以没食子酸为对照品-(-FC酚法)总酚的含量测定方法

Folin－Cioealteu比色法(FC酚法）一、仪器UV-2401PC型紫外分光光度计;超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ-2508型);恒温水浴锅二、试剂没食子酸标准品;钨酸钠,磷钼酸,85%磷酸,Na2CO3,以上试剂均为分析纯;水为蒸馏水。1.3福林试剂的配制在250mL的圆底烧瓶内加入20g钨酸钠、5g钼酸钠、140mL蒸馏水，85%的浓磷酸10mL及浓盐酸20mL，充分混匀，以小火回流10h，再加入3g硫酸锂及15mL双氧水，开口继续煮沸15min，待双氧水完全挥发，呈亮黄色。冷却后移入250mL容量瓶中，定容置于棕色试剂瓶中，放入冰箱中备用。1.4溶液的配制称取40gNaCO3,溶于200mL蒸馏水中,即为20%的溶液。二、方法与结果1.对照品溶液的制备并绘标准曲线精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.11mg/mL的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL置于25mL的棕色容量瓶中，加蒸馏水至6.0mL，然后分别加入FC试剂0.5mL，混匀，在0.5～8min内加入1.5mL20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置0.5h，以不加标准液的6.0mL蒸馏水为空白对照，760nm下测定吸光值，每个样品平行测定三次。2、供试品溶液的制备样品溶液总酚含量的测定:准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL于50mL容量瓶中，加入9.5mL蒸馏水，摇匀，再加入0.5mL福林试剂，混匀，在0.5～8min内加入1.5mL20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置0.5h，以没食子酸标准液为空白对照，760nm下测定吸光值，每个样品平行测定6次(A为6次平行测得的吸光度）。以没食子酸为标准品的总酚的标准曲线：Co=0.0110mg/ml次数浓度12345678样品XV(ml)00.40.60.81.01.21.41.6A4、以没食子酸在反应体系中的质量浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线。