GB 31660.8-2019 食品安全国家标准 牛可食性组织及牛奶中氮氨菲啶残留量的测定 液相色谱

GB31660.8—20192019-09-06发布2020-04-01实施食品安全国家标准牛可食性组织及牛奶中氮氨菲啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法Nationalfoodsafetystandard—Determinationofisometamidiumresiduesinbovinetissueandmilkbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod发布GB31660.8—2019前言本标准系首次发布。GB31660.8—2019１食品安全国家标准牛可食性组织中氮氨菲啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了牛肌肉、脂肪、肝脏、肾脏及牛奶中氮氨菲啶残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛肌肉、脂肪、肝脏和肾脏及牛奶中氮氨菲啶残留量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中残留的氮氨菲啶，用乙腈、甲酸铵-甲醇溶液提取，正己烷脱脂，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.4正己烷（C6H14）。4.1.5无水硫酸钠（Na2SO4）。4.1.6甲酸铵（HCOONH4）。4.2溶液配制4.2.10.25mol/L甲酸铵-甲醇溶液：取甲酸铵15.8g，用甲醇溶解并稀释至1000mL。4.2.20.1%甲酸溶液：取甲酸1.0mL，用水溶解并稀释至1000mL。4.2.380%甲醇溶液：取甲醇400mL，用水溶解并稀释至500mL。4.2.4提取液：取乙腈和0.25mol/L甲酸铵-甲醇溶液按1：1（体积比）混匀。4.3标准品GB31660.8—2019２盐酸氮氨菲啶（IsometamidiumChloride,C28H26ClN7,CAS号:34301-55-8），含量≥95.0%。4.4标准溶液的制备4.4.1标准贮备液：取氮氨菲啶标准品10mg，精密称定，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准贮备液。-20℃以下保存。4.4.210µg/mL氮氨菲啶标准工作液：精密量取标准贮备液100µL，于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10µg/mL的氮氨菲啶标准工作液。-20℃以下保存。4.4.3100ng/mL氮氨菲啶标准工作液：精密量取10µg/L的氮氨菲啶标准工作液1mL，于100mL量瓶中，用80%甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ng/mL的氮氨菲啶标准工作液。2～8℃保存。4.5材料滤膜：0.22µm。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。5.3漩涡振荡器。5.4振荡器。5.5组织匀浆机。5.6冷冻离心机。5.7旋转蒸发仪。5.8鸡心瓶：50mL。5.9离心管：50mL。6试料的制备与保存6.1试料的制备6.1.1牛奶取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均匀。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。6.1.2肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。GB31660.8—2019３——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。6.2试料的保存-18℃以下保存。7测定步骤7.1提取称取试料5g（准确至±20mg），于50mL离心管中，加无水硫酸钠2g，再加提取液10mL，涡旋混匀，振荡5min，6000r/min离心10min，取上层液于鸡心瓶中。残渣中加提取液10mL重复提取一次，合并两次提取液于鸡心瓶中，于45℃水浴旋转蒸发至干。备用。7.2净化加80%甲醇溶液2mL于鸡心瓶中，充分涡旋溶解残余物，加正己烷2mL振荡混合1min，转移至10mL离心管中，6000r/min离心5min，弃上层正己烷液。再加正己烷2mL，重复提取一次。取下层清液，滤过，供液相色谱-串联质谱测定。7.3基质匹配标准曲线的制备精密量取100ng/mL氮氨菲啶标准工作溶液或10µg/mL氮氨菲啶标准工作溶液适量，于经提取、蒸干后的空白试料残余物中，用适量80%甲醇溶液溶解并稀释至2.0mL，使氮氨菲啶浓度为20、50、100、200、500、1000ng/mL，滤过，制成系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以特征离子峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.4测定7.4.1液相色谱条件a）色谱柱：BEHC18(100mm×2.1mm，1.7µm)，或相当者；b）柱温：30℃；c）流速：0.2mL/min；d）进样量：10µL；e）流动相：A+B=50+50，其中A相为乙腈（含0.1%甲酸），B相为水（含0.1%甲酸）。7.4.2质谱条件a）电离模式：ESI；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应检测；GB31660.8—2019４d）电离电压：2.8kV；e）源温：110℃；f）雾化温度：350℃；g）锥孔气流速：50L/h；h）雾化气流速：550L/h；i）驻留时间：0.3s；j）定性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞电压见表1。表1氮氨菲啶定性、定量离子对和锥孔电压及碰撞电压药物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞电压V氮氨菲啶460.5/298.5460.5/298.52820460.5/313.5207.4.3测定法取试样溶液和相应的基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，按外标法计算。基质匹配标准溶液及试样溶液中氮氨菲啶的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表2的规定。在上述色谱-质谱条件下，氮氨菲啶基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许范围相对丰度%允许偏差%502020～502510～2030≤10507.5空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。8结果计算和表述试料中氮氨菲啶的残留量按式（1）计算：GB31660.8—2019５mAVACXss…………………………………………（1）式中:X—供试试料中氮氨菲啶的残留量，单位为微克每千克（g/kg）；Cs—基质匹配标准溶液中氮氨菲啶的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；As—基质匹配标准溶液中氮氨菲啶的峰面积；A—试样溶液中氮氨菲啶的峰面积；V—溶解残余物所用溶液体积，单位为毫升（mL）；m—供试试料质量，单位为克（g）。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法的检测限为5µg/kg，定量限为10µg/kg。9.2准确度本方法在10～1500µg/kg添加浓度水平上的回收率为70%～110%。9.3精密度本方法的批内相对标准偏差≤17%，批间相对标准偏差≤20%。GB31660.8—2019６附录A（资料性附录）特征离子质量色谱图图A.1氮氨菲啶基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图（20µg/L）STD-20ng/mLTime0.501.001.502.002.503.003.504.004.50%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.50%010020130520-S1Sm(Mn,2x2)MRMof2ChannelsES+460.5313.51.88e41.0320130520-S1Sm(Mn,2x2)MRMof2ChannelsES+460.5298.55.21e41.03