蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验

生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测1、实验原理：（1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。（2）苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。（3）蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应（肽键）。（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定1.实验原理当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O试剂配制甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）斐林试剂乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。（二）生物组织中蛋白质的鉴定1实验原理在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。试剂配制A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）双缩脲试剂B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液）2、实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质3、实验选材（1、材料应富含相关物质，使现象更加明显；2、材料本身应无色，以免对结果产生干扰）（1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨，也可用白萝卜替代。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）（2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3～4小时。（3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。4、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液B液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。5、方法步骤：（１）可溶性还原糖糖的鉴定（水浴加热）操作方法注意问题解释1.制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2.取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲乙液分别加入时可能与组织样液发生反应无Cu(OH)2生成。甲乙液等量混合，现配先用，切不可分开滴加，或者久置后才用。4.试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；甲、乙液混合保存时生成Cu(OH)2在70~90℃下分解成黑色CuO和水；.实验步骤（1）制备组织样液（教师制备）（2）鉴定样液先在试管中加入2mL组织样液再加入2mL刚配制的斐林试剂水浴煮沸2分钟注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！！！操作方法注意问题解释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。染色时间不宜过长。苏丹Ⅲ中含有酒精，染色时间久了，把脂肪全部溶解了，观察不到脂肪粒用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，再用吸水纸吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。（２）脂肪的鉴定（需要显微镜）实验步骤（1）切片制作①去掉花生种皮②用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。③刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。（2）染色用毛笔将最薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央→滴苏丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子叶薄片上→2-1min后，吸去染液→滴50%的酒精洗去浮色→吸去多余酒精→再滴1-2滴蒸馏水→盖上盖玻片，制成临时装片。（3）镜检鉴定在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野的中心→换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。脂肪检测实验的实验结果若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。（３）蛋白质的鉴定操作方法注意问题解释制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过滤。）黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。碘液不要滴太多以免影响颜色观察实验步骤：（1）制备生物组织样液（教师制备）（2）鉴定先加2mL组织样液再加2mL双缩脲试剂A液加3-4滴双缩脲试剂B液蛋白质检测实验的实验结果6、讨论:(1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么?答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖.(2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液为0.05g/mL,双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/mLb使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀,双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+c使用方法不同:斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液7、练习与巩固(1)检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是()A.斐林试剂B.碘液C.双缩脲试剂D.二苯胺(2)下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是()A.柑橘B.苹果C.新鲜肝脏D.甘蔗AB