SNT 2497.29-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第29部分生化需氧量(BOD)测定

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．２９—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２９部分：生化需氧量（犅犗犇）测定犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋２９：犅犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾狅狓狔犵犲狀犱犲犿犪狀犱（犅犗犇）狋犲狊狋２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第２９部分。本部分修改采用经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试指南Ｎｏ．３０１Ｃ（１９９２）《改进的ＭＩＴＩ（Ｉ）试验》，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１做了编辑性修改。本部分的附录Ａ为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：冯智劼、王利兵、张园、赵好力宝、熊中强、周磊。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４９７．２９—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２９部分：生化需氧量（犅犗犇）测定１　范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品安全试验方法生化需氧量（ＢＯＤ）测定的术语与定义、仪器设备、试验方法和数据处理与报告。本部分适用于进出口危险化学品安全试验方法生化需氧量（ＢＯＤ）的测定。２　术语和定义下列术语和定义适用于本部分。２．１生化需氧量　犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾狅狓狔犵犲狀犱犲犿犪狀犱；犅犗犇微生物分解有机物所消耗的量，可表示为每毫克受试物消耗的氧气毫克数（ｍｇ／ｍｇ）。２．２理论需氧量　狋犺犲狅狉犲狋犻犮犪犾狅狓狔犵犲狀犱犲犿犪狀犱，犜犺犗犇根据分子式计算得到的受试物完全被氧化需要的氧的总量，可表示为每毫克受试物消耗的氧气毫克数（ｍｇ／ｍｇ）。３　试验方法３．１　试验用水准备３．１．１　试验用水应使用去离子水或蒸馏水。３．１．２　试验用水中有机碳含量应低于受试物浓度中有机碳含量的１０％。３．２　仪器设备３．２．１　ＢＯＤ测定仪；３．２．２　培养箱。３．３　试验培养基的制备３．３．１　用分析纯试剂制备下列贮备液：ａ）　磷酸贮备液：称取８．５０ｇ磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）、２１．７５ｇ磷酸氢二钾（Ｋ２ＨＰＯ４）、４４．６０ｇ十二水合磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、１．７ｇ氯化铵（ＮＨ４Ｃｌ）用水溶解，定容至１Ｌ，溶液ｐＨ值应为７．２。ｂ）　硫酸镁贮备液：称取２２．５０ｇ七水合硫酸镁（ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ）用水溶解，定容至１Ｌ。ｃ）　氯化钙贮备液：称取２７．５ｇ无水氯化钙（ＣａＣｌ２）用水溶解，定容至１Ｌ。ｄ）　氯化铁贮备液：称取０．２５ｇ六水合氯化铁（ＦｅＣｌ３·６Ｈ２Ｏ）用水溶解，定容至１Ｌ。