木质部汁液提取

木质部汁液的收集:采用依靠植物根压自然收集法(Liang&Zhang,1997;Buhtzetal.,2004)。具体作法是:脱脂棉经稀盐酸、蒸馏水、去离子水清洗,烘干,装入洁净的50mLEppendorf管中待用。将番茄苗移至阴处,在距根基约4cm处用经丙酮浸泡消毒的刀片快速切断茎秆,用脱脂棉蘸去离子水,快速擦洗与根系相连的切口并吸干表面水分,开始的第一滴汁液用脱脂棉弃去。然后用200μL的Eppendorf移液枪循环往复吸取溢出的汁液于10mL的Eppendorf管中,每个重复5株,收集12h后停止收集,称重,减去收集前离心管的质量,计算各处理收集的木质部汁液量。将收集液贮于超低温冰箱(-70℃以下)中待测。韧皮部汁液的收集:参照King&Zeevaart(1974)的方法,将收集木质部汁液时切下的番茄幼苗地上部,用去离子水洗净茎切口并用脱脂棉吸干表面水分,3株一起插入装有15mL25mmol·L-1的EDTA2Na2溶液的小塑料瓶中,放置于遮光密闭的培养箱中,保持相对湿度大于95%,20℃下收集韧皮部汁液24h,计算单位时间番茄韧皮部渗出养分数量。将收集的韧皮部汁液贮于超低温冰箱(-70℃以下)中待测。白羽扇豆在缺磷条件下培养到第17天时,收集木质部伤流液及韧皮部汁液。木质部伤流液的收集采用薛应龙[6]的方法,在早晨8:00～10:00收集2h。韧皮部汁液收集采用King等[7]的方法。木质部伤流液和韧皮部汁液在HPLC测定前均稀释10倍。1.3有机酸的分离与鉴定根系分泌有机酸的收集液在10000g离心10min,取上清液用于HPLC分析;根组织提取液在测定前均稀释10倍进行HPLC分析。有机酸分离条件:使用岛津LC210A高效液相色谱仪,紫外检测器SPD210A,柱箱CTO210A,手动进样器的定量环为20uL,流动相为0.25mmolöL的KH2PO4,pH为2.25,流速为0.7mLömin,柱温26℃。有机酸的确定采用内标法和外标法,含量的计算采用峰面积法。