DB34T 2160-2014 鸡毒支原体感染防治技术规程

ICS65.020.30B41DB34安徽省地方标准DB34/T2160—2014鸡毒支原体感染防治技术规程Technicalregulationsforpreventionandcureofavianmycoplasmosis文稿版次选择2014-09-23发布2014-10-23实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2160—2014I前言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学、安徽华卫集团禽业有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学，安徽华卫集团禽业有限公司。本标准主要起草人：魏建忠、李郁、檀华蓉、刘成文、刘军军、钱昌银、赵卫平、孙裴、李吕木。DB34/T2160—20141鸡毒支原体感染防治技术规程1范围本标准规定了鸡毒支原体感染的诊断、预防和治疗。本标准适用于养鸡场鸡毒支原体感染的防治。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB13078饲料卫生标准GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程NY/T553禽支原体病诊断技术NY/T1167畜禽场环境质量及卫生控制规范NY/T1168畜禽粪便无害化处理技术规范NY/T5027无公害食品畜禽饮用水水质NY/T5030无公害食品畜禽饲养兽药使用准则NY/T5038无公害食品家禽养殖生产管理规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1鸡毒支原体感染Mycoplasmagallisepticuminfection由鸡毒支原体（Mycoplasmagallisepticum，MG）引起鸡的一种慢性呼吸道传染病，又名慢性呼吸道病（Chronicrespiratorydisease，CRD）3.2疫病净化cleanseofepidemicdisease在某一限定区域或养殖场内，根据特定疫病的流行病学调查结果和疫病监测结果，及时发现并淘汰被感染动物，使限定动物群中某种疫病被清除的控制方法。4诊断4.1初步诊断4.1.1流行特点DB34/T2160—201424.1.1.1各种日龄的鸡均可感染，4～8周龄的鸡最易感。4.1.1.2病鸡、隐性带菌鸡、带菌种蛋是主要传染源。4.1.1.3传播途径有经卵垂直传播和通过密切接触水平传播两种方式，垂直传播是重要方式。4.1.1.4一年四季均可发生，以冬春季节严重。4.1.1.5潜伏期10～20天，最长可达4个月。4.1.1.6呈慢性经过，成年鸡多散发，幼鸡则成批发生，发病率10％～50％。4.1.2临床症状幼龄病鸡表现食欲不振，体重减轻，鼻孔流出浆液性、黏液性直至脓性鼻液，严重时分泌物阻塞一侧或两侧鼻孔，频频摇头、打喷嚏；炎症波及周围组织时，出现鼻窦炎、结膜炎及气囊炎；炎症波及下呼吸道时，出现咳嗽和气喘，并有气管啰音；后期如鼻腔和眶下窦中蓄积渗出物则引起眼睑肿胀，如果没有并发感染其它疾病，则病死率不高。4.1.3病理变化单纯感染MG的病例，鼻和眶下窦有轻度炎症。自然病例多为混合感染，可见呼吸道黏膜水肿、充血、增厚，气管和喉头有粘液状物，严重时炎症可波及肺和气囊，气囊浑浊、囊壁增厚、灰白色不透明，腔内含有大量干酪样渗出物。有时可见纤维素性或脓性心包炎、肝周炎与气囊炎并发。4.2确诊4.2.1病原的分离与鉴定按照NY/T553执行。4.2.2血清学检查4.2.2.1快速血清凝集试验(RSA)按照NY/T553执行。4.2.2.2血凝抑制试验（HI）MG能凝集鸡的红细胞，且感染鸡的血清中具有血凝抑制抗体。见附录A。4.2.2.3酶联免疫吸附试验（ELISA）见附录B。5防治5.1预防5.1.1环境卫生5.1.1.1鸡场环境质量控制参照NY/T1167的规定执行。5.1.1.2坚持自繁自养，需要引种时，应按规定申报检疫。5.1.1.3实行全进全出制，每批鸡进鸡前或出栏后应对鸡舍、笼具及用具进行清洗、消毒，清理完毕后空舍至少2周。5.1.1.4应符合NY/T5038的要求。保证鸡舍的适宜温度，饲养密度要合理，舍内通风应良好。DB34/T2160—201435.1.1.5及时清除潮湿的垫料和粪便，按照NY/T1168的规定处理。5.1.2饮水管理采用自由饮水，水质应符合NY/T5027的要求。5.1.3饲喂管理饲料应符合GB13078的要求。饲喂器具要定时清洗、消毒，并防止被鸡粪污染。5.1.4免疫接种5.1.4.1油乳剂灭活疫苗主要用于健康种鸡和商品蛋鸡。6～8周龄首免，开产前2～4周加强免疫一次，颈部皮下或肌肉注射，0.5mL/只。5.1.4.2弱毒疫苗适用于各种日龄健康鸡。7～14日龄首免，10～16周加免疫一次，点眼接种，0.05mL/只。疫苗接种前3～5日、接种后至少10日内停用各种防治MG的药物，不要与其他病毒性活疫苗一起使用，两者使用间隔应在5日以上。5.1.4.3弱毒疫苗配合油乳剂灭活疫苗7～10日龄用弱毒苗配合灭活苗注射，开产前用一次灭活苗，3～4个月后再用灭活苗注射一次。5.2种鸡净化5.2.1药物使用按NY5030的规定，对种鸡（祖代）使用抗菌药物，降低种蛋中MG的污染率和污染程度。5.2.2高温处理对种蛋（祖代）采用高温（45℃）经14小时的处理，杀灭种蛋中的MG。5.2.3分批孵化将来自不同种鸡（祖代）群的种蛋分开孵化，并实行小批量孵化，每批100～200只。