实验三 二次生长曲线

实验三微生物二次生长曲线一、基本原理微生物生长测定方法•干重法•比浊法一般OD在1.0以下时和微生物数量呈正比•生理指标法•稀释平板计数法•血球计数法典型生长曲线延滞期、对数生长期、稳定期、衰亡期二展曲线（二次生长曲线）培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一条双峰的生长曲线。第一类：如葡萄糖、甘露糖、果糖、蔗糖或甘露醇等第二类：如麦芽糖、阿拉伯糖、山梨醇或环己六醇等二次生长现象的机理微生物利用葡萄糖的酶系是固有的，而利用乳糖（或阿拉伯糖、半乳糖等）的酶系是诱导形成的。由于合成新的酶系需要一定的时间，所以在二次生长之间出现了一段停滞期。研究表明不是葡萄糖本身阻遏了乳糖分解的酶系的合成，而是细胞内cAMP的浓度在起作用。当有葡萄糖时，细胞内cAMP水平低；当葡萄糖被利用后，cAMP的浓度上升。CAPactivator(constitutive)cAMPglucoseLacIrepressorAllolactoselactoseCAP=cataboliteactivatorprotein二、实验器材菌种：大肠杆菌培养基：菌种活化培养基：LB液体培养基，M9基础盐培养基生长培养基：K2HPO40.5g，KH2PO40.5g，MgSO4.7H2O0.2g，(NH4)2SO42g，NaCl1g，葡萄糖0.5g，乳糖1g，酵母膏20mg/L,蒸馏水定容至1000ml仪器或其他用具：比色杯，分光光度计四、操作步骤1.将E.coli，接种于肉膏蛋白胨培养基或M9无机盐培养基中，37OC摇床过夜活化；或肉膏蛋白胨培养基37OC摇床过夜活化后，再接入M9培养基中活化3h，供实验接种用。2.配制生长培养基，用1L三角瓶装置480ml，加好纱布塞，115OC灭菌15分钟。3.接种，将上述准备好的大肠杆菌悬液按2%接种量接入1L三角瓶，然后按每瓶30ml转入空的250ml培养基中。4.将三角瓶置于37℃摇床上振荡培养，按编号顺序分别按下面时间取出，每次取3瓶，用冰浴中冷却后，用分光光度计测A600，填下表。负责人瓶号再培养时间OD值负责人瓶号再培养时间OD值1组1,2,303组22,23,242:451组4,5,624组25,26,272:502组7,8,92:205组28,29,303:002组10,11,122:256组31,32,333:302组13,14,152:307组34,35,364:003组16,17,182:358组37,38,394:303组19,20,212:401组40,41,425:00分别测定OD值，计算平均值。四、结果与讨论以生长时间为横坐标，A600为纵坐标绘制生长曲线。结合诱导酶形成过程解释E.coli二展生长曲线。实验操作中如何保证菌体快速增长？氨基酸脱羧酶反应采用三种氨基酸（鸟氨酸、精氨酸及赖氨酸）生化反应管菌种：大肠杆菌、沙雷氏菌穿刺接种M9基础盐培养基：每升含（NH4）2SO41.0g，K2HPO4.1.4g，KH2PO40.6g，MgSO40.1g，CaCl20.1g，葡萄糖5g，pH7.5LB培养基：酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl5g，加水至1L，pH7.4～7.6