MCAO-model

MCAOmodel(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)心脑血管疾病是危及人类健康的头号杀手心血管疾病的高发病率及死亡率：LeadingCausesofDeathforAsianorPacificIslander(2002).Source:CDC/NCHS脑部血供大脑占人体重的2％，血流量占人体20％二个来源:一对颈内动脉，一对椎动脉二类分支:大脑前、中、后动脉发出皮质支和中央支皮质支→大脑皮质及髓质浅部中央支→基底核、内囊及间脑一个环:大脑动脉环颈内动脉椎动脉基底动脉大脑动脉环1.颈内动脉——供应大脑半球前2/3及部分间脑。行程可分为4段：颈部、岩部、海绵窦部与前床突上部，后二部合称为虹吸部。颈部岩部海绵窦部前床突上部虹吸部前交通动脉大脑中动脉后交通动脉脉络丛前动脉眼动脉颈内动脉分支大脑前动脉大脑前动脉大脑前动脉皮质支:额叶内侧面中央支:尾状核、豆状核前部，内囊前肢大脑中动脉皮质支：中央支：半球外侧面的大部分尾状核、豆状核、内囊膝和后肢大脑中动脉豆状核纹状体动脉2.椎动脉：脑干、小脑、间脑后部与大脑半球后1/3。左右椎动脉合为一条基底动脉椎动脉脑桥动脉大脑后动脉小脑下后动脉小脑下前动脉小脑上动脉椎-基底动脉的主要分支脊髓前动脉脊髓后动脉迷路动脉大脑后动脉皮质支：中央支：全部枕叶，颞叶的内侧面和底面分布于背侧丘脑，内、外侧膝状体，下丘脑、底丘脑大脑后动脉Willis动脉环位于脑底下方、蝶鞍上方，视交叉、大结节、乳头体周围，由前交通动脉、两侧大脑前动脉始段、两侧颈内动脉末段、两侧后交通动脉和两侧大脑后动脉始段吻合而成。脑血管病包括缺血性和出血性脑血管病，其中缺血性脑血管病占80-85%大脑中动脉是常见的出血或梗塞发生部位制作模拟人脑缺血模型对脑缺血发病机制及药物筛选有重要意义脑缺血模型包括全脑缺血模型和局灶性脑缺血模型，前者不常用常用的实验动物是大鼠和土沙鼠实例介绍最常用的大鼠MCAO模型制作及相关实验观察指标和方法eg：柚皮素对大鼠脑缺血损伤的保护作用实验设计实验动物：成年SD大鼠，体重220-270g，雌雄各半分组：假手术组，模型组，柚皮素组，每组3-5只（可以加设阳性对照组）实验方法：MCAO，神经行为学评分，脑组织TTC染色，免疫组化，免疫印记观察caspases-3的表达量MCAOmodelmaking大鼠脑血管示意图实验材料动物：同前述器械：常规手术器械外，需要钓鱼线，直径0.22mm，一端用火焰灼成钝圆形，距钝圆段18mm做标记（插入深度）麻醉：10%水合氯醛（3ml/kg）实验过程常规麻醉固定大鼠，颈前皮肤消毒切开颈前皮肤，钝性分离皮下组织，分离颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉.结扎颈总动脉、颈外动脉，颈内动脉挂线、夹闭切口、插线结扎固定插入的鱼线缝合Iamarat!Togetfreeismylife-longdream!神经行为学评分评分方法有很多种，这里介绍longa评分法0分：正常，无神经功能缺损；1分：左侧前爪不能完全伸展，轻度神经功能缺损；2分：行走时，大鼠向左侧（瘫痪侧）转圈，中度神经功能缺损；3分：行走时，大鼠身体向左侧（瘫痪侧）倾倒。重度神经功能缺损；4分：不能自发行走，有意识丧失。2h时评分比较明显，24h比较稳定，1-3分造模成功成功的模型脑组织TTC染色TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白脑组织TTC染色动物麻醉，灌注（心脏左心室穿针,剪开右心耳，TTC和WB可以不灌注，若灌注，用生理盐水），取脑脑组织TTC染色脑切片（切片前可将脑组织在负20度冻20min，方便切割）：一般切成5－6片，每隔2mm切一片脑组织TTC染色脑片置TTC染液中，37度避光染色30min，间或翻转脑片，使染色均匀拍照，软件计算梗死体积统计学分析模型组、实验组、假手术之间的差别免疫组织化学第一抗体为抗caspase-3，显色方法不同，选用不同标记的第二抗体（HRPor荧光素），拍照后统计学分析视频免疫荧光免疫印记抗体同前视频westernblotNote本次介绍只是比较通用的一些实验方法，实际实验设计中，可以根据实验需要，综合运用多种实验方法