`产品简介：注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意

`技术支持：010-59822661/2665订货电话：[phone]产品简介产品简介产品简介产品简介：：：：本试剂盒采用独特的缓冲系统,结合传统的异丙醇沉淀方法,可快速地获得大量高纯度的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。推荐每次菌液使用量推荐每次菌液使用量推荐每次菌液使用量推荐每次菌液使用量：：：：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在0.5mg~1.5mg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200~400μg左右。注意事项注意事项注意事项注意事项：：：：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。。。。1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的将试剂盒中提供的将试剂盒中提供的将试剂盒中提供的RNaseA全部加入全部加入全部加入全部加入），混匀，置于2-8℃保存。2．使用前先检查溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。3．自备约60ml5MNaCl溶液。4．注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。5．使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。6．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65~70℃水浴中预热。7．TIANRed的使用方法的使用方法的使用方法的使用方法：：：：TIANRed是一种指示剂，用以指示整个操作的正确性，对人体无害。TIANRed为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。如果如果如果如果提取质粒后需要进行转染实验提取质粒后需要进行转染实验提取质粒后需要进行转染实验提取质粒后需要进行转染实验，，，，请客户根据具体的实验条件和自己的实验经请客户根据具体的实验条件和自己的实验经请客户根据具体的实验条件和自己的实验经请客户根据具体的实验条件和自己的实验经验选择是否使用验选择是否使用验选择是否使用验选择是否使用TIANRed试剂试剂试剂试剂。。。。使用时按照TIANRed：溶液P1=1：200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充分裂解；再添加溶液P4之彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤：：：：1.取100ml（根根根根据培养菌体的浓度选择合适的量据培养菌体的浓度选择合适的量据培养菌体的浓度选择合适的量据培养菌体的浓度选择合适的量，，，，低拷贝推荐用低拷贝推荐用低拷贝推荐用低拷贝推荐用200ml）过夜培养的菌液，室温10,000rpm(~11,500×g)离心3分钟收集细菌。注意注意注意注意：：：：菌液较多时菌液较多时菌液较多时菌液较多时，，，，可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中。。。。2.尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请倒置干净的吸水纸上。3.向留有菌体沉淀的离心管中加入10ml溶液P1(请先检查是否已加入请先检查是否已加入请先检查是否已加入请先检查是否已加入RNaseA)，，，，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意注意注意注意：：：：请务必彻底混悬请务必彻底混悬请务必彻底混悬请务必彻底混悬，，，，如如如如果有未彻底混匀的菌块果有未彻底混匀的菌块果有未彻底混匀的菌块果有未彻底混匀的菌块，，，，会影响裂解会影响裂解会影响裂解会影响裂解，，，，导致提取量导致提取量导致提取量导致提取量和纯度偏低和纯度偏低和纯度偏低和纯度偏低。。。。TIANRed试剂的加入对于后续试剂的加入对于后续试剂的加入对于后续试剂的加入对于后续PCR、、、、酶切和测序都没有影响酶切和测序都没有影响酶切和测序都没有影响酶切和测序都没有影响。。。。使用时按照使用时按照使用时按照使用时按照TIANRed：：：：溶液溶液溶液溶液P1=1：：：：200进行混合进行混合进行混合进行混合，，，，彻底颠倒混匀彻底颠倒混匀彻底颠倒混匀彻底颠倒混匀，，，，混匀后的溶液为澄清的混匀后的溶液为澄清的混匀后的溶液为澄清的混匀后的溶液为澄清的红色红色红色红色。。。。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，，，，由于菌体的存在由于菌体的存在由于菌体的存在由于菌体的存在，，，，混混混混匀后的溶液为浑浊的红色匀后的溶液为浑浊的红色匀后的溶液为浑浊的红色匀后的溶液为浑浊的红色。。。。如果提取质粒后需要进行转染实验如果提取质粒后需要进行转染实验如果提取质粒后需要进行转染实验如果提取质粒后需要进行转染实验，，，，不建议客户在不建议客户在不建议客户在不建议客户在实验中加入实验中加入实验中加入实验中加入TIANRed试剂试剂试剂试剂。。。。4.向离心管中加入10ml溶液P2，立即温和地上下翻转6－8次，充分混匀，室温放置5分钟。注意注意注意注意：：：：温和地混合温和地混合温和地混合温和地混合，，，，不要剧烈震荡不要剧烈震荡不要剧烈震荡不要剧烈震荡，，，，以免污染基因组以免污染基因组以免污染基因组以免污染基因组DNA。。。。此时菌液应变得清此时菌液应变得清此时菌液应变得清此时菌液应变得清亮粘稠亮粘稠亮粘稠亮粘稠，，，，如果未变得清亮如果未变得清亮如果未变得清亮如果未变得清亮，，，，可能由于菌体过多可能由于菌体过多可能由于菌体过多可能由于菌体过多，，，，裂解不彻底裂解不彻底裂解不彻底裂解不彻底，，，，应减少菌体量应减少菌体量应减少菌体量应减少菌体量。。。。