SNT 0278-2009 进出口食品中甲胺磷残留量检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０２７８—２００９代替ＳＮ０２７８—１９９３进出口食品中甲胺磷残留量检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犲狋犺犪犿犻犱狅狆犺狅狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００９０７０７发布２０１００１１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前　　言本标准代替ＳＮ０２７８—１９９３《出口蔬菜中甲胺磷残留量检测方法》。本标准与ＳＮ０２７８—１９９３相比，主要变化如下：———扩大了使用范围；———增加了液相色谱质谱／质谱确证方法；———取消了ＳＮ０２７８—１９９３的“２　抽样和制样”，增加了“试样制备与保存”；———改进了样品前处理技术路线。本标准附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈捷、王岚、谢建军、林海丹、吴映旋、张莹、丁慧瑛、沈崇钰。本标准于１９９３年首次发布，本次为第一次修订。Ⅰ犛犖／犜０２７８—２００９食品伙伴网进出口食品中甲胺磷残留量检测方法１　范围本标准规定了进出口食品中甲胺磷残留量检测的气相色谱测定和液相色谱质谱／质谱确证方法。本标准适用于进出口大米、绿豆、菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄、甘蓝、板栗、茶叶、猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼、蜂蜜中甲胺磷残留量的测定和确证。２　方法提要样品经乙腈或乙酸乙酯提取后，通过固相萃取小柱净化，采用气相色谱（火焰光度检测器）测定，外标法定量。液相色谱质谱／质谱确证。３　试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。３．１　丙酮。３．２　乙酸乙酯。３．３　正己烷。３．４　乙腈：色谱纯。３．５　甲醇。３．６　无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，在干燥器内冷却至室温，储于密闭干燥器中备用。３．７　氯化钠。３．８　正己烷丙酮（２＋１，体积比）：取正己烷１００ｍＬ，加入５０ｍＬ丙酮，混匀。３．９　甲胺磷标准物质：纯度大于等于９７．０％。３．１０　甲胺磷标准储备液：准确称取适量甲胺磷，用乙酸乙酯配制成浓度为１．００ｍｇ／ｍＬ的标准储备液。该溶液于－１８℃保存。３．１１　甲胺磷标准中间溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙酸乙酯稀释至浓度为１００．０μｇ／ｍＬ的标准中间溶液。该溶液在－１８℃保存。３．１２　甲胺磷标准工作液：使用前根据需要将标准中间溶液用乙酸乙酯稀释成适当浓度的标准工作液。３．１３　石墨化碳黑固相萃取柱：２５０ｍｇ，３ｍＬ，或相当者。３．１４　弗罗里硅土固相萃取柱：１０００ｍｇ，２ｍＬ，或相当者。３．１５　氨基固相萃取柱：２００ｍｇ，３ｍＬ，或相当者。３．１６　ＣＨＲＯＭＡＢＯＮＤＸＴＲ固相萃取柱：３０００ｍｇ，１５ｍＬ，或相当者。３．１７　微孔滤膜：０．４５μｍ，有机系。４　仪器和设备４．１　气相色谱仪：配有火焰光度（ＦＰＤＰ）检测器。４．２　液相色谱质谱／质谱联用仪：配有电喷雾离子源。４．３　天平：感量为０．１ｍｇ和０．０１ｇ。４．４　食品捣碎机。１犛犖／犜０２７８—２００９食品伙伴网４．５　高速均质机。４．６　离心机：６０００ｒ／ｍｉｎ。４．７　旋转蒸发仪。４．８　氮气吹干仪。４．９　旋涡振荡器。４．１０　振荡器。４．１１　固相萃取装置。４．１２　具塞塑料离心管：５０ｍＬ，聚丙烯。４．１３　具塞玻璃刻度试管：５ｍＬ。５　样品制备与保存５．１　样品制备５．１．１　菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄、甘蓝取有代表性样品约５００ｇ（不可水洗），将其可食用部分切碎后，用捣碎机加工成浆状。混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记。５．１．２　大米、绿豆、板栗、茶叶取有代表性样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎并通过孔径２．０ｍｍ圆孔筛。混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记。５．１．３　猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼取有代表性样品约５００ｇ，剔骨去皮，用绞肉机绞碎，混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记。５．１．