肾活检病理组织染色

一、常规染色技术（HE染色）苏木素-伊红染色简称HE染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。（一）需要试剂①苏木素染液；②1%盐酸乙醇液；③氨水；④1%伊红液。（二）具体染色步骤1.切片常规脱蜡入水。2.苏木素染细胞核1～2min，水洗。3.入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。4.氨水返蓝数秒。5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。6.1%伊红染数秒，水洗。7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。（三）注意事项1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。二、特殊染色技术（一）过碘酸-希夫氏染色（PAS染色）PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。1.需要试剂①1%过碘酸；②schiff氏液染；③苏木素染液；④氨水。2.具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。（2）入1%过碘酸氧化10～15min，水洗。（3）入schiff氏液染10～30min，水洗。（4）苏木素染细胞核1～2min，水洗。（5）入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。（6）氨水返蓝数秒。（7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果PAS阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。4.注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2）Schiff氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深，时间过短标本基底膜着色淡。（3）入1%盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本退色。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。（二）六胺银-马松染色（PAM-Masson染色）PAM-Masson染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为精确。1.需要试剂①1%过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水；⑤Masson液；⑥1%亮绿液。2.具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。（2）入1%过碘酸氧化10～15min，水洗5min。（3）入六胺银液72℃染30～50min，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。（4）加2%氯化金数滴于组织，5%硫代硫酸钠洗。（5）苏木素染细胞核1～2min，1%盐酸乙醇分化，氨水返蓝。（6）入Masson液约10min，1%醋酸洗。（7）入1%亮绿5～8min，1%醋酸洗。（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。4.注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2）染色时间与室温和切片厚度有关，室温低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。（3）2%氯化金分化时间要短，时间长容易使银染退色。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。（三）马松染色（Masson染色）Masson染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾间质纤维化程度。1.需要试剂①苏木素染液；②氨水；③Masson液；④1%亮绿液。2.具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。（2）媒染剂（10%重铬酸钾、10%三氯醋酸等量混合）染10～30min，水洗。（3）苏木素染细胞核1～2min，水洗。（4）入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。（5）入Masson液约10min，水洗，1%醋酸洗。（6）入2.5%磷钨酸约30s，水洗，1%醋酸洗。（7）入2%橘黄G约2min，水洗，1%醋酸洗。（8）入1%亮绿5～8min，1%醋酸洗。（9）入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。4.注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2）入Masson液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。（3）入1%亮绿染色时间需要镜下控制，时间长容易覆盖Masson液红色。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。（四）刚果红染色在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。1．需要试剂①高锰酸钾—硫酸液；②苏木素染液；③氨水；④碱性刚果红液。2．具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。（2）高锰酸钾-硫酸混合处理3min，水洗。（3）5%草酸处理3min，水洗。（4）苏木素染核2min，水洗，蓝化。（5）碱性刚果红液染10～30min。（6）入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3．染色结果细胞核蓝色，淀粉样物质呈砖红色（图3-12）。4．注意事项（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2）碱性刚果红液染色时间应该镜下控制，染色液现配现用着色好。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。