GB 1903.43-2020 食品安全国家标准 食品营养强化剂 氰钴胺

书书书中华人民共和国国家标准犌犅１９０３．４３—２０２０食品安全国家标准食品营养强化剂　氰钴胺２０２００９１１发布２０２１０３１１实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局发布书书书犌犅１９０３．４３—２０２０１　　　　食品安全国家标准食品营养强化剂　氰钴胺１　范围本标准适用于以微生物发酵生成含钴胺素的发酵液，经转化和结晶得到的食品营养强化剂氰钴胺。２　分子式、结构式和相对分子质量２．１　分子式Ｃ６３Ｈ８８ＣｏＮ１４Ｏ１４Ｐ２．２　结构式２．３　相对分子质量氰钴胺：１３５５．３８（按２０１８年国际相对原子质量）３　技术要求３．１　感官要求感官要求应符合表１的规定。犌犅１９０３．４３—２０２０２　　　　表１　感官要求项　　目要　　求检验方法色泽暗红色状态结晶状颗粒或粉末取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态３．２　理化指标理化指标应符合表２的规定。表２　理化指标项目指标检验方法氰钴胺含量（以干基计），狑／％９６．０～１０２．０附录Ａ．４干燥减量，狑／％≤１２．０附录Ａ．５有关物质，狑／％≤２．０附录Ａ．６丙酮／％≤０．５附录Ａ．７铅（Ｐｂ）／（ｍｇ／ｋｇ）≤１．０ＧＢ５００９．７５或ＧＢ５００９．１２总砷（以Ａｓ计）／（ｍｇ／ｋｇ）≤１．０ＧＢ５００９．７６或ＧＢ５００９．１１　　注：商品化的氰钴胺（维生素Ｂ１２）产品应以符合本标准的氰钴胺为原料，添加工艺所必需的食品原料和／或食品添加剂作为辅料，其质量、范围和使用量应符合相应的食品安全国家标准的规定。犌犅１９０３．４３—２０２０３　　　　附　录　犃检验方法犃．１　警示本标准的检验方法中使用的部分试剂具有毒性或者腐蚀性，操作时应采取适当的安全和防护措施。犃．２　一般规定本标准除另有规定外，所用试剂的纯度应为分析纯，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，应按ＧＢ／Ｔ６０１、ＧＢ／Ｔ６０２、ＧＢ／Ｔ６０３的规定制备，实验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２中三级水的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。犃．３　鉴别试验犃．３．１　试剂和材料犃．３．１．１　丙酮。犃．３．１．２　三氯甲烷。犃．３．１．３　乙醚。犃．３．１．４　盐酸。犃．３．１．５　乙酸钠。犃．３．１．６　溴化钾。犃．３．１．７　氟化钠。犃．３．１．８　硫酸氢钾。犃．３．１．９　次磷酸。犃．３．１．１０　酚酞指示剂。犃．３．１．１１　乙酸（１ｍｏｌ／Ｌ）。犃．３．１．１２　氢氧化钠溶液（１００ｇ／Ｌ）：称取１０ｇ氢氧化钠，加水溶解并定容至１００ｍＬ。犃．３．１．１３　氢氧化钠溶液（２０ｇ／Ｌ）：称取１ｇ氢氧化钠，加水溶解并定容至５０ｍＬ。犃．３．１．１４　１亚硝基２萘酚３，６二磺酸钠溶液（２ｇ／Ｌ）：称取０．１ｇ１亚硝基２萘酚３，６二磺酸钠，缓缓加水溶解并定容至５０ｍＬ。犃．３．１．１５　硫酸溶液（１＋７）：取７０ｍＬ水，缓缓注入１０ｍＬ硫酸，混匀。犃．３．１．１６　硫酸亚铁铵饱和溶液：称取４２ｇ六水合硫酸亚铁铵，加水溶解并定容至１００ｍＬ。犃．３．２　仪器和设备犃．３．２．１　天平：感量０．０００１ｇ。犃．３．２．２　坩埚。犃．３．２．３　蒸馏装置。犃．３．２．４　紫外可见分光光度计。犃．３．２．５　红外光谱仪。犌犅１９０３．４３—２０２０４　　　　犃．３．３　鉴别方法犃．３．３．１　溶解性略溶于水和乙醇，不溶于丙酮、三氯甲烷或乙醚。犃．３．３．２　紫外鉴别准确称取３０ｍｇ试样于１０００ｍＬ容量瓶中，用水定容至刻度，采用紫外可见分光光度计测定，在吸收谱上应出现最大峰２７８ｎｍ±１ｎｍ、３６１ｎｍ±１ｎｍ和５５０ｎｍ±２ｎｍ。３６１ｎｍ波长处的吸光度与２７８ｎｍ波长处的吸光度的比值应为１．７０～１．９０。３６１ｎｍ波长处的吸光度与５５０ｎｍ波长处的吸光度的比值应为３．１５～３．４０。犃．３．３．３　钴原子鉴别取约１ｍｇ试样，加硫酸氢钾约５０ｍｇ，置坩埚中，灼烧至熔融，放冷，用玻璃棒捣碎，加３ｍＬ水，煮沸使溶解，加酚酞指示剂１滴，混匀，滴加氢氧化钠溶液（Ａ．３．１．１２）至显淡红色后，加５００ｍｇ乙酸钠、０．