[中学联盟]高二生物选修三《2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体》课件(共29张PPT)

学科网邢春荣•学习目标：1动物细胞融合过程2制备单克隆抗体的原理、过程和应用重点：单克隆抗体的制备原理和应用难点：单克隆抗体的制备过程知识回顾？？？？再分化？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方式：物理法、化学法植物细胞杂交技术有什么用途？三、用途：获得杂种植株学科网1、动物细胞融合的基本原理是什么？2、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞融合的诱导方式有什么不同？学科网一、动物细胞融合（细胞杂交）1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2.结果：形成单核的杂交细胞3.原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。4.诱导方式：物理法：化学法：生物法：电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）灭活的病毒例如：仙台病毒不同DNA的两个细胞融合有丝分裂两个完整的杂交细胞灭活的病毒？这是什么？？？用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程5.过程：杂交细胞细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。6.意义和应用：思考：动物细胞融合过程和植物体细胞杂交有何不同？植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途细胞膜的流动性细胞的全能性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株？？？？制备单克隆抗体【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞BBA学科网三、单克隆抗体1、抗体是由何种细胞产生的？浆细胞（效应B细胞）2、抗体是如何产生的？抗原刺激B淋巴细胞增殖分化成浆细胞3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体知识回顾传统的方法得到的抗体具有什么特点？（2）缺点：特异性差、产量和纯度都很低。1.传统抗体的制备向动物体内反复注射_____，使动物产生抗体，然后从_____中分离所需抗体。抗原血清（1）方法学科网三、单克隆抗体McAb1.概念：由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备思考：1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术２、实验原理：动物细胞融合单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖（经过免疫的）B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养3、单克隆抗体的制备过程第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。特异性强，灵敏度高瘤-瘤细胞B-瘤细胞B-B细胞动物细胞融合第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。动物细胞培养特别提醒：1.①B淋巴细胞的特点:有产生单一抗体的能力，但不能大量增殖②骨髓瘤细胞的特点：能在体外大量增殖，单不能产生抗体③杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。2.筛选的目的：第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。3.技术手段：动物细胞融合、动物细胞培养4.培养杂交瘤细胞的方式：体外培养；注射到小鼠腹腔内增殖5.单克隆抗体的特点：特异性强，灵敏度高学科网细胞骨髓瘤细胞细胞融合（已免疫）B淋巴筛选瘤细胞杂交细胞培养选出能产生特定抗体的细胞群继续培养体外培养体内培养从培养液或小鼠腹水中取出单克隆抗体四、单克隆抗体的应用１.作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点２.可用于治疗疾病３.可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹“。）“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向药物为弹头本节小结两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个优势——灭活病毒——杂交瘤细胞——单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势.练习：1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是（）A、融合的原理B、融合的优点C、融合的诱导手段D、融合的过程练习：2、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A、克服远缘杂交不亲和B、制备单克隆抗体C、培育新物种D、生产杂种细胞练习：3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A、经过免疫的B淋巴细胞B、不经过免疫的T淋巴细胞C、经过免疫的T淋巴细胞D、不经过免疫的B淋巴细胞练习：4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③练习：5、(2006，广雅中学考题)研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合练习：6．只能使动物细胞融合的常用诱导方法（）A．PEGB．灭活的病毒C．电刺激D．离心7、“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单抗上连接抗癌药物3.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：。（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得__________细胞，该细胞能够产生___________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）B过程是一个____________过程，该过程的进行需要灭活的______或_____________的诱导。效应B抗体抗原细胞融合病毒聚乙二醇4、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1）_______________技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________________。（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________________。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备淋巴细胞的_______________特点。（6）淋巴细胞是由动物体_________中的______________细胞分化、发育而来。（7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓造血干细胞下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。(2)、该方案能达到预期效果吗？为什么？(4)、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(1)、该实验方案的目的是__________(3)、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______(5)、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段。制备单克隆抗体已免疫B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群AC不能因为没有抗原注入小鼠体内,无法获得产生此抗体的效应（免疫的）B细胞.注射到小鼠腹腔自我评价第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。