４　蜂蜜取代表性样品约５００ｇ，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过６０℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器，密封，标明标记。５．２　试样保存茶叶、蜂蜜、粮谷及坚果类等试样于０℃～４℃保存；水果蔬菜类和动物源性食品等试样于－１８℃以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。６　测定步骤６．１　提取６．１．１　大米、绿豆、板栗称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加３ｇ无水硫酸钠（３．６），１５ｍＬ乙酸乙酯（３．２），匀质提取１ｍｉｎ，振荡提取２０ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移取上清液于试管中，再分别用１０ｍＬ乙酸乙酯洗涤残渣两次，合并提取液，４５℃以下氮吹至约２ｍＬ，待净化。６．１．２　菠菜、青豆、柑橘、葡萄、甘蓝准确称取１０ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加３ｇ无水硫酸钠，１５ｍＬ乙酸乙酯，匀质提取１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移取上清液于２５ｍＬ容量瓶中，再用１０ｍＬ乙酸乙酯洗涤残渣一次，涡旋振荡２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，合并提取液于容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。取上述的样本提取液１２．５ｍＬ待净化。６．１．３　猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼肉称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１０ｇ无水硫酸钠，１５ｍＬ乙腈，匀质提取１ｍｉｎ，６０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移取上清液于２５ｍＬ容量瓶中，再用１０ｍＬ乙腈萃取残渣一次，合并提２犛犖／犜０２７８—２００９食品伙伴网取液于容量瓶中，用乙腈定容至刻度，移取１０ｍＬ提取液待净化。６．１．４　茶叶称取０．５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于１０ｍＬ离心管中，加１．５ｍＬ水，浸泡２０ｍｉｎ，加０．２ｇ无水硫酸钠，振荡混匀，再分别用２ｍＬ乙酸乙酯提取３次，旋涡振荡提取，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，合并提取液，待净化。６．１．５　蜂蜜称取２ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加３ｍＬ水，０．５ｇ氯化钠（３．７），振荡混匀，过固相萃取柱（３．１６），保持５ｍｉｎ后，用３５ｍＬ乙酸乙酯淋洗，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，滤液过无水硫酸钠收集于５０ｍＬ浓缩瓶中，在４５℃以下旋转浓缩至约１ｍＬ，待净化。６．２　净化６．２．１　大米、绿豆、板栗石墨化碳黑固相萃取柱（３．１３）用２×２ｍＬ乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化溶液过石墨化碳黑固相萃取柱，再用２×２ｍＬ乙酸乙酯洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集全部流出液于试管中，在４５℃以下氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至１．０ｍＬ，待测。６．２．２　菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄、甘蓝石墨化碳黑固相萃取柱用２×２ｍＬ乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化溶液过石墨化碳黑固相萃取柱，再用２×２ｍＬ乙酸乙酯洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集全部过柱溶液于２５ｍＬ浓缩瓶中，在４５℃下旋转浓缩至约０．５ｍＬ，用乙酸乙酯定容至１．０ｍＬ，待测。６．２．３　猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼、板栗在氟罗里硅土固相萃取柱（３．１４）上填装０．５ｇ无水硫酸钠，用２×２ｍＬ乙腈（３．４）活化，弃去流出液。取１０ｍＬ待净化液过柱，用３ｍＬ乙腈洗脱，收集全部流出液于２５ｍＬ浓缩瓶，在４５℃以下旋转浓缩至约２ｍＬ；再过石墨化碳黑固相萃取柱，在柱上填装０．