BD-Accuri-C6-软件虚拟增益功能介绍

BDAccuriC6软件用户指南-操作手册17.使用虚拟增益TM功能调节峰的位置在有些情况下，需要不同样本的某个特定的峰始终在相同的位置，或者出现在坐标轴相同的荧光道数位置——无论不同样本之间染色条件是否均一。使用调节电压和可变增益方式的流式细胞仪可以调节不同样本的峰的位置。BDAccuriC6使用虚拟增益功能来实现这样的调节。虚拟增益是一个模拟调节电压和可变增益的软件模块，可以实现对已获取的数据在坐标轴上位置的重新调节。虚拟增益可以实现对直方图的整体调节（峰位置的移动）。虚拟增益是个严格意义的分析工具，不可以在收集数据时使用。例如，在图7-1中，对照样本和样本1的阴性峰在X轴有相近的荧光值（分别的平均值=28.2和29.7）。然而，样本2的阴性群体在右边更远的位置（平均值=73.4）。虚拟增益可以调节使样本2的阴性峰位置和对照样本保持一致。图7-1在应用虚拟增益之前7.1应用虚拟增益虚拟增益只可以应用在直方图上，并且一次只可以应用在一个荧光参数上。当应用虚拟增益以后，数据可以以任何类型的图表查看，而且虚拟增益功能可以打开或者关闭。BDAccuriC6软件用户指南-操作手册2虚拟增益只能被应用在正在显示的数据上，并不改变FCS数据本身。所做的调节只在BDAccuriC6文件中被记录。这样应用虚拟增益：在分析页面，做下列操作之一：-重新生成要应用虚拟增益的直方图（看4.2.3章节的细节描述）。-从收集页面拷贝图表（看4.2.1章节的细节描述）图7-2设置应用虚拟增益的直方图在分析页面，对图表应用合适的门。做下列操作之一：-选择当前样本的一张直方图，其他样本将参照它进行调节，这个样本是标准样本。-选择一个空的孔，将峰调节到特定的荧光通道值，不要选已收集数据的孔。点击标准样本的x轴标记，从下拉菜单中选择虚拟增益。在虚拟增益对话框中，做下列操作之一-在标准样本的图表中，移动峰的定义标记的位置（竖直线）到峰的中央，这将是参考位置，其他样本的峰会被调节到此位置。-如果在第3步中选择了空样本孔，移动峰的定义标记的位置（竖直线）到某特定的通道值，设定为参考位置。BDAccuriC6软件用户指南-操作手册3峰的定义标记图7-3调节图表如果需要，在分析页面的虚拟增益对话框中使用缩放工具，改变放大水平。点击需要对齐的样本图表中央的小标志框。通过点击跳出的样本板中相应的蓝色样本孔，打开要调节的样本（灰色的样本孔表示当前选择的标准样本）。确认在设定虚拟增益前已将图表缩放到合适的水平。图7-4选择要调节的样本BDAccuriC6软件用户指南-操作手册4移动对齐样本的峰的定义标记到峰的中央，做好调节准备（图7-5）。图7-5移动峰的定义标记点击预览按键，查看应用了虚拟增益的经过调节的样本图表。如果需要，重复步骤9-10，做更多的调节。如果想要按照第一个调节的样本峰的位置精确的调节其他样本，选择此样本和选项，在跳出的样本板中点击要调节的样本孔。如果其他样本需要做不同虚拟增益调节，对每个样本分别进行虚拟增益调节。图7-6调节更多的样本BDAccuriC6软件用户指南-操作手册5点击应用按键，对数据应用虚拟增益。BDAccuriC6软件在经过调节的样本图表下方显示黑色星号，表示此样本的特定荧光通道应用了虚拟增益。图7-7黑色星号标志点击关闭按键，关闭虚拟增益对话框。7.2查看虚拟增益当对样本应用虚拟增益时，BDAccuriC6软件在相应的图表下方的荧光通道显示黑色星号。星号是颜色编码的：黑色：应用了虚拟增益。灰色：BDAccuriC6软件显示的是原始数据。图7-8显示黑色星号标志的图表BDAccuriC6软件用户指南-操作手册6当对叠加直方图应用虚拟增益时，会自动显示标志（图7-9）。当虚拟增益只是应用于叠加直方图中的一部分样本时，星号不会显示。图7-9应用了虚拟增益的叠加直方图这样实现对是否应用虚拟增益的切换:点击图表中的星号图7-10切换是否应用虚拟增益，应用（左），不应用（右）7.3去除虚拟增益如果要从BDAccuriC6文件中永久去除每个样本每个荧光参数的虚拟增益，这样操作：选择显示去除所有虚拟增益。注意：这是永久性操作，无法撤销。