诊断——血液学一般检查

实验一实验一血液学一般检查[内容]1.血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法）2.白细胞计数（WhiteBloodCellCount）实验一1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特定波长（540nm）和光径（比色杯内径1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。原理HbHi+CN-HiCNK3Fe(CN)6[试剂]血红蛋白转化液（文齐氏液）：氰化钾（KCN）0.05g高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]0.20g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）0.14gTritonX—1001.0ml蒸馏水加至1000ml[器材]1.血红蛋白吸管，5ml吸管2.大试管3.721分光光度计上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊[标本来源]EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血实验一[操作]1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至20µl。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置5分钟。3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量501001502000.1300.2600.4000.5300501001502002501234浓度吸光度吸光度浓度吸光度浓度吸光度浓度吸光度浓度吸光度浓度0.10038.20.20076.30.300114.50.400152.70.500190.80.10540.10.20578.20.305116.40.405154.60.505192.70.11042.00.21080.20.310118.30.410156.50.510194.70.11543.90.21582.10.315120.20.415158.40.515196.60.12045.80.22084.00.320122.10.420160.30.520198.50.12547.70.22585.90.325124.00.425162.20.525200.40.13049.60.23087.80.330126.00.430164.10.530202.30.13551.50.23589.70.335127.90.435166.00.535204.20.14053.40.24091.60.340129.80.440167.90.540206.10.14555.30.24593.50.345131.70.445169.80.545208.00.15057.30.25095.40.350133.60.450171.80.550209.90.15559.20.25597.30.355135.50.455173.70.555211.80.16061.10.26099.20.360137.40.460175.60.560213.70.16563.00.265101.10.365139.30.465177.50.565215.60.17064.90.270103.10.370141.20.470179.40.570217.60.17566.80.275105.00.375143.10.475181.30.575219.50.18068.70.280106.90.380145.00.480183.20.580221.40.18570.60.285108.80.385146.90.485185.10.585223.30.19072.50.290110.70.390148.90.490187.00.590225.20.19574.40.295112.60.395150.80.495188.90.595227.1血红蛋白标准浓度（g/L）波长540nm比色杯直径1cm仪器号:20000448实验一将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（Hb=K×A）。标准浓度标准吸光度500.1201000.2601500.4002000.530501001502000.1300.2600.4000.5300501001502002501234浓度吸光度[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：实验一[参考值]成年男性：（120～160）g/L成年女性：（110～150）g/L新生儿：（170～200）g/L[注意事项]1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。[报告方式]Hb：__g/L实验一2.白细胞计数[原理]血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量实验一1.血细胞计数板，盖玻片2.血红蛋白吸管（具有10µl及20µl刻度）3.1ml吸管，小试管，玻棒4.光学显微镜[器材]实验一[试剂]白细胞稀释液：冰醋酸2ml1%龙胆紫1ml或结晶紫数滴蒸馏水加至100ml[标本来源]EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血实验一1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20µl，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20µl处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4.冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右）[操作]实验一6.计算：白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液内WBC数。×10：将一个大方格白细胞数换算为1µl内的白细胞数。×106：1L=106µl。×20：为血液稀释倍数。白白白白白细胞计数区实验一计数池构造实验一低倍镜下的计数池大方格结构实验一低倍镜下的白细胞形态（10X10）实验一白细胞计数操作步骤实验一[报告方式]白细胞数（WBC）：__×109/L[参考值]成人：（4～10）×109/L新生儿：（15～20）×109/L实验一1.采血及计数室充液注意事项:毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀或冻疮等均不可穿刺采血。穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。EDTA-K2抗凝全血使用前需混匀。计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽量静脉采血。[注意事项]实验一2．一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBC残存而干扰计数使结果偏高。3．白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高，应进行校正。校正公式：WBC=A×[100/(100+B)]其中A:校正前WBC数；B:分类计数100个WBC时遇到的有核RBC数。实验一实验报告要求（报告上写明班级、学号）格式•实验原理•简单步骤•实验结果（原始实验数据及最终得出的实验结论或结果）•分析讨论