５ｇ无水硫酸钠，用２×２ｍＬ乙腈活化。将浓缩液过石墨化碳黑固相萃取柱，再用３×１ｍＬ正己烷丙酮（３．８）洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集流出液于试管中，在４５℃以下氮吹至约０．５ｍＬ，用乙酸乙酯定容至２．０ｍＬ，过０．４５μｍ滤膜（３．１７）后，待测。６．２．４　茶叶在石墨化碳黑固相萃取柱上填装０．５ｇ无水硫酸钠，用２×２ｍＬ乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化液过柱，用２×２ｍＬ乙酸乙酯洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集全部过柱溶液，在４５℃下吹氮浓缩至约１ｍＬ。氨基柱（３．１５）先用２×２ｍＬ正己烷丙酮活化，将浓缩液过氨基柱后，３×１ｍＬ正己烷丙酮洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集全部流出液于试管中，在４５℃以下氮吹至约０．５ｍＬ，用乙酸乙酯定容至１．０ｍＬ，待测。６．２．５　蜂蜜在石墨化碳黑固相萃取柱上填装０．５ｇ无水硫酸钠，用２×２ｍＬ乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化浓缩液过石墨化碳黑固相萃取柱，２×２ｍＬ乙酸乙酯洗脱，流速控制为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液于吹氮管中，在４５℃下吹氮浓缩至约０．５ｍＬ，用乙酸乙酯定容至２．０ｍＬ，待测。６．３　测定６．３．１　气相色谱条件ａ）　色谱柱：ＨＰＩＮＮＯＷＡＸ毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ，或性能相当者；ｂ）　升温程序：１２０℃（１ｍｉｎ）１５℃／→ｍｉｎ２００℃（８ｍｉｎ）２５℃／→ｍｉｎ２５０℃（４ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２３０℃；ｄ）　检测器温度：２４５℃；ｅ）　载气：氦气（纯度９９．９９９％），流量４．０ｍＬ／ｍｉｎ；３犛犖／犜０２７８—２００９食品伙伴网ｆ）　进样模式：无分流进样；ｇ）　进样量：１μＬ。６．３．２　气相色谱测定根据样液中甲胺磷含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中甲胺磷响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，甲胺磷的保留时间约为１１．３２ｍｉｎ。标准品的色谱图参见附录Ａ中图Ａ．１。６．４　定性确证６．４．１　犔犆／犕犛犕犛质谱条件６．４．１．１　液相色谱参考条件ａ）　色谱柱：ＳｈｉｓｅｉｄｏＣ１８柱，１５０ｍｍ×２．０ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者；ｂ）　柱温：４０℃；ｃ）　流动相：甲醇水（８０＋２０，体积比）；ｄ）　流速：０．３０ｍＬ／ｍｉｎ；ｅ）　进样量：１０μＬ。６．４．１．２　质谱参考条件ａ）　离子源：电喷雾离子源（ＥＳＩ）；ｂ）　扫描方式：负离子扫描；ｃ）　检测方式：多反应选择离子检测（ＭＲＭ）；ｄ）　电喷雾电压（ＩＳ）：４５００Ｖ；ｅ）　雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；ｆ）　辅助气温度（ＴＥＭ）：３５０℃；ｇ）　定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表１。注：非商业性声明，质谱条件是在ＡＰＩ３０００液相色谱质谱／质谱联用仪上完成，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。表１　甲胺磷定性离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞能量被测物名称定性离子对（ｍ／ｚ）采集时间／ｍｓ去簇电压／Ｖ碰撞能量／Ｖ甲胺磷１４２．２／９４．３１４２．２／１１２．３２００７０２２１８６．４．２　液相色谱质谱／质谱法定性确证当进行ＧＣ样品测定时，检出试样中甲胺磷的量大于方法检测限时，取０．５ｍＬ气相色谱上机测定溶液，用氮气吹干，用甲醇稀释到适当浓度，以ＬＣＭＳ／ＭＳ法定性确证。被测组分选择１个母离子，２个以上子离子，在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准溶液中对应的保留时间偏差在±２．５％之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表２规定的范围，被确证的样品可判定为甲胺磷阳性检出。标准品的子离子全扫描质谱图和多反应监测（ＭＲＭ）色谱图参见附录Ｂ中图Ｂ．１、图Ｂ．２。表２　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０４犛犖／犜０２７８—