常见大肠杆菌感受态的特点和用途解析

1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argFU169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+,phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE33:BL21(DE3pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-,gal,dcm(DE3,pLysS,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC,φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu7697,galU,galK,rps,(StrrendA1,nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-,recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI,BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:(1选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;(2利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coliJM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。8:E.coliJM110要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别用途特征Xl1-Blue菌株基因型:endA1gyrA96(nalRthi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZM15]hsdR17(rK-mK+。特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途:分子克隆和质粒提取。BL21(DE3菌株基因型:F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5]。特点:该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途:蛋白质表达。BL21(DE3ply菌株基因型:F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-λ(DE3pLysS(cmR。特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途:蛋白质表达DH5α菌株基因型:F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argFU169,hsdR17(rK-,λ–特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型:endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proABe14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+。特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B菌株基因型:F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBCΦ80dlacZΔM15ΔlacX74endA1recA1deoRΔ(ara,leu7697araD139galUgalKnupGrpsLλ-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDH10B。hostforpUCandotherα-complementationvectors;pBR322usefulforgeneratinggenomiclibrariescontainingmethylatedcytosineoradenineresidues,usefulforplasmidrescueprocedures。ELECTROMAXDH10BT1CELLS说明:DH10B细胞是高转化效率的E.coli,可以完美应用于大多数实验应用。DH10B基因型具有以下特点:?lacZΔM15用于重组克隆的蓝/白斑筛选?消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2?endA1突变,可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150kb的质粒,用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型,tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B?T1R。DH10B?的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBCφ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu7697galUgalKλ·rpsL(StrRnupGDH10B?T1R的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBCφ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu7697galUgalKλ·rpsL(StrRnupGtonA