DBS22 001-2012 食品安全地方标准 食品中D-异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法

DBS22吉林省地方标准DBS22/001—2012食品安全地方标准食品中D-异抗坏血酸的测定高效液相色谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/001—2012I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：李刚、闫林、王颖、毛燕、冷喜芳、陈雪、李丹、张清、赵文荣。DBS22/001—20121食品安全地方标准食品中D-异抗坏血酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了食品中D-异抗坏血酸测定的高效液相色谱法。本标准适用于饮料、蔬菜水果制品、婴幼儿食品、烘培食品、熟肉制品等食品中D-异抗坏血酸的测定。本标准方法的检出限为1.0mg/kg。2原理试样中D-异抗坏血酸用溶剂提取、稀释后，经液相色谱法亲水作用色谱（hydrophilicinteractionchromatography,HILIC色谱）柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。3试剂和材料除特殊说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为一级水，符合GB/T6682中用水规定。3.1D-异抗坏血酸，CAS号：89-65-6，(含量99.7%)。3.2乙腈（色谱纯）。3.3乙腈。3.4磷酸。3.50.1%磷酸水溶液：吸取磷酸1mL，加一级水定容至1000mL。3.6流动相：精密吸取0.1%磷酸水溶液100mL，加色谱纯乙腈定容至1000mL。3.7D-异抗坏血酸标准溶液的制备（应现配现用）：精密称取D-异抗坏血酸标准品100mg于100mL棕色容量瓶中，加0.1%磷酸水溶液定容至刻度，得D-异抗坏血酸浓度为1mg/mL的标准溶液；精密吸取D-异抗坏血酸标准溶液1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL棕色容量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，得浓度为10µg/mL、20µg/mL、50µg/mL、100µg/mL、200µg/mL的D-异抗坏血酸的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量，用0.45µm一次性微孔滤膜过滤至2mL进样瓶中，待测。4仪器和设备4.1液相色谱仪：配紫外检测器。4.2亲水作用（HILIC）色谱柱：250mm×4.6mm，5µm，10nm或性能相当的其他型号色谱柱。4.3电子分析天平：感量0.1mg。4.4匀浆机。4.5离心机，50mL，4000r/min。4.6超声波清洗器。4.70.45µm一次性微孔滤膜，水相。DBS22/001—201224.80.45µm一次性微孔滤膜，有机相。5样品处理5.1条件检验过程应在避光条件下快速进行。5.2液体试样准确称取试样5g，精确至0.001g，置于50mL容量瓶中，加流动相适量，混匀后，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，取此试样溶液适量，用0.45µm一次性微孔滤膜过滤至2mL进样瓶中，待测。含二氧化碳气体的汽水、可乐等饮料样品需先超声振荡5min，驱除气体后再取样、测定。5.3水溶性固体试样准确称取试样5g，精确至0.001g，置于50mL容量瓶中，加适量0.1%磷酸水溶液至试样溶解，充分振荡，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45µm一次性微孔滤膜过滤至2mL进样瓶中，待测。5.4蔬菜、水果及其罐头制品取有代表性的部分匀浆后，称取试样12.5g，精确至0.001g，置于250mL锥形瓶中，加15mL0.1%磷酸水溶液，超声振荡提取5min，转移全部提取液至50mL离心管中，4000r/min下离心10min。离心后的上清液转移至50mL容量瓶中，用约20mL0.1%磷酸水溶液分2次清洗沉淀，收集上清液至同一50mL容量瓶，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45µm一次性微孔滤膜过滤至2mL进样瓶中，待测。5.5水不溶性固体试样准确称取试样12.5g，精确至0.001g，置于250mL锥形瓶中，精确加入0.1%磷酸水溶液50mL，匀浆后，在4000r/min下离心10min。取上清液10mL，置于25mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45µm一次性微孔滤膜过滤至2mL进样瓶中，待测。6测定6.1测定方法精密吸取试样和标准品溶液，按规定色谱条件分别进样20µL，记录色谱图。以D-异抗坏血酸保留时间定性，外标法峰面积定量。6.2高效液相色谱参考条件亲水作用（HILIC）色谱柱：250×4.6mm，5µm，或性能相当的其他型号色谱柱；检测波长：245nm；流动相：0.1%磷酸溶液+乙腈=10+90；流速：1.0mL/min；进样体积：20µL；柱温：40℃。DBS22/001—201237结果计算结果按式(1)计算：10001000mFVCX..................................(1)式中：X——试样中D-异抗坏血酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——从色谱工作站中读出试液中D-异抗坏血酸的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；V——试样定容体积，单位为毫升（mL）。F——试样的稀释倍数；m——试样质量，单位为克（g）；结果保留3位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。DBS22/001—20124AA附录A（资料性附录）D-异抗坏血酸的液相色谱图抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图见图A.1图A.1抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图1，D-异抗坏血酸（浓度为20µg/mL）；2，抗坏血酸（浓度为20µg/mL）含抗坏血酸和D-异抗坏血酸的食品样品液相色谱图见图A.2图A.2含抗坏血酸和D-异抗坏血酸的食品样品液相色谱图1，D-异抗坏血酸；2，抗坏血酸_________________________________