微生物实验室良好规范-USP-1117

微生物实验室良好规范USP1117BestPracticesAugust2016微生物实验室良好规范无菌技术培养基管理菌种管理设备操作与管理认真的记录与数据评估人员培训微生物数据天生不确定性，高风险重现性与可靠性取决于采用的方法与操作规范培养基管理培养基配制优质培养基取决于制备存储质量控制干粉培养基成品培养基分析证：外购培养基有效期储存条件质控用菌种培养适用检验培养基配制水纯化水：最佳去离子水或蒸馏水：可用低于此质量水：不宜使用必须记录配制水量称量准确天平经过校验，称量范围适用称量容器与工具：清洁记录称量成份培养基配制干粉培养基：应充分溶解后再分装与灭菌不得过分加热配制用设备可控制加热过程：培养基颜色加深（梅拉得反应或非酶解褐变反应）恒定搅拌混和均匀玻璃容器：清洁充分防止抑菌物：来自于洗涤剂或遗留物质用纯化水充分冲洗洗涤剂培养基灭菌按供应商建议或经过验证商业化培养供应商提供灭菌方法优先湿热灭菌：热敏感成分除外无菌过滤灭菌方法与条件：验证无菌验证促生长实验湿热灭菌验证：121C/15min热分布装载方式与装置量装载量过多：灭菌时间可以延长灭菌柜升温过慢：培养基会过热培养基灭菌灭菌冷却后，应立即取出培养基否则培养基会过热灭菌不当：培养基变色培养基变混胶体粘性改变pH改变促生长实验结果变小生长选择性变差培养基灭菌灭菌后pH测定冷却至室温20-25C测定pH：无菌取样外购冷藏培养基：测定pH之前应加热至室温扁平pH探头：琼脂表面浸入式探头：液体培养基pH认可范围：与厂家标定值比较：±0.2培养基储存供应商发货前：贮存与运输方式全过程不得影响培养基水份控制温度防止微生物污染机械保护培养基标识批号制备日期有效期名称培养基储存供应商建议自行配制培养基：验证后的储存条件不得0℃或低于0℃储存）冷冻会破坏培养基胶体结构避光、密闭、避免水份流失培养基溶解只允许一次避免过热与污染水浴加热或自由流动蒸汽（无压力）微波炉或加热板：使用时避免过热注意安全熔化的琼脂培养基：水温45-50℃,不超过8小时培养基分装：水浴水不得流入分装容器培养基质量检查质量影响因素原始成份来源差异：天然产品批与批之间一致性制备过程储存条件影响结果微生物生长情况回收率结果不可靠培养基质量检查自制培养基pH促生长实验制备与灭菌验证之后：可只对进厂干粉否则每批做抑菌性特性检查定期稳定性检查：确认有效期促生长实验用检定菌药典要求供应商指定环境分离菌(非药典要求）培养基质量检查容器或盖子是否有裂纹装量不均匀脱水导致固体培养基表面皴裂或凹陷溶血现象颜色过深或变色冷冻后形成结晶微生物污染氧化还原指示剂状况(redoxindicator)批号与有效期检查，做出记录无菌性平板清洁状况(盖子不得粘附于平板）培养基质量检查有效期：促生长实验数据支持有效期结束时与培养基成分、配方、保存容器类型相关促生长实验失败调查与整改同时出现的阳性结果：阳性结果不可认定为无效菌种鉴别试剂类别，如革兰氏染色剂氧化酶实验试剂质量检查选择正确标准菌生产厂家建议使用前质量检查无菌检验与无菌环境监测培养基双层包装最终灭菌若非最终灭菌，使用前必须100%预培养预培养之后：必须促生长实验防止关键区域污染防止假阳性结果接触碟：必须检查琼脂培养基是否有突起菌种管理菌种管理使用与储存：一致性菌种来源国家菌种中心或有资质的供应商冷冻、冻干、斜面或即时使用型菌种鉴别与纯度：使用前确认即时使用型：使用前进行纯度与鉴别检查至种和属菌种管理菌种制备与复苏供应商建议验证的成熟方法储存原始菌种：使用批号技术国家菌种中心或合格供应商菌种原始菌种首次传代：在低温保护培养基中制备悬液，转移至试管，在-30℃以下保存，供下次使用。若-70C或冻干保存，菌种可长期保存。每月从冷冻管制备工作菌悬液；打开使用后的冷冻管：销毁，避免失活或污染菌种管理工作控制菌的传代次数：transfer可追踪过度传代：增加表形变化或变异的风险应具体规定次数subculture传代的定义passage将存活菌种转移至新鲜培养基继续生长任何形式的移植培养subculture都认定为传代transfer/passage实验室设备微生物实验室设备培养箱水浴灭菌柜必须进行正式验证、定期校验（每年）新设备、关键操作设备根据QA批准的方案进行确认日常清洁：培养箱、冰箱、水浴减少微生物污染培养箱与冰箱门密封条清洁与检查微生物实验室设备pH计、分光光度计定期校验日常检查无法消毒的设备：冰箱、培养箱无菌操作设立专用冰箱或培养箱无菌培养基储存专用无菌样品培养专用菌种操作与处理专用微生物实验室设备灭菌柜验证与确认灭活专用布局与操作