５ｍＬ乙酸和０．５ｍＬ１亚硝基２萘酚３，６二磺酸钠溶液，立即显现红色或橙红色，加盐酸０．５ｍＬ，煮沸１ｍｉｎ，颜色应不消失。犃．３．３．４　氰离子鉴别移取约５ｍｇ氰钴胺试样于盛有５ｍＬ水的５０ｍＬ蒸馏烧瓶中，蒸馏烧瓶连接一个短的、水冷却的垂直冷凝装置，冷凝装置出口端浸入到盛有１ｍＬ氢氧化钠溶液（Ａ．３．１．１３）的测试管中。样品溶解于蒸馏烧瓶中后，加入２．５ｍＬ次磷酸，连接好冷凝装置，缓慢加热煮沸１０ｍｉｎ，收集１ｍＬ蒸馏液于测试管中。测试管中加入４滴冷的、硫酸亚铁铵饱和溶液，轻摇，加入３０ｍｇ氟化钠，加热至沸腾，立即加入几滴硫酸溶液至溶液变澄清，再加入３滴～５滴硫酸溶液，数分钟内溶液变成蓝色至蓝绿色。犃．３．３．５　红外鉴别将溴化钾压片试样的谱图与氰钴胺标准品的红外光谱图（见附录Ｂ中图Ｂ．１）比较，两者应基本一致。犃．４　氰钴胺含量犃．４．１　仪器和设备犃．４．１．１　天平：感量０．０００１ｇ。犃．４．１．２　紫外分光光度计。犃．４．２　分析步骤精确称取约０．０２５ｇ（精确至０．０００１ｇ）干燥试样于１０００ｍＬ容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀得到试样溶液。用紫外可见分光光度计测定。以水作空白，采用１ｃｍ比色皿在３６１ｎｍ处测定试样溶液吸光度值。犃．４．３　结果计算氰钴胺含量（以干基计）的质量分数狑１，按式（Ａ．１）计算，以％表示。狑１＝犃２０７×犞犿×１００％…………………………（Ａ．１）犌犅１９０３．４３—２０２０５　　　　　　式中：犃———氰钴胺紫外吸光值；２０７———氰钴胺的标准百分吸收系数（犈１％１ｃｍ）；犞———试样定容的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样的质量（以干基计），单位为克（ｇ）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准，保留一位小数。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的２．０％。犃．５　干燥减量犃．５．１　方法原理干燥减量是指试样在１０５℃±２℃温度下干燥后，失去水分及其他挥发性物质的质量与试样质量之比，用百分数表示。犃．５．２　仪器和设备犃．５．２．１　天平：感量０．０００１ｇ。犃．５．２．２　称量瓶。犃．５．２．３　真空干燥箱。犃．５．３　分析步骤称取５０ｍｇ（精确至０．０００１ｇ）试样，置于已干燥恒重（１０５℃±２℃，３０ｍｉｎ）的称量瓶中。将试样在称量瓶中均匀铺开。在１０５℃±２℃、真空压力低于２．６７ｋＰａ条件下干燥至恒重。将称量瓶置于干燥器中冷却至室温，称量。犃．５．４　结果计算试样干燥减量的质量分数狑２，按式（Ａ．２）计算，以％表示。狑２＝犿１－犿２犿１－犿０×１００％…………………………（Ａ．２）　　式中：犿１———干燥前带有样品的称量瓶的质量，单位为克（ｇ）；犿２———干燥后带有样品的称量瓶的质量，单位为克（ｇ）；犿０———干燥后称量瓶的质量，单位为克（ｇ）。计算结果保留２位有效数字。取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于１．０％。犃．６　有关物质犃．６．１　方法原理试样用流动相溶解后，采用液相色谱仪检测，峰面积比较法定量。犃．６．２　试剂和材料犃．６．２．１　氯胺Ｔ。犌犅１９０３．４３—２０２０６　　　　犃．６．２．２　甲醇。犃．６．２．３　磷酸氢二钠。犃．６．２．４　磷酸。犃．６．２．５　盐酸。犃．６．２．６　磷酸氢二钠溶液：０．０２８ｍｏｌ／Ｌ。称取１０．０３ｇ十二水合磷酸氢二钠，加水溶解并定容至１０００ｍＬ。犃．６．２．７　盐酸溶液：０．０５ｍｏｌ／Ｌ。取４．５ｍＬ盐酸，加水至１０００ｍＬ，混匀。犃．６．２．８　氯胺Ｔ溶液：０．１％。量取０．１ｇ氯胺Ｔ，加水溶解并定容至１００ｍＬ。犃．６．３　仪器和设备犃．６．３．１　天平：感量０．０００１ｇ。犃．６．３．２　高效液相色谱仪：配有紫外检测器。犃．６．４　分析步骤犃．６．４．１　试样溶液：称取试样１０ｍｇ于１０ｍＬ容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，混匀。犃．６．４．２　对照溶液：精密量取１ｍＬ试样溶液于１００ｍＬ量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。