GB∕T 38007-2019 桑蚕天然彩色丝鉴别试验方法

书书书犐犆犛５９．０８０．０１犠４０!#$%&’’()*犌犅／犜３８００７—２０１９!#$%&’()*+,-犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱犳狅狉犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳狀犪狋狌狉犪犾犮狅犾狅狉犲犱狊犻犾犽狅犳狊犻犾犽狑狅狉犿（犅狅犿犫狔狓犿狅狉犻）２０１９０８３０./２０２００３０１01’(+,-./012!’’()*3/0456./书书书前　　言　　本标准按照ＧＢＴ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由中国纺织工业联合会提出。本标准由全国丝绸标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ４０１）归口。本标准起草单位：苏州大学、安徽省农业科学院蚕桑研究所、鑫缘茧丝绸集团股份有限公司、国家纺织服装产品质量监督检验中心（浙江桐乡）、四川安泰茧丝绸集团有限公司、南通纺织丝绸产业技术研究院、浙江丝绸科技有限公司、淄博大染坊丝绸集团有限公司、达利（中国）有限公司、安徽天彩丝绸有限公司、重庆市纤维检验局、浙江中天纺检测有限公司、上海丝绸集团股份有限公司、合肥海关、嘉兴学院、广西壮族自治区产品质量检验研究院、上海工程技术大学。本标准主要起草人：徐世清、范涛、陈学东、伍冬平、左保齐、储呈平、司马杨虎、姚汉强、文朝钧、张晓光、吴岚、张颖、王光、张玲、史美娟、王济强、刘晓菲、金玉龙、章玉萍、梁海丽、代君君、易洪雷、沈国康、茅明华、辛斌杰、潘静娴。Ⅰ犌犅／犜３８００７—２０１９桑蚕天然彩色丝鉴别试验方法　　警示———使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。１　范围　　本标准规定了桑蚕天然彩色丝鉴别试验的原理、试剂、仪器设备、定性鉴别、天然色素定量检测、试验报告。本标准适用于桑蚕天然黄色丝和桑蚕天然绿色丝的鉴别。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所用的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６５２９　纺织品　调湿和试验用标准大气ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ８１７０　数值修约规则与极限数值的表示和判定３　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１桑蚕天然彩色丝　狀犪狋狌狉犪犾犮狅犾狅狉犲犱狊犻犾犽具有桑蚕自身合成或来自饲料的天然色素的非白色桑蚕丝。３．２色素　犮狅犾狅狉犪狀狋着色剂、染料。注：按来源可分为天然色素和合成色素两类。４　原理４．１　基本原理桑蚕天然彩色丝的颜色和色牢度涉及数十种天然色素，而黄绿色系的色素主要为黄酮类物质，黄红色系的色素主要是类胡萝卜素和黄酮类物质。４．２　桑蚕天然彩色丝的定性鉴别根据类胡萝卜素、类黄酮天然色素与黄色系、绿色系合成色素的酸稳定性与变色差异；类胡萝卜素和类黄酮天然色素只分布在桑蚕丝的表面还是在表面与内部，及酸稳定性时间差异，可定性鉴别桑蚕天然黄色丝、桑蚕天然绿色丝与非天然彩色桑蚕丝（化学合成染料或天然染料染色桑蚕丝）。１犌犅／犜３８００７—２０１９４．３　天然色素的测定用乙醇提取的桑蚕天然彩色丝中的类胡萝卜素和类黄酮天然色素，具有光吸收特性，其紫外可见光吸收图谱具有吸收峰，可用于定量测定。类胡萝卜素和类黄酮天然色素的含量，可衡量桑蚕天然彩色丝的颜色稳定性，是评判桑蚕天然彩色丝合格的参考依据。５　试剂５．１　β胡萝卜素（生化纯级标准品，ＣＡＳ号７２３５４０７，－２０℃保存），纯度≥９０％（ＨＰＬＣ）。５．２　芦丁（生化纯级标准品，ＣＡＳ号１５３１８４，２℃～８℃保存），纯度≥９８％（ＨＰＬＣ）。５．３　７０％乙醇（体积分数，分析纯，含抗氧剂２，６二叔丁基４甲基苯酚，体积分数０．