EDU检测细胞增殖

1锐博生物锐博生物EdU&EU核酸标记技术————细胞核酸标记新技术细胞核酸标记新技术广州市锐博生物科技有限公司Email：[e-mail]电话：[phone]Ribobio主要内容EdU核酸标记技术的原理1EdU核酸标记技术的应用2EdU技术与传统技术的比较EdU技术与传统技术的比较3EURNA标记技术的原理EURNA标记技术的原理4EURNA标记技术的应用5RibobioCell-LightTMEdUDNA标记技术广州市锐博生物科技有限公司Email：[e-mail]电话：[phone]RibobioEdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)Cell-Light™EdU核酸标记技术EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine，5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其乙炔基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以高效快速地检测细胞增殖，可以有效地检测处于S期的细胞百分数。Cell-LightTM细胞增殖检测方法基于EdU与Apollo®荧光染料的完美结合准确检测新合成的DNA，简单，快速，准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。RibobioEdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)Cell-Light™EdU检测原理在DNA合成过程中，EdU可取代脱氧胸腺嘧啶核苷（T）插入DNA链。Ribobio•无需DNA变性•小分子检测•高效反应活性•更灵敏、更准确Cell-Light™EdU检测特点EdURibobio•非放射性同位素检测•无需DNA变性•无需破细胞壁(植物)•无需抗体•实验方法简单，操作时间大幅缩短•小分子检测，更加灵敏、准确•能够结合其它标记进行多参数检测，如•其它抗体•细胞周期分析的其它染料•其它标记Cell-Light™EdU检测特点RibobioCell-Light™EdU结果检测能够适合多种研究方式：1）荧光显微镜2）激光共聚焦显微镜3）高内涵筛选分析4）流式细胞仪分析5）酶标仪（带荧光）能够适用与多层次分析：1）样品：固定细胞、组织切片------生物荧光显微镜和激光共聚焦显微镜2）样品：细胞悬浮液-------流式细胞仪分析RibobioCell-Light™EdU试验流程检测方法简便，只需三步即可分析细胞增殖数据：1）EdU孵育样品；2）细胞固定化；3）Apollo®染料检测EdU。Cell-LightTMEdU检测方法示意图•细胞培养•用Cell-Light™EdU孵育样品•细胞固定•Cell-Light™EdU的检测•图像采集分析Tips:1.建议使用50μMEdU培养基孵育，但您可以在预实验时根据细胞类型和实验目的,以一系列浓度(10~100μM)的EdU培养基孵育进行优化，细胞能太密，一般60％－70％。2.不同细胞类型之间有一定差异，可以先做一个时间梯度，找出合适的孵育时间。3.由于细胞之间的差异，最佳EdU的终浓度和培养时间可根据具体实验调整,(50μMEdU培养基用细胞培养液以1：2000的比例稀释EdU溶液)。4.EdU孵育时间24小时宜采用较低浓度，而EdU孵育时间45分钟宜采用较高浓度。5.EdU检测和DNA染色草种、孵育注意避光。6.固定好的细胞，不染色，在4℃可存放1个月。组织切片如暂不检测就不要脱蜡。RibobioCell-Light™EdU检测荧光特性Apollo®荧光染料的特点：1）分子小------只有BrdU抗体的1/500,能够很容易地进入DNA超螺旋结构中进行高效的染色标记，而且容易把没有反应的多余荧光分子从细胞中洗干净；2）发射光波长较长------细胞、组织的自发荧光背景干扰低；3）通用性好------荧光显微镜、流式细胞仪一般都能检测；4）高特异性染色------只会对新合成DNA或者RNA进行染色，不会同细胞内的其它分子反应和结合。检测相关荧光技术参数：RibobioCell-Light™EdU检测荧光光谱分析检测相关荧光光谱图：Apollo®567光谱图Apollo®643光谱图Hoechst33342光谱图RibobioCell-Light™EdU细胞增殖检测1)在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记利用EdU检测细胞新合成的DNA，同时结合细胞核标记物进行双重或多重标记，判断增殖细胞的种类，增殖速度，全面分析增殖细胞的定位、分布。C10312Cell-LightTMEdU荧光显微镜检测试剂盒Tel:028-81391685、13679094941RibobioCell-Light™EdU细胞增殖检测2)EdU对植物增殖细胞的标记检测----无需破壁植物细胞的细胞壁有着保护的作用，尽管消化酶能够消化细胞壁，但也容易带来一些杂质，甚至破环细胞形态，基于抗体的BrdU检测方法往往无法满足客户需求。但是EdU和Apollo染料分子很小，能够轻易地透过细胞壁屏障，只需普通的固定和透化步骤，无需DNA变性及免疫反应，能够准确地检测各种植物细胞增殖情况。C10310Cell-LightTMEdUDNACellProliferationKitTel:028-81391685、13679094941参考文献：KotogányE,DuditsD,etal.2010Jan28;6(1):5.RibobioCell-Light™EdU多重联合检测•EdU能够结合其他荧光标记进行一系列分析：•细胞增殖•细胞周期•细胞凋亡•细胞表型•信号通路•细胞毒性•靶点激活除双重标记研究细胞增殖外，还能够结合细胞周期染料、信号通路相关蛋白标记（如P65抗体）等同时进行多重标记，在细胞水平进行系统性定量检测，直接获取细胞多维信息，深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。