犃．６．４．３　系统适用性溶液：称取试样２５ｍｇ于２５ｍＬ容量瓶中，加１０ｍＬ水溶解样品，加入５ｍＬ０．１％氯胺Ｔ溶液、０．５ｍＬ０．０５ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置５ｍｉｎ。准确量取１ｍＬ上述溶液于１０ｍＬ量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。犃．６．４．４　灵敏度溶液：准确量取１ｍＬ对照溶液于１０ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。犃．６．５　参考色谱条件犃．６．５．１　色谱柱：Ｃ１８色谱柱（柱长２５０ｍｍ，内径４．６ｍｍ，粒径５μｍ），或其他等效色谱柱。犃．６．５．２　流动相：取２６０ｍＬ甲醇和７４０ｍＬ磷酸氢二钠溶液（Ａ．６．２．６）混匀，用磷酸调节ｐＨ至３．５。犃．６．５．３　柱温：２５℃。犃．６．５．４　检测器波长：３６１ｎｍ。犃．６．５．５　进样量：１０μＬ。犃．６．５．６　运行时间：氰钴胺主峰保留时间的３倍。犃．６．６　系统适用性试验采用新制备的溶液，且避免强光照射。按照液相色谱仪操作规程操作，取系统适用性溶液（Ａ．６．４．３）和灵敏度溶液（Ａ．６．４．４）分别注入液相色谱仪中，观察色谱图。系统适用性溶液中应出现氰钴胺峰与一个降解产物峰（相对保留时间约为１．４），二者的分离度应大于２．５，灵敏度溶液中主峰的信噪比应大于３。犃．６．７　测定系统适用性合格后再进行试样检测。依次注入试样溶液（Ａ．６．４．１）、对照溶液（Ａ．６．４．２）进行测定。犃．６．８　结果计算试样中有关物质的含量狑３，按式（Ａ．３）计算，以％表示。狑３＝犃１犃２×１００×１００％…………………………（Ａ．３）犌犅１９０３．４３—２０２０７　　　　　　式中：犃１———试样溶液除主峰以外的所有杂质峰面积之和；犃２———对照溶液主峰面积。犃．６．９　精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的１０％。犃．７　丙酮犃．７．１　试剂和材料丙酮：色谱纯。犃．７．２　仪器和设备犃．７．２．１　天平：感量０．００１ｇ。犃．７．２．２　气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）和顶空进样器。犃．７．３　参考色谱条件犃．７．３．１　色谱柱：毛细管柱（柱长６０ｍ，内径０．３２ｍｍ，膜厚１．６μｍ，固定液为６％氰丙基苯基９４％二甲基聚硅氧烷），或其他等效色谱柱。犃．７．３．２　载气：氮气（纯度大于９９．９９％）。犃．７．３．３　载气流量：１．５ｍＬ／ｍｉｎ。犃．７．３．４　柱温：４０℃保持１０ｍｉｎ后，以２０℃／ｍｉｎ的速率升温至２４０℃，保持２ｍｉｎ。犃．７．３．５　进样口温度：１４０℃。犃．７．３．６　检测器温度：２５０℃。犃．７．３．７　检测器气体流量：空气，４００ｍＬ／ｍｉｎ；氢气，６０ｍＬ／ｍｉｎ；尾吹气，２５ｍＬ／ｍｉｎ。犃．７．３．８　进样量：１．０ｍＬ。犃．７．３．９　分流比：１∶５０。犃．７．４　参考顶空条件犃．７．４．１　顶空瓶平衡温度：８０℃。犃．７．４．２　平衡时间：４５ｍｉｎ。犃．７．４．３　定量环温度：９０℃。犃．７．４．４　传输线温度：１００℃。犃．７．５　分析步骤犃．７．５．１　空白溶液制备移取５．０ｍＬ水，置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖。犃．７．５．２　标准溶液制备称取０．１ｇ丙酮（精确至０．００１ｇ）于已预加８０ｍＬ水的１００ｍＬ容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，得到１０００ｍｇ／Ｌ的丙酮标准储备液。吸取适量的丙酮标准储备液于１０ｍＬ容量瓶中，用水配制成１０ｍｇ／Ｌ、２０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ的丙酮标准使用溶液，取上述系列溶液各５．０ｍＬ，犌犅１９０３．４３—２０２０８　　　　分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖。犃．７．５．３　试样溶液制备称取试样０．１ｇ（精确至０．００１ｇ）于１０ｍＬ容量瓶中，用水溶解后定容至刻度，摇匀，得到