微生物实验技术

微生物实验技术微生物实验技术是专门用来研究微生物的形态、构造、生理、代谢及遗传的操作手段。本章仅介绍一些最基本的操作技术，主要包括微生物的镜检、培养基的制备、灭菌与消毒、微生物的分离和纯化以及接种与培养等。1实验室主要设备及使用1．1显微镜1．1．1构造普通光学显微镜的构造主要包括光学部分和机械部分(图20一1)。(1)光学部分①接目镜装在镜筒上端，其上刻有放大倍数，常用的有5×、10×及15×等。②接物镜为显微镜最主要的光学装置，位于镜筒下端。一般装有三个接物镜，分为低倍镜(10×)、高倍镜(40×)和油浸镜(100×)。各接物镜的放大率也可由外形辨认，镜头长度越长，放大倍数愈大，反之，放大倍数愈小。油浸镜上一般刻有圈线作为标志。③集光器位于载物台下方可上下移动，具调节和集中光线的作用。④光源装在显微镜的底座上，正对着集光器，底座的侧面有亮度调节钮。(2)机械部分①镜筒在显微镜前方，为一金属圆筒，光线从中通过。②镜臂在镜筒后面，呈圆弧形，为显微镜的握持部。③镜座是显微镜的底部，呈马蹄形，用以支持全镜。④回转盘在镜筒下端，上有3～4个圆孔。接物镜装在其上。回转盘可以转动，用以调换各接物镜。⑤调节关节介于镜臂和镜座间，为镜筒作前后倾斜变位的支持点。⑥调节螺旋在镜筒后方两侧，分粗细两种。粗螺旋用于镜筒较大距离的升降。细螺旋位于粗螺旋的下方，用以调节镜筒作极小距离的升降。⑦载物台在镜筒下方，呈方形或圆形，用以放置被检物体。中央有孔，可以透光。台上装有弹簧夹可固定被检标本。弹簧夹连接推进器，捻动其上螺旋，能使标本前后左右移动。⑧光圈在集光器下方，可以进行各种程度的开闭，借以调节射入集光其光线的多寡。⑨次台装于载物台下，可上下移动，上安装有集光器的光圈。1．1．2使用方法(1)放置标本于载物台上，并用弹簧夹固定，捻动推进器上的螺旋，使其移至适当位置，打开光源调整好亮度，即可用低倍镜(其工作距离为9mm)或高倍镜(其工作距离为O．5mm)配合粗细螺旋调节距离，进行观察，根据需要此时可上下移动集光器和缩放光圈，以获得最合适的光线。若用油浸镜观察，光线宜强，可将光圈开大，集光器上升与载物台相平，并在标本上滴一小滴香柏油，然后眼睛从镜筒侧面看着，慢慢扭动粗螺旋使镜筒下移，直到油浸镜浸于油滴内，但勿使油浸镜与标本片相撞(其工作距离最小，只有0．18mm)，移目至接目镜，一面观察一面扭粗螺旋使镜筒缓缓上移，待看到模糊物像时，换用细螺旋调节至物像清晰为止。若镜筒长度不变(常为160～170mm)，显微镜放大倍数等于接目镜和接物镜单独放大率的乘积。如接目镜为10×，接物镜为100×，则物像放大倍数为10×100=1000倍。(2)如长时间使用显微镜观察标本，必须端坐，凳和桌的高度要配合适宜，否则容易疲劳。观察活菌液标本或使用油浸镜时，载物台不可倾斜，以免油滴或菌液外溢。(3)观察标本时，应练习两眼同时睁开，以减少疲劳。必要时可左眼窥镜，右眼管绘图。1．1．3显微镜的维护(1)显微镜属于精密仪器，使用时要多加注意，各部件不要随意拆卸。搬动显微镜时应一手托镜座，一手握镜臂，放于胸前，以免损坏。(2)要保持显微镜的清洁，’使用前后均以细布或软绸分别擦拭机械部分和光学部分。油浸镜用后，立即以擦镜纸拭去香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯快速擦拭物镜，最后用擦镜纸拭去残留的二甲苯。(3)显微镜用毕和清洁后，须将低倍镜移至中央，或将各镜头转成“八”字形，集光器下移，然后轻轻放回原位。(4)显微镜放置的地方要干燥，以免镜片生霉；亦要避免灰尘，另外显微镜应避免阳光暴晒和接近热源。