5.2.4分群饲养将后代种鸡（父母代）分小群饲养，定期进行血清学检查，一旦出现确实的阳性鸡，立即将小群淘汰。5.2.5检疫净化在后代种鸡（父母代）开产前全部进行血清学检查，只有全部阴性才能作种用。5.2.6净化管理5.2.6.1对后代种鸡（父母代）的卫生消毒按5.1.1进行。5.2.6.2对后代种鸡（父母代）的饲养管理按5.1.2、5.1.3、5.1.4进行。5.2.6.3净化后的种鸡群每半年抽检一次，每次抽检1％，若血清学阳性率＞3％则应重新净化。DB34/T2160—201445.3治疗5.3.1药物的使用应符合NY/T5030的要求。5.3.2应进行药物敏感性测定，选用高敏药物。5.3.3采用轮换用药，以减少抗药性产生。5.3.4推荐使用以下敏感药物进行治疗。5.3.4.1泰妙菌素用法与用量：每100g本品兑水500～1000kg或拌料500kg，连用3～5天。5.3.4.2泰乐菌素用法与用量：混饮，500mg/L，连用5～7天。皮下或肌肉注射，5～13mg/kg体重，每天2次，连用3～5天。5.3.4.3北里霉素（吉他霉素）用法与用量：混饮，125～250mg/L，连用5～10天。皮下或肌肉注射，25～50mg/kg体重，每天2次，连用3天。5.3.4.4盐酸大观-林可霉素（比率为2：1）用法与用量：混饮，500～800mg/L，连用3～7天。5.4无害化处理5.4.1检出的阳性种鸡不能留作种用，应全部淘汰。5.4.2对病死鸡和废弃物的处理应符合GB16548的规定。DB34/T2160—20145AA附录A（规范性附录）鸡毒支原体感染血凝抑制试验（HI）检查A.1血凝试验（HA）测定MG抗原血凝价A.1.1试验在96孔“V”型微量反应板上进行。A.1.2试验使用的MG抗原是将幼龄的培养物离心，沉淀细胞用少量磷酸盐缓冲盐水（PBS）悬浮并与等体积的甘油混合，分装后于－70℃保存。A.1.3试验使用的红细胞为新鲜的0.5％鸡红细胞悬液。A.1.4常规倍比稀释法测定MG抗原的血凝价。以100％凝集（红细胞呈颗粒性伞状凝集于孔底）的MG抗原最大稀释孔为该MG抗原血凝价，即1个血凝单位。A.2血凝抑制试验（HI）测定MG抗体血凝抑制价A.2.1试验在96孔“V”型微量反应板上进行。A.2.2试验使用的MG抗原分别含有4个血凝单位和8个血凝单位。A.2.3试验使用的红细胞为新鲜的0.5％鸡红细胞悬液。A.2.4去除待检血清中非特异性血凝因子：按照1mL稀释待检血清（1：5）加6～8滴洗涤的鸡红细胞比例，37℃作用10min后，除去红细胞，取上清液进行检测。A.3试验程序A.3.1于第1孔中加入PBS50μL，再取4个血凝单位MG抗原依次加入3～8孔，每孔50μL，第2孔加含有8个血凝单位的MG抗原50μL。A.3.2吸1：5稀释的待检血清50μL于第1孔中，混匀后吸50μL于第2孔中，依次倍比稀释至第8孔，最后弃去50μL。A.3.3置微型振荡器上振荡1miin。A.3.4放室温下（18～20℃）作用20min。A.3.5滴加50μL0.5％鸡红细胞悬液于各孔中，振荡混合后，室温下静置30～40min，判定结果。A.4结果判定A.4.1以100％抑制红细胞凝集的待检血清最大稀释度为该血清MG抗体血凝抑制价。A.4.2血凝抑制价≥1：80以上判为MG感染阳性，1：40时可疑，21天后再采血检测。DB34/T2160—20146BB附录B（规范性附录）鸡毒支原体感染酶联免疫吸附试验（ELISA）检查B.1材料和试剂B.1.1主要仪器含650nm波长酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。B.1.2主要试剂包被板，阳性对照，阴性对照，酶结合物（酶标羊抗鸡抗体-辣根过氧化物酶），样品稀释缓冲液，TMB底物液，终止液。B.2样品准备检测前用样品稀释液将样品作500被稀释，如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释至500μL。B.3操作步骤B.3.1各组分放置室温（18～25℃），颠倒摇动混合均匀。B.3.2取出包被板，在表上记录样品位置。B.3.3加100μL不需稀释的阴性对照至A1和A2孔。加100μL不需稀释的阳性对照至A3和A4孔。加100μL稀释好的样品至相应的孔。所有被检样品即可采用双孔测定又可采用单孔测定。B.3.4在室温（18～25℃）孵育30min。B.3.5充分甩去各孔中的液体，用大约350μL蒸馏水或去离子水洗涤微孔共3～5次。B.3.6每孔加入100μL酶标羊抗鸡抗体。B.3.7在室温（18～25℃）孵育30min。重复B.3.5。B.3.8每孔加100μL底物溶液。在室温（18～25℃）孵育15min。每孔加100μL终止液终止反应。B.3.9在空气中读空白数。在650nm，A（650）测量和记录吸光值。B.4结果判定B.4.1只有在阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得值的均值（PCX-NCX）大于0.075时，阴性对照孔所得值的均值小于或等于0.150时，测定结果才有效。B.4.2样品的S/P值小于或等于0.5，判为阴性。样品的S/P值大于0.5（滴度大于1076，），判为阳性，表明感染过MG。B.5计算阴性对照平均值（NCX）=【A1孔A（650）+A2孔A（650）】/2DB34/T2160—20147阳性对照平均值（PCX）=【A3孔A（650）+A4孔A（650）】/2S/P值=【样品A（650）—NCX】/【PCX-NCX】_________________________________