血液至“0.5“刻度处，拭去管壁外血液，再吸取白细胞稀释液至“11“刻度处，用拇、食二指捏住吸管两端，振荡混匀即得20倍稀释血液。2)充液与红细胞计数法相同。3)计数基本与红细胞计数法相同，所不同的是将计数室四角上的4个大方格内的白细胞依次全部计数完。白细胞呈圆形有核，周围透亮，勿与异物相混淆。4)计算可按下式计算。白细胞计数（万/mm3=W╳（1／4）╳10╳20=W╳5021W-------为4个大方格（白细胞计数室）内白细胞总数1／4------因4个大方格的面积为4mm2，要换算为1mm2，应乘以1／4。10------计数室的深度为0.1mm，换算为1mm，应乘以10。20------为血液的稀释倍数。标准制的换算：白细胞（109／L）＝白细胞（个／mm3）╳0.001╳109／L。例如正常值为7000个／mm3，则每升血液中白细胞数＝7000╳0.001╳109／L＝7╳109／L。3.诊断意义1)白细胞总数增多可见于多种细菌感染性疾患、各种重剧炎症及败血性疾病、白血病等。2)白细胞总数减少可见于某些病毒性疾病（如猪瘟、流行性感冒、马传染性贫血等）、牛梨形虫病、牛泰勒虫病、马梨形虫病、长期使用磺胺类药及氯霉素、X线照射、恶病质及各种疾病的濒死期等。22家畜白细胞正常值（单位：千／mm3）返回畜种白细胞正常值（千／mm3）畜种白细胞正常值（千／mm3）资料来源范围平均值范围平均值马黄牛、乳牛7.0~9.07.0~8.08.07.5猪鸡11.0~16.018.0~30.013.020.0东北农学院主编《临床诊疗基础》水牛绵羊山羊8.0~9.08.0~9.57.0~13.08.88.010.0犬猫家兔6.0~17.05.5~19.56.0~13.011.512.59.0谢慧胜等编著《小动物疾病防治手册》23白细胞分类计数是指将血液制成薄片，染色后油镜观察，求出各种白细胞所占百分比。1.步骤方法一般分血片制作、染色、镜检分类计数三步进行。1)血片的制作：选取一边缘光滑平整的载玻片作推片，用左手的拇指和中指夹持一洁净载玻片，取被检血液一滴，置于其右端，右手持推片置于血滴前方，并轻轻向后移动推片，使与血滴接触，待血液扩散开后，再以300~400角度向前均速同力推进涂抹，即形成一血膜，迅速自然风干。所涂24血片，血液分布均匀，厚度适当，对光观察呈霓虹色，血膜位于玻片中央，两端留有适当空隙，以便注明畜别、编号及日期，即可染色，反之，重行制作，直至合格后，再行染色。2)血片染色I.瑞特氏染色法瑞特氏染色液的配制：瑞氏染粉0.1g甲醇60ml将染粉置于研体中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将已溶解的染液倒入洁净的棕色瓶，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此连续操作，直至染料全部溶解和甲醇用完为止。在室温中保存1周（每日振摇一次）后，过滤，即可应用。25染色：先用玻璃铅笔在血膜两端各划一线，以防染液外溢，将血片平放于水平支架上；滴加瑞特氏染液于血片上，直至将血膜盖满为止；待染色1~2min后，再加等量磷酸盐缓冲液（pH6.4）并轻轻摇动或用口吹气，使染色液与缓冲液混合均匀，再染色3~5min；最后用蒸馏水冲洗血片，待自然干燥或用吸水纸吸干后镜检。所得血片呈樱红色者为佳。3)镜检计数先用低倍镜做大体观察，如染色合格再换用油镜计数。