医学检验本科毕业论文范例-供参考

毕业论文题目：乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证姓名：学号：系别：年级：专业：指导教师：二○一一年十二月目录中文文献.............................................................英文摘要.............................................................前言...............................................错误!未定义书签。1.材料与方法.......................................错误!未定义书签。1.1试剂盒......................................................1.2仪器........................................................1.3方法........................................................1.3.2．铺板方案...............................................1.3.3．加样步骤...............................................2.结果..............................................................2.1标准曲线与线性范围...........................................2.2准确度（回收率）的验证......................................22.3精密度的验证.................................................2.3.1板内精密度的验证........................................2.3.2板间精密度的验证........................................2.4检测限（LOD）计算...........................................53.讨论.............................................................53.1乙肝表面抗原定量分析的意义..................................53.2常用定量分析方法............................................63.3方法概述....................................................63.4方法学验证内容..............................................63.5结果分析及应用评价..........................................7参考文献............................................................7乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证摘要目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。关键词乙肝表面抗原ELISA定量分析方法学验证ThereificationoftheHBsAgELISAquantitativemethodologyAbstractObject:toverifythequantitativemethodologyofFuzhoublueprintbiologicalengineeringcompanytomakesurewhetheritcabeusedtotheanalysisofClinicalSample.Methods:ELISAquantitativemethodology,makeanApplicationofthestandardHBsAgkitfromtheconcentrationof8ng/mldo2timesdilutedsixconcentrationgradienttoconstituteastandardcurve,testingWith6,3,1.5ng/ml3aconcentrationgradient5accuratelypreciseanddetection.Results:standardcurve,R2=0.997,theaccuracyofRSDof1.5ng/mis16.78%，theRSDthatcannotmeetthedemandofng/mlbasiclevelislessthan15%incommon.TheLODis0.172ng/ml,thetestingofLowconcentrationsamples（1.5ng/ml）arelowerthanhighconcentrationsamplesinbothaccuracyandprecision,whichasaresultmakeitunsuitableforlowconcentrationsampletesting.Conclusion:theELISAquantitativeanalysiskitofHBsAgcannotbeusedfortheanalysisofClinicalSample.KeywordsHBsAgQuantitativeanalysisVerificationMethodology.前言乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。1.材料与方法1.1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。1.2仪器酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。1.3方法1.3.1．溶液配置1×PBS缓冲液的配置：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。标准品的配置：原始标准品浓度为8ng/ml。。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well,共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进行稀释。质控品的配置：50ul/well,共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP管，分别标记为C1，C2，C3，按照下表稀释方案进行稀释。1.3.2．铺板方案取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按照下表铺板方案进编号终浓度（ng/ml）预加1×PBS取剩余（ul）标记（ul）S180标准品120S2460S16060S3260S26060S4160S36060S50.560S46060S60.2560S56060编号终浓度（ng/ml）预加1×PBS取剩余（ul）标记（ul）C16150标准品450C23300C1300300C31.5300C2300300行铺板在相应孔中依次加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul。空白对照加入1×PBS缓冲液。1.3.3．加样步骤加入酶标抗体，50ul/well，震荡。37℃电热恒温培养箱温育60min，取出后洗板4次，加入A、B液,50ul/well，37℃电热恒温培养箱温育15min。加入终止液，50ul/well。酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开MicroplateManager5.2软件，选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。2.结果2.1标准曲线与线性范围标准品理论浓度对应的实测OD值HBsAg(ng/ml)84210.50.25OD1.661.000.620.390.310.27以HBsAg理论浓度为横坐标，所测OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系，结果显示R2=0.9973，显示具有良好的相关性2.2准确度（回收率）的验证质控品理论稀释浓度对应实测浓度值HBsAg(ng/ml)测定值1234566.244.565.736.096.4033.363.293.553.283.481.51.241.271.171.171.20质控品做了3个浓度梯度，每个浓度做了5个复孔，下表是对每个浓度梯度进行准确度（回收率）的验证。HBsAg(ng/ml)测定值（ng/ml）回收率（%）平均回收率RR（%）3个浓度的平均回收率66.24103.9397.5897.07%4.5675.925.7395.576.09101.456.40106.6033.36112.13113.073.29109.5712345AS1C1C2C3PBSBS2C1C2C3PBSCS3C1C2C3DS4C1C2PBSES5C1C3PBSFS6C2C3PBS3.55118.403.28109.403.48115.831.51.2482.4780.561.2784.671.1778.071.1777.671.2079.93结果显示HBsAg6ng/ml和3ng/ml的平均回收率为97.58%，113.07%，满足限度要求在85%-115%的范围内，而HBsAg1.5ng/ml的平均回收率为80.56%，满足方法定量限在80%-120%的范围内。3个浓度梯度的平均回收率为97.7%，显示准确性好。2.3精密度的验证2.3.1板内精密度的验证HBsAg(ng/ml)测定值RSD(%)1234566.244.565.736.096.405.80±0.7412.7333.363.293.553.283.483.39±0.123.501.51.241.271.171.171.201.21±0.043.69上表中RSD(%)这一参数表示相对标准偏差，也就是变异系数CV值，HBsAg6ng/ml的5个复孔的变异系数CV值为12.73%，显示孔间差异较大，精密度不高，但是也符合ng/ml级RSD水平的一般应15%的要求，其中有一孔浓度为4.55，与其它孔比较差异较大，可能是由于操作引起例如加样不准。而3ng/ml,和1.5ng/ml的变异系数CV为3.5%，3.7%，符合显示孔间重复性好，符合ng/ml级RSD水平的一般应15%的要求，精密度高。2.3.2板间精密度的验证从同一