３．３．２　试验培养基的制备取磷酸贮备液、硫酸镁贮备液、氯化钙贮备液和氯化铁贮备液各３ｍＬ，试验用水定容到１Ｌ。３．４　受试物贮备液３．４．１　当受试物或参比物的水溶解度超过１ｇ／Ｌ时，溶解１ｇ～１０ｇ，用去离子水定容到１Ｌ。也可用试验培养基来制备受试物贮备液或将受试物直接加入试验培养基。３．４．２　当既不能使用溶剂又不能使用乳化剂时，难溶受试物可按质量或体积直接加到试验瓶中。１犛犖／犜２４９７．２９—２０１０３．５　接种物的准备３．５．１　采集场所和采集量ａ）　从不少于１０个场所采集新鲜样品；ｂ）　应主要从使用和排放各种化学物质的地区采集，包括城市污水处理厂、工业污水处理厂、河流、湖泊和沿海；ｃ）　采集活性污泥、表面土壤、水等样品１Ｌ，并将它们混合在一起。３．５．２　采集物的处理ａ）　去除漂浮物质并静置，以氢氧化钠或磷酸调节上层清液ｐＨ值至７±１。ｂ）　将适当体积的滤清液装入活性污泥容器并曝气２３．５ｈ。ｃ）　停止曝气３０ｍｉｎ后，舍去上层清液的１／３并加入等体积的含葡萄糖、蛋白胨和磷酸钾各０．１％的溶液（ｐＨ值为７），再次曝气。此培育过程每天进行一次。３．５．３　污泥培养ａ）　保持温度在２５℃±１℃及ｐＨ值为７±１，应即时清理流出物，污泥彻底沉淀，充分曝气，应有原生动物，以及至少每３个月一次用参比物测定污泥活性。ｂ）　至少培育１个月以后才用污泥作为接种物，但超过４个月后则不能再用。ｃ）　其后，每３个月一次从规则的距离间隔的１０个地点采集污泥样品。ｄ）　为使新鲜和老的活性污泥具有相同的活性，将正在使用的活性污泥上清液与新采集的活性污泥上清液等量混合，对此混合液进行培养。在活性污泥换营养液１０ｈ～２４ｈ后作为接种物使用污泥。３．６　组别设计３．６．１　通常试验应设置下列组别：ａ）　瓶１：非生物对照组（含受试物和去离子水，质量浓度为１００ｍｇ／Ｌ）。ｂ）　瓶２、瓶３和瓶４：含受试物、试验培养基和接种物的试验组（受试物质量浓度为１００ｍｇ／Ｌ）。ｃ）　瓶５：含参比物、试验培养基和接种物的程序对照组（参比物质量浓度为１００ｍｇ／Ｌ）。ｄ）　瓶６：试验培养基和接种物的空白对照组。３．６．２　如需要，在接种之前调节瓶２、瓶３和瓶４中的溶液ｐＨ值至７．０。３．７　试验步骤３．７．１　瓶１中不加入接种作为非生物对照，向试验瓶２、瓶３和瓶４（试验悬浮液）、瓶５（活性对照）和瓶６（接种物的空白对照）中适量接种活性污泥使试验溶液的悬浮物浓度为３０ｍｇ／Ｌ。３．７．２　所有试验瓶的特制ＣＯ２吸收杯加入ＣＯ２吸收剂，装配好设置，检查气密性，开始搅拌，在黑暗条件下开始测定氧消耗。３．７．３　每天检查温度、搅拌器状态，定期检测溶解氧浓度，观察试验瓶内容物颜色变化。３．７．４　２８ｄ培养期结束时，测定瓶中物的ｐＨ值、受试物残留浓度或代谢的中间产物浓度。３．７．５　当可能有硝化作用，需测定硝酸盐和亚硝酸盐浓度。４　质量控制４．１　接种物空白试验的氧消耗通常在（２０～３０）ｍｇ／Ｌ，并且在２８ｄ中不应大于６０ｍｇ／Ｌ。４．２　若氧消耗数值大于６０ｍｇ／Ｌ，则需要对数据和试验方法适用性进行检查。如果ｐＨ值超出６～８．５的范围并且受试物氧消耗量小于６０％，则应用较低浓度的受试物重复进行试验。４．３　当受试物在稳定阶段或在试验结束时去除率的值在平行试验间差异很大，则应评判该试验的有效性。这个差值应该小于２０％，同时，如果第７天和第１４天用氧消耗量计算出的参比物降解百分率分别超过４０％和６５％，则试验结果正常。如果前述标准都未达到，试验应重做。２犛犖／犜２４９７．２９—２０１０４．４　试验结束降解率低并不意味着受试物在外界环境条件下没有生物降解能力，而是说明有需要探索其他的生物降解条件。５　数据处理与报告５．１　犅犗犇计算试验一定时间后的受试物氧消耗量（ｍｇ）经同时段的接种物空白对照校正后除以受试物量（ｍｇ），得到用毫克氧比毫克受试物表示的犅犗犇，见式（１）。