7500-2.0绝对定量简易操作流程

appliedbiosystems7500荧光定量PCR仪绝对定量实验简易操作流程SDS2.0绝对定量实验简易操作流程 2  7500定量PCR仪绝对定量实验简易操作流程1.双击桌面图标，或从StartAllProgramsAppliedBiosystems7500Software7500V2.0开启软件。进入主界面后选择AdvancedSetup。2.默认进入Setup下的ExperimentProperties界面2.1输入实验名称（ExperimentName）2.2确认仪器型号2.3在实验类型中，选择Quantitation-StandardCurve2.4选择试剂种类2.5确认运行模式3.进入Setup下的PlateSetup界面，编辑基因（Target）及样本（Sample）： 3.11在的基因，记的荧光择NFQ-M荧光淬灭并在Targe光基团及淬灭MGB；如果灭基团（如B界面tName中编灭基团。对果是TAMRABHQ），请3 面中设置基因编辑基因名对于QuenchA探针，请选请选择None绝对定因及样品。称，Reporther的选择，选择TAMRe。定量实验简利用ter和Quenc如果是MGRA；如果是简易操作流添加her中选择所GB探针，请是其他形式的流程 加新所标请选的非绝对定量实验简易操作流程 4  还可以利用其他按钮将之前已添加的基因进行保存(SaveTarget)或删除(DeleteTarget)。利用添加新的样本，并编辑样品名称。3.2在界面中进行样品板的排布。利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在Task选项中指定该反应孔的类型（S代表标准曲线数据点，U代表未知样本，N代表阴性对照）。3.3设置标准曲线：利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔（一般情况下，每个梯度设置三个副孔），而后勾选左侧的基因，在Task选项中选择S，然后在Quantity中输入拷贝数。按照相同操作，完成标准曲线其他数据点的设置（建议设置5个梯度）。4.在Setup下的RunMethod界面中，设定反应条件。绝对定量实验简易操作流程 5  5.点击，文件储存成ExperimentDocumentSingleFiles（*.eds）格式，然后按下按钮，反应即开始进行。6.实验结束后，点击右上角的Analyze按钮，软件将显示实验结果：绝对定量实验简易操作流程 6  6.1在扩增图中（见上图），可通过更改PlotSettings来改变扩增图的显示方式。如果想查看阈值线或基线，请将Threshold及Baseline打勾。6.2查看标准曲线时，可通过更改PlotSettings来改变标准曲线的显示方式。Eff%代表扩增效率。R2值代表标准曲线的数据点与回归曲线的接近程度，建议在0.99以上。6.3对于SYBRGreen法实验，可以在MeltCurve界面中查看熔解曲线。绝对定量实验简易操作流程 7  6.4检查QCSummary结果，可以快速查看实验中是否有反应孔存在异常情况。黄色三角中的数字1代表有一种异常情况，2代表有两种异常情况，以此类推。详细信息及解决方案可以在FlagDetails中查看。7.分析之后的结果，可以利用菜单中的FileExport功能，导出Excel格式的结果（左图）。若想存储图片结果，可直接在图片上单击鼠标右键，选择SaveAs，存成JPEG格式的图片（右图）。绝对定量实验简易操作流程 8