C10313Cell-LightTMEdU高内涵检测试剂盒Tel:028-81391685、13679094941NFKBRibobioCell-Light™EdU周期分析C10311Cell-LightTMEdU流式细胞仪检测试剂盒Tel:028-81391685、13679094941----流式细胞仪分析细胞周期细胞增殖和细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标，该试剂盒通过检测渗入的EdU及细胞核染料，借助流式细胞仪检测出新合成的DNA及总DNA含量，分析细胞增殖情况，并根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生的变化来准确区分细胞周期的不同阶段。RibobioCell-Light™EdU动物实验3)在组织水平上EdU对增殖细胞的标记EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官的细胞增殖情况，适用于石蜡或冰冻组织切片检测，对活体无副作用。利用EdU检测小鼠小肠组织的细胞增殖切片C10314Cell-LightTMEdUDNAProliferationinvivoDetectionTel:028-81391685、13679094941RibobioCell-Light™EdU细胞示踪4)EdU细胞示踪实验C10314Cell-LightTMEdUDNAProliferationinvivoDetectionTel:028-81391685、13679094941EdU不仅能应用于细胞增殖的检测，还能进行细胞示踪实验，示踪标记时间长达6周，远胜于BrdU,用于细胞移植，观察其治疗机制如分化、迁移、存活、体内分布等。图5采用EdU标记干细胞进行示踪实验文献实例：5)LinG,WangG,etal.Cytotherapy.2010.(细胞示踪)EdU标记ADSC细胞移植情况（红色：EdU；蓝色：DAPI；绿色：α-SMA抗体）RibobioCell-Light™EdU不同动物的EdU用量参考C10314Cell-LightTMEdUDNAProliferationinvivoDetectionTel:028-81391685、13679094941Nopublishedreference孵育100μMFlatworm(marine)ScientificposterASCB2007肌肉注射50–80μg/12hoursZebraFinchBioProbes57孵育400μMZebrafishlarvaScientificposterASCB2007腹腔注射160μgRatSalic,A.(2008)ProcNatlAcad腹腔注射100μgMouse相关文献*孵育或注射规格物种Ribobio细胞增殖传统检测方法胸腺嘧啶核苷（）渗入法胸腺嘧啶核苷（）是特有的碱基，也是合成的必需物质。用同位素标记即作为合成的前体能掺入合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。检测法检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的分解成兰紫色的甲（），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（）检测法羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使成为一种良好的细胞标记物。进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在激发光和荧光检测通道可对其进行分析。检测法中文全名溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在合成期（期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗单克隆抗体，染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。RibobioTritiated(3H)thymidine放射性同位素检测方法缺点：•不能结合其他标记进行多重标记分析•操作复杂，有较大危险性这是细胞增殖最早的检测方法，是基于放射性同位素的检测方法。RibobioBrdU(5-bromo-2'-deoxyuridine)BrBrBrBrBrdU检测方法基于免疫荧光技术的技术，靠抗原抗体结合发光的方式检测。RibobioBrBrBrBrBrdU检测方法BrdU抗体无法与BrdU结合BrdU抗体分子太大，无法直接与DNA中的BrdU结合，需进行DNA变性处理。RibobioBrBrBrBrBrdU检测方法抗体分子太大，很难与DNA中的BrdU轻松地结合，实验需要进行DNA变性，如酸解或酶解以暴露出DNA双链其中的BrdU。酸解/热解/酶解DNA变性后，BrdU才能与其抗体进行结合RibobioBrBrBrBrBrdU检测方法BrdU方法的缺点:•抗体分子太大,有些区域难以高效检测•需要酶解、热解或酸解,破坏DNA，影响其它标记或染色•实验时间较长抗体与BrdU结合能够检测DNA，但对DNA受到了较大的破坏，影响了其他标记的检测，而且有些DNA区域很难解链，BrdU方法对此无能为力。BrdU抗体RibobioBrdU检测方法BrdU检测方法需要DNA变性，对DNA结构损伤较大而且DNA内部较难变性，无法准确检测新合成DNA的总量•如需在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，变性条件下的DNA双链结构受到严重破坏，其他核酸标记探针就不容易能识别DNA，因而也无法准确统计DNA总量。DNA变性可能破坏细胞内蛋白的抗原识别位点，限制了BrdU检测法中同时检测其他蛋白的应用