液相色谱仪的维护与常见故障

液相色谱仪的日常维护与常见故障排除一液相色谱仪的日常维护储液器使用HPLC试剂/溶剂，含缓冲盐的流动相过0.45μm膜除去微粒物质;更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染。定期清洁储液器及附件，防止长微生物。输液泵密封垫易损坏引起故障，每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更要小心。使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上限在10-20MPa，下限为0.5MPa，注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机。进样器停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成进样阀转子面磨损或堵塞。注射器最好使用仪器自配尖头、平头针，不要用其它仪器的。柱—防止柱性能下降1溶剂的化学腐蚀性不能太强；2避免颗粒物在柱头沉降；3柱压不能太高，防止冲击太大；4流动相pH值小于7时，最好用大粒度同种填料的予柱；5柱头加滤片（烧结不锈钢),需要时加保护柱；6经常清洗柱；7长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入大于10%有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润。检测器保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗；不定期用强溶剂反向冲洗检测器；使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内；检测器灯有一定寿命，不用时不开灯。记录器数据处理系统记录仪:热敏式打印头要注意记录纸的质量,开机前注意检查走纸部件,不要卡纸.色谱工作站:防止网上病毒损坏软件.二常见故障的排除1、储液器脱气不充分(噪声大，出毛刺)用He脱气,真空脱气,超声脱气,加热回馏脱气,(混合流动相不宜)1、储液器流动相供给不畅，泵压力不稳流动相接近用完过滤器堵塞（有颗粒，长霉）流速过高,阻力大,造成空化现象.解决的办法是:降低流速;换大孔过滤器;加大管路内径;抬高储液器.1、储液器储液器或流动相被污染产生有规则的噪声；基线上升，梯度洗脱出鬼峰；原因:溶剂质量差（含杂质多）；配流动相的玻璃器皿不合格,微生物影响；配制流动相的操作不当（过滤、脱气、搅拌).2、输液泵单向阀a.球和阀座粘在一起，堵死，打不出溶剂，(缓冲盐流动相)用高质量的溶剂冲洗，不同极性溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷…，更换新单向阀。2、输液泵b.球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流，压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。清除气泡的办法：打开排液阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。3、进样系统b.堵塞,样品打不进去。样品管堵塞：环管用反冲法或超声清洗排除（或换新管).手动进样系统3、进样系统c.注样孔a)装样时针头周围渗漏：孔道堵塞，或者放空管和样品管太细，阻力太大；针头密封管规格不对，针头太细。手动进样系统3、进样系统c.注样孔：b)注射孔渗漏：放空管有虹吸现象，转子密封面上孔之间有磨损。为防止虹吸,放空管末端应在放空瓶液面以上,更换磨损的转子.手动进样系统3、进样系统c)样品滞留阀在进样位置停留时间不够。要求停留时间至少应让流动相流过的体积是环体积的10-20倍。(一般是在下一针进样前才将阀扳到装样位置)手动进样系统3、进样系统c)样品滞留残留样品留在样品环中或注射器中，或从放空管中虹吸回来,污染下一个样品.此时可用5-10倍的流动相或新样品冲洗注射孔和注射器,若是虹吸,应加限制管。手动进样系统3、进样系统c)样品滞留管路接头有死体积滞留样品，很难冲洗干净,此时应检查装配情况，确定是否需换新配件。手动进样系统3、进样系统a.样品瓶不配套瓶小——针弯、折断瓶大——样品少，抽不上样瓶破碎更换合适的样品瓶。自动进样系统3、进样系统b.注意样品瓶隔垫，防止污染。c.进样器针头堵塞（样品、缓冲盐、隔垫碎片、针头本身)，可用溶剂清洗，金属丝疏通，或换新针头。自动进样系统3、进样系统d.样品滞留：空白溶剂出色谱峰.加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后面）或在样品瓶前放清洗液瓶.自动进样系统4、色谱柱1)塔板数下降a.样品处理不合适，选择适当的样品净化方法，选择合适流动相。b.柱头塌陷，填装修补。2)峰形变坏出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不变，可能是柱堵塞(不锈钢烧结片)，或柱头有空穴。4、色谱柱3)柱压突然增大样品沉积在柱内,用能溶解样品的溶剂冲洗（断开柱和检测器）可正向冲，反向冲。柱内硬件有问题：滤片堵塞，换新片;塌陷：用相同填料填充、修补。4、色谱柱4)保留时间改变不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。若峰顺序变化，保留时间变化较大，应考虑换柱或优化分离条件。对专门的分析最好用同一批号的柱子。由色谱柱引起的故障故障现象解决办法过滤片堵塞压力增高、N下降、峰形差倒柱冲洗或换过滤片柱头塌陷峰分叉、N下降修补柱头健合相流失保留值改变、峰形差、N下降换柱样品堵塞压力高用能溶解样品的溶剂冲洗强吸收样品N下降、保留值小强溶剂反冲5、检测器a.灯故障:基线噪声大,灵敏度低,氘灯寿命:1000h汞灯和钨灯寿命:2000h一般使用6个月以上可能接近寿命期限,可以考虑更换新灯.紫外—可见光检测器5、检测器b.流动池流动池内有气泡：用脱气甲醇，不同流量冲洗。池堵塞（入口、出口、池内）：用可溶堵塞物的溶剂冲洗（缓冲盐用水冲洗）池污染：异丙醇、二氯甲烷、6mol/LHNO3冲洗.紫外—可见光检测器5、检测器b.流动池测量池和参比池失配UV以空气为参比，一般不扣流动相本底，若用有紫外吸收的流动相，参比信号不为零，会出现倒峰和伪峰。此时，选择合适的流动相。紫外—可见光检测器5、检测器c.时间常数选择：（过滤噪声）有的仪器有固定的时间常数，有的需设置时间常数。时间常数太小,噪声增大;时间常数太大,出现宽峰、拖尾或矮峰。时间常数的设置一般根据经验估计，小颗粒柱常数小，可选最窄峰宽的1/10作为时间常数,对4.6×(150-250)mm，5um柱，可选0.5sor1s紫外—可见光检测器5检测器非线性响应超出线性范围:样品量太大;检测器的衰减超出了其线性动力学范围;流动相的紫外吸收比较强.5检测器温度影响环境温度变化引起基线漂移。流动相温度变化引起折射率改变，紫外光传导变化。柱温变化引起基线漂移。5检测器信号线故障记录仪和数据处理系统信号线插接不紧,接触不良，信号很弱，出现不需要的噪音,此时按说明书检查线路连接。地线对仪器很重要,仪器外壳和信号线的接地很严格，接地不良会出现较大的基线噪声，接错线会造成短路，烧毁仪器。5检测器波长问题次级发射效应：用氘灯作可见光范围的光源时会发生次级发射效应，用钨灯没有此影响.正确选择波长:既照顾到灵敏度,有考虑到稳定性波长校准：机械转动光栅选择波长,因磨损造成所选波长与刻度盘上的不一致，而且重复性也差。可用波长溶液校准：235、257、315、350nm。谢谢