０１％）。５．４　无水乙醇（分析纯）。５．５　正己烷（分析纯）。５．６　乙醚（分析纯）。５．７　氯化钠（分析纯，质量分数１０％）。５．８　无水硫酸钠（分析纯）。５．９　亚硝酸钠（分析纯，质量分数５％）。５．１０　硝酸铝（分析纯，质量分数１０％）。５．１１　氢氧化钠（分析纯，１ｍｏｌ／Ｌ）。５．１２　盐酸（分析纯，８．０ｍｏｌ／Ｌ）。５．１３　水（ＧＢ／Ｔ６６８２规定的三级水）。６　仪器设备６．１　天平分度值≤０．１ｍｇ。６．２　紫外可见分光光度仪检测器检测波长４００ｎｍ～６００ｎｍ，精度±２ｎｍ，分辨力０．２ｎｍ。６．３　电热恒温鼓风干燥箱温度范围为（５０～２００）℃±５℃。６．４　超声波提取器频率４０ｋＨｚ，温度控制范围为：室温至８０℃。６．５　真空干燥器温度控制范围为（５～６５）℃±１℃，温度分辨力不低于０．１℃，真空度小于１３３Ｐａ。６．６　恒温水浴器温度控制范围为：室温至１００℃±１℃。２犌犅／犜３８００７—２０１９６．７　常用玻璃仪器磨口玻璃试管（容积分别为２０ｍＬ和５０ｍＬ），量筒（５０ｍＬ），容量瓶（５０ｍＬ），移液管（１ｍＬ～５ｍＬ，１ｍＬ～１０ｍＬ）。６．８　计时器具备秒表功能，分辨力≤１ｓ。６．９　移液器连续可调量程１００μＬ～１０００μＬ。６．１０　涡旋混匀仪连续可调速度０ｒ／ｍｉｎ～３０００ｒ／ｍｉｎ。７　定性鉴别７．１　样品室温条件下，将待测桑蚕丝样品剪碎、混匀，称取两份质量各为０．１０ｇ±０．０１ｇ代表性试样。７．２　试验步骤７．２．１　将第一份试样放于２０ｍＬ的磨口玻璃试管内底部，然后加入１０ｍＬ的８．０ｍｏｌ／Ｌ分析纯盐酸作为检测试剂，保证被检试样完全浸没于检测试剂中，盖上试管盖，置于６０℃水浴１０ｍｉｎ。再以１５００ｒ／ｍｉｎ转速涡旋振荡试管３０ｓ，混匀溶液颜色。７．２．２　第二份试样放于２０ｍＬ的磨口玻璃试管内底部，然后加入１０ｍＬ的８．０ｍｏｌ／Ｌ分析纯盐酸作为检测试剂，在试样浸入检测试剂１０ｓ～２０ｓ，试样处于胶状固体状态下立即终止反应，快速用水冲洗。７．３　试验结果７．３．１　黄色桑蚕丝第一份试样（７．２．１）溶解或部分溶解后残留物褪色，溶液呈无色或淡黄色；且第二份试样（７．２．２）水洗后，仍保持较原色稍淡的同色系颜色，则为天然黄色桑蚕丝。第一份试样（７．２．１）溶解或部分溶解后残留物颜色加深或变色，溶液变为深黄色或变为其他颜色；或第二份试样（７．２．２）水洗后成无色，则为非天然彩色桑蚕丝（化学合成染料或天然染料染色的桑蚕丝）。７．３．２　绿色桑蚕丝第一份试样（７．２．１）溶解或部分溶解后残留物不变色，溶液呈试样原色；且第二份试样（７．２．２）水洗后仍为较原色稍淡的同色系颜色，则为天然绿色桑蚕丝。第一份试样（７．２．１）溶解或部分溶解后残留物和溶液变色；或第二份试样（７．２．２）水洗后为无色，则为非天然彩色桑蚕丝（化学合成染料或天然染料染色的桑蚕丝）。３犌犅／犜３８００７—２０１９８　天然色素定量检测８．１　样品依据ＧＢ／Ｔ６５２９在标准大气条件下将待测桑蚕丝样品调湿平衡，剪碎、混匀，称取两份具有代表性试样各０．５００ｇ±０．００１ｇ用于色素定量检测。８．２　试样处理将两份试样分别放入５０ｍＬ磨口玻璃试管，向试管中加入７０％乙醇（５．３）１０．０ｍＬ，加盖后４０ｋＨｚ超声波，６０℃水浴超声处理３０ｍｉｎ，然后６０℃水浴２ｈ，０．２２μｍ滤膜抽滤（室温，真空度条件－０．１ＭＰａ）；滤渣再加７０％乙醇（５．３）１０．０ｍＬ，６０℃水浴２ｈ，０．２２μｍ滤膜抽滤；滤渣再加７０％乙醇（５．３）１０．０ｍＬ，６０℃水浴２ｈ，０．２２μｍ滤膜抽滤。合并３次滤液，室温避光条件下真空浓缩，７０％乙醇（５．３）定容至２０．０ｍＬ，作试样液。８．３　标准曲线制作８．３．１　β胡萝卜素标准曲线制作以β胡萝卜素（５．１）作为类胡萝卜素标准品，加无水乙醇，６０℃水浴２ｈ使色素充分溶解，分别配制成０．０μｇ／ｍＬ～４．０μｇ／ｍＬ的浓度等差标准溶液，浓度级差０．４μｇ／ｍＬ，制作β胡萝卜素浓度（横坐标轴）与犃４５０ｎｍ吸光度值（纵坐标轴）标准曲线。８．３．２　芦丁标准曲线制作用芦丁（５．