犅犗犇＝犿１犻－犿２犿３…………………………（１）　　式中：犿１犻———受试物氧消耗（犻＝１，２，３），单位为毫克（ｍｇ）；犿２———空白对照氧消耗，单位为毫克（ｍｇ）；犿３———受试物加入量，单位为毫克（ｍｇ）。５．２　生物降解率计算生物降解率可从式（２）中获得：犇＝犅犗犇犜犺犗犇×１００…………………………（２）　　式中：犇———生物降解率，％犜犺犗犇———对于混合物，犜犺犗犇的计算可通过元素的测定，将其当作单个化合物，根据硝化作用是否发生选取适当的犜犺犗犇［犜犺犗犇（ＮＨ４）或犜犺犗犇（ＮＯ３）］。当硝化作用发生但反应不完全时，可以通过从硝酸盐和亚硝酸盐的浓度变化计算硝化作用，对氧消耗进行修正。５．３　非生物降解率计算若瓶１中受试物减少，计算非生物降解率，用该瓶２８ｄ后浓度犛狋计算降解率，见式（３）：犇狋＝犛０－犛狋犛０×１００…………………………（３）　　式中：犇狋———非生物降解率，％；犛０———试验开始时瓶１中受试物浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；犛狋———试验结束时瓶１中受试物浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）。５．４　试验报告试验报告应包括下列几点：ａ）　受试物：———受试物的名称、理化特性；———受试物鉴定数据。ｂ）　测试条件：———接种物：状态和取样点；———测试时间与温度；———受试物的处理方法；———程序改变的原因及解释说明。ｃ）　结果：———计算相关试验数据，并填入表格表（参见附录Ａ）；———观察到的任何抑制现象；———观察到的非生物降解现象；———受试物及参比物的讲解曲线。３犛犖／犜２４９７．２９—２０１０附　录　犃（资料性附录）数据表单犃．１　实验室犃．２　试验开始日期犃．３　受试物名称：受试物贮备液的浓度：　　　　　　　ｍｇ／Ｌ，以受试物的质量计试验培养基的初始浓度：ｍｇ／Ｌ，以受试物的质量计进行试验的反应液体积：ｍＬ犜犺犗犇：ｍｇ／Ｌ，以Ｏ２计犃．４　接种物污泥采样的地点：１　　　　　　　　　　　６２７３８４９５１０驯化活性污泥的悬浮物浓度：　　　　　　　　ｍｇ／Ｌ在每升最后介质中加入的污泥体积：ｍＬ在最后介质中污泥的浓度：ｍｇ／Ｌ犃．５　生物降解性的氧消耗量设备型号：项　　目时间／ｄ狀１狀２狀３狀４狀狓受试物的氧消耗／ｍｇ犿１１犿１２犿１３空白对照的氧耗量／ｍｇ犿２氧消耗修正值／ｍｇ犿１１－犿２犿１２－犿２犿１３－犿２犅犗犇（ｍｇ／ｍｇ受试物）：　　　　　　　　（犿１１－犿２）／犿３（犿１２－犿２）／犿３（犿１３－犿２）／犿３４犛犖／犜２４９７．２９—２０１０项　　目时间／ｄ狀１狀２狀３狀４狀狓降解犇（％）＝犅犗犇／犜犺犗犇×１００　　　　　　　　　　１２３　　　　　　　　　平均值　　注：参比物可使用类似的格式；在重复试验中有相当大的差别时不要取平均值。犃．６　特定受试物测定项　　目试验结束时受试物的残留量初级生物降解率／％以去离子水做的空白试验犛ｂ含接种物的试验组犛ａ１犛ａ２犛ａ３　　降解率＝犛ｂ－犛ａ犻犛ｂ×１００％，分别计算瓶ａ１，ａ２，ａ３的初级降解率。犃．７　如有犅犗犇与时间的曲线图，应附上。５犛犖／犜２４９７．２９—２０１０书书书０１０２—９２７９４２犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准进出口危险化学品安全试验方法第２９部分：生化需氧量（犅犗犇）测定ＳＮ／Ｔ２４９７．２９—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６　６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６　印张０．７５　字数１１千字２０１０年５月第一版　２０１０年