如果使用了如果使用了如果使用了如果使用了TIANRed，，，，添加添加添加添加P2之后彻底混匀之后彻底混匀之后彻底混匀之后彻底混匀后后后后，，，，溶液的颜色为澄清的紫色溶液的颜色为澄清的紫色溶液的颜色为澄清的紫色溶液的颜色为澄清的紫色。。。。如果在如果在如果在如果在紫色中混杂有浑浊的红色紫色中混杂有浑浊的红色紫色中混杂有浑浊的红色紫色中混杂有浑浊的红色，，，，则说明裂解不充分则说明裂解不充分则说明裂解不充分则说明裂解不充分，，，，继续混匀直至溶液颜色继续混匀直至溶液颜色继续混匀直至溶液颜色继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色完全变为澄清的紫色完全变为澄清的紫色完全变为澄清的紫色。。。。5.向离心管中加入10ml溶液P4，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。然后室温放置10分钟左右。10,000rpm(~11,500×g)离心5-10分钟，将溶液全部倒入过滤器CS中，慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的50ml的管中（客户自备）。注意注意注意注意：：：：加入溶液加入溶液加入溶液加入溶液P4后应立即混合后应立即混合后应立即混合后应立即混合，，，，避免产生局部沉淀避免产生局部沉淀避免产生局部沉淀避免产生局部沉淀。。。。如果离心后倒入过滤器如果离心后倒入过滤器如果离心后倒入过滤器如果离心后倒入过滤器CS中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤。。。。如果菌体过多如果菌体过多如果菌体过多如果菌体过多（（（（100ml），），），），推荐推荐推荐推荐延长延长延长延长离心时间至离心时间至离心时间至离心时间至20-30分钟分钟分钟分钟。。。。如果使用了如果使用了如果使用了如果使用了TIANRed，，，，添加溶液添加溶液添加溶液添加溶液P4之彻底混匀后之彻底混匀后之彻底混匀后之彻底混匀后，，，，溶液为澄清的黄色溶液为澄清的黄色溶液为澄清的黄色溶液为澄清的黄色，，，，如果如果如果如果在黄色中混有紫色在黄色中混有紫色在黄色中混有紫色在黄色中混有紫色，，，，则说明复性不充分则说明复性不充分则说明复性不充分则说明复性不充分，，，，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色黄色黄色黄色。。。。TIANGENBIOTECH(BEIJING)CO.,LTD.Order:010-59822688Technical:010-59822661/2665Toll-free:800-990-60576.向滤液中加入0.35倍滤液体积的异丙醇和1/2倍异丙醇体积的5MNaCl，上下颠倒充分混匀。7.4℃10,000rpm(~11,500×g)离心30分钟，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。8.向管中加入6ml70%乙醇充分漂洗沉淀，4℃10,000rpm(~11,500×g)离心10分钟，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。9.重复步骤810.将离心管敞口室温放置10-20分钟，使乙醇充分挥发后加入1-1.5ml洗脱缓冲液TB，充分溶解沉淀。注意注意注意注意：：：：洗脱液的洗脱液的洗脱液的洗脱液的pH值值值值对于洗脱效率有很大影响对于洗脱效率有很大影响对于洗脱效率有很大影响对于洗脱效率有很大影响。。。。若用水做洗脱液应保证其若用水做洗脱液应保证其若用水做洗脱液应保证其若用水做洗脱液应保证其pH值在值在值在值在7.0-8.5范围内范围内范围内范围内(可以用可以用可以用可以用NaOH将水的将水的将水的将水的pH值调到此范围值调到此范围值调到此范围值调到此范围)，，，，pH值低于值低于值低于值低于7.0会降低洗脱效率会降低洗脱效率会降低洗脱效率会降低洗脱效率。。。。洗脱缓冲液的用量主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要洗脱缓冲液的用量主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要洗脱缓冲液的用量主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要洗脱缓冲液的用量主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度的浓度的浓度的浓度，，，，DNADNADNADNA产产产产物应保存在物应保存在物应保存在物应保存在----20℃20℃20℃20℃，，，，以防以防以防以防DNADNADNADNA降解降解降解降解。。。。质粒质粒质粒质粒DNA浓度及纯度检测浓度及纯度检测浓度及纯度检测浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。纯化的质粒DNAOD260/OD280通常在1.8~2.0左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如果溶解时不使用缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。HighPurePlasmidKit高纯度质粒大提试剂盒高纯度质粒大提试剂盒高纯度质粒大提试剂盒高纯度质粒大提试剂盒（（（（非非非非离心柱型离心柱型离心柱型离心柱型））））目录号目录号目录号目录号：：：：DP116试剂盒内容试剂盒内容试剂盒内容试剂盒内容：：：：试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成DP116(10次次次次)RNaseA（100mg/ml）500μl溶液P1100ml溶液P2100ml溶液P4100mlTIANRed500μl洗脱缓冲液TB30ml过滤器CS10个说明书1份储存条件储存条件储存条件储存条件：：：：第一次使用前将RNaseA加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存一年以上。本试剂盒在室温（15-25℃）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