２）作为类黄酮标准品，７０％乙醇溶解，配制成０．０μｇ／ｍＬ～１００．０μｇ／ｍＬ的浓度等差标准溶液，浓度级差１０．０μｇ／ｍＬ，制作芦丁浓度（横坐标轴）与犃５００ｎｍ吸光度值（纵坐标轴）标准曲线。８．４　试验步骤８．４．１　类胡萝卜素测定试验步骤类胡萝卜素含量按照下列步骤进行平行试验：———取试样液（８．２）１．００ｍＬ，加７．０ｍＬ正己烷∶乙醚∶无水乙醇萃取液（体积比为４∶２∶１），充分混匀、静置分层，取上层萃取液；———下层液继续用正己烷∶乙醚∶无水乙醇萃取液（体积比为４∶２∶１）萃取１次，合并上层萃取液；———萃取液中加５．０ｍＬ的氯化钠溶液（质量分数１０％），静置分层后收集上层液；———重复氯化钠洗涤５次；———上层液加入２．０ｇ无水硫酸钠，避光静置１ｈ；———转移上层色素液，５０℃避光干燥过夜；———加入无水乙醇定容至５．０ｍＬ；———紫外可见分光光度仪测定犃４５０ｎｍ吸光度；———以无水乙醇为空白对照；———对照β胡萝卜素标准曲线（８．３．１），求出测定液的类胡萝卜素浓度。４犌犅／犜３８００７—２０１９８．４．２　类黄酮色素测定试验步骤类黄酮色素含量测定按照下列步骤进行平行试验：———取试样液（８．２）５．００ｍＬ，加３００μＬ亚硝酸钠溶液（质量分数５％），摇匀；———静置５ｍｉｎ后加入３００．０μＬ硝酸铝溶液（质量分数１０％），摇匀；———静置６ｍｉｎ后加入１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠４．０ｍＬ，摇匀；———加７０％乙醇定容至１０．０ｍＬ，混匀后静置１０ｍｉｎ；———紫外可见分光光度仪测定犃５００ｎｍ吸光度；———以同样处理的重蒸水为空白对照；———对照芦丁标准曲线（８．３．２），求出测定液的类黄酮色素浓度。８．５　试验数据处理８．５．１　类胡萝卜素含量试样的类胡萝卜素含量按式（１）计算：狑１＝ρ１×２００…………………………（１）　　式中：狑１———试样的类胡萝卜素含量，以类胡萝卜素与桑蚕丝质量分数表示，单位为微克每克（μｇ／ｇ）；ρ１———测定液的类胡萝卜素质量浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；２００———为换算系数，单位为毫升每克（ｍＬ／ｇ）。以两个平行测定结果的算术平均值报告试验结果，按ＧＢ／Ｔ８１７０进行数值修约，保留小数点后１位。８．５．２　类黄酮色素含量试样的类黄酮色素含量按照式（２）计算：狑２＝ρ２×８０…………………………（２）　　式中：狑２———试样的黄酮类物质含量，以黄酮类物质与桑蚕丝质量分数表示，单位为微克每克（μｇ／ｇ）；ρ２———测定液的黄酮类物质质量浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；８０———为换算系数，单位为毫升每克（ｍＬ／ｇ）。以两个平行测定结果的算术平均值报告试验结果，按ＧＢ／Ｔ８１７０进行数值修约，保留小数点后１位。８．５．３　精密度两个平行试样测试结果的绝对差值应不大于这两个测试值的算术平均值的１０％。９　试验报告测试报告应包括下列内容：ａ）　本标准编号；ｂ）　样品颜色，来样日期、试验前的贮存方法；５犌犅／犜３８００７—２０１９ｃ）　定性鉴别试样的溶解、颜色变化情况，溶液颜色变化情况；ｄ）　试样是否为天然彩色桑蚕丝的定性判定结论；ｅ）　试样中的天然色素（类黄酮、类胡萝卜素）含量，如必要，参考附录Ａ进一步说明试样是否为合格桑蚕天然彩色丝；ｆ）　任何偏离本标准的细节或异常情况；ｇ）　试验人员及日期。６犌犅／犜３８００７—２０１９附　录　犃（资料性附录）桑蚕天然彩色丝合格判定　　一般地，对于桑蚕天然彩色丝，依据色素含量的判定如下：———如果检测结果天然色素中的其中一项测定值满足表Ａ．１中Ⅰ列规定的限量值，则判定该试样为合格天然彩色丝；———如果检测结果天然色素中的两项测定值都满足表Ａ．１中Ⅱ列规定的限量值，则判定该试样为合格天然彩色丝。表犃．１　桑蚕天然彩色丝的色素技术指标项目限量值ⅠⅡ天然色素／（μｇ／ｇ）类黄酮≥１５００．０≥７５０．０类胡萝卜素≥５０．０≥５．０犌犅／犜３８００７—２０１９