微生物实验室布局与操作分区洁净区(无菌区)有菌区环境监测样或无菌产品样品处理与培养区不得有存活微生物：尽可能至少应有物理隔离无菌衣消毒过程仅用于洁净或无菌操作的生物安全柜建立泄漏或事故处理程序所有相关人员培训微生物实验室布局与操作样品长菌需要进一步分析鉴别立即移出洁净区有菌区分离、染色、微生物鉴别、调查只能在有菌区进行有微生物生长的任何样品不得在洁净区打开避免假阳性微生物实验室布局与操作取样人员：不得进入菌种操作区若需进入：必须穿戴防护服、手套、退出时仔细消毒尽量不在实验室菌种操作区域附近工作样品污染：随时可能发生，造成假阳性结果原材料、辅料取样：控制环境中适当着装、灭菌取样工具公用系统取样：如，水，无菌取样方式微生物实验室布局与操作环境监测取样仪器设备的摆放与移除对无菌操作要求较低设备仪器应同时与微生物培养基同时摆放各类无菌检验：应在控制环境中进行无菌制剂原料药发酵菌种生物制品菌种隔离器1208样品操作样品操作操作与储存条件：关键微生物样品：水、环境监测样、生物负荷样关键参数：样品成分包材成份储存时间储存温度取样操作至检验开始的时间严格控制期间的储存条件样品转移到较远处检测运输条件确认：时间、温度等USP1231医药用水样品操作取样前样品混和：必须评估与确认确保样品代表性微生物分布微生物样品取样操作：无菌取样技术取样区域：无菌取样区取样区域尽可能接近取样点减少样品运输途中污染培养时间微生物培养基培养时间培养时间的表达：若小于3天，应准确到小时，30-35℃,18-72hrs至少培养至时长下限，超出时间进行评估检验时间大于72小时，按天表达30-35℃,3–5天上午或下午开始培养，也应同样时间结束人员培训人员培训微生物学教育背景员工主管经理职责明确操作规程的培训检验方法描述文件编号便于检索化验员接受的培训内容建立个人培训档案确认后方能独立操作培训记录时效性：现行版本与SOP人员培训化验员定期技能(核心操作)评估：卫生制备双碟无菌操作记录主管或经理检验操作水平至少等同于其下级化验员主管技能实验室安全计划预算调查技术技术报告编写SOP编写，等人员培训能力证明课程教育相关经验继续教育培训证书主管能力微生物知识与技能学院课程教育培训证书人员培训公司管理层责任：确保微生物检验负责人理解微生物学基本原则有良好知识与能力解释并掌握法律法规与员工有良好沟通能力，在理论与实际操作上指导化验员微生物学工作的严谨性、科学性与化学分析、工程技术不同没有特殊的人员无法从事此项工作资源实验室资源实验室管理人员的职责实验室能力评估要素调查的案例数时间：样品接收至开始检验时间：检验结束至开具报告上述时间过长实验室资源与人员不足预算充足可靠检验结果的保证记录记录管理－受控的证据化验员培训与能力证明设备验证、校验与维护检验过程中设备性能(24小时/7天记录)培养基制备、无菌检查、促生长实验、选择能力培养基库存与质量检验操作程序规定的关键操作数据与计算核实QA或授权经理审核报告数据偏差调查化验室记录的维护化验室记录应包括的要素日期样品名称化验员姓名规程号记录检验结果偏差参数记录设备、微生物菌种、培养基批号主管/复核人签名化验室记录的维护记录关键设备，按期校验、有维保记录、使用日志设备温度（水浴、培养箱、灭菌柜），可追溯SOPSOP名称与版本号方法描述应具体详细书写修改：单线划掉，签字、日期原数据不得擦掉、或涂抹检验结果原始平板计数：便于复核图表：装订应安全、数据可读；骑缝签字化验室记录的维护笔记本页码目录索引（SOP与执行文件号）使用期限记录保存正式文件规定各类记录保存期限检验结果微生物结果表达与解释检验结果与预期明显不同：并不重要，因为各类自然界普遍存在的菌，也是常见环境污染菌取样与处理样品过程：化验员可能带入污染样品或环境微生物菌分布不均匀微生物结果变化性大检验操作尤其重要微生物结果来源可能的污染药品、辅料或检验环境（如丝状真菌）微生物结果表达与解释出现不符合标准结果时偏差调查实验差错实验环境污染产品微生物限度超标应立即通知实验室主管和QA微生物结果超标调查微生物实验室条件彻底调查所有与微生物相关条件和因素实验室环境样品保存条件历史结果样品特性：微生物存活或繁殖程度与标准限度相差程度超标结果变化性：此项超标是否显著访谈化验员无菌检验与无菌环境监测培养基双层包装最终灭菌若非最终灭菌，使用前必须100%预培养预培养之后：必须促生长实验防止关键区域污染防止假阳性结果接触碟：必须检查琼脂培养基是否有突起微生物结果超标调查实验室差错整改计划：批准与执行评估整改有效性首次结果无效做出结论进行复验（按复验SOP）必要时重新取样ThankYou!