吖啶橙染色试剂盒

北京雷根生物技术有限公司吖啶橙染色试剂盒简介：吖啶橙(AcridineOrange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。Leagene吖啶橙染色试剂盒(AcridineOrangeDetectionKit)主要由AOStain、AOStainBuffer组成，常用于细胞凋亡的检测。染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙染色常与EB染色合用双染，EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。组成：自备材料：1、荧光显微镜2、低速离心机3、PBS4、细胞计数板5、载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：(一)AO单独染色1、收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用AOStainBuffer(1×)清洗细胞，编号名称DA0037100TStorage试剂(A):AOStain500μl4℃避光试剂(B):AOStainBuffer(10×)10ml4℃使用说明书1份北京雷根生物技术有限公司(1×)重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。2、取适量的细胞悬液和AOStain，细胞悬液:AOStain按照一定的比例混合，轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察，取l细胞悬液和5μlAOStain混合即可。3、室温避光染色，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长，阻断滤光片波长)，计数并拍照。染色结果正常细胞细胞被均匀染成黄绿色荧光凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒(二)AO/EB双染色1、收集细胞，用AOStainBuffer(1×)清洗细胞，加入适量的AOStainBuffer(1×)重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。2、取适量的细胞悬液和AOStain，细胞悬液:AOStain按照一定的比例混合，并加入适量EB染色液，轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察，取细胞悬液和5μlAOStain混合即可。3、室温避光染色，滴加于载玻片上并加盖玻片4、荧光显微镜滤光片观察，计数并拍照。染色结果正常细胞均匀染成绿色荧光坏死细胞细胞桔黄色荧光凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。计算细胞凋亡率和死亡率:注意事项：1、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。2、如有低温离心机进行离心效果更佳，同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：6个月有效。