脂类细胞化学苏丹III染色

脂类细胞化学苏丹III染色实验目的了解脂肪染色的原理、操作步骤及脂类标本制片原理。实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多，将会影响其正常功能。如脂肪肝。脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片明胶包埋冰冻切片铺片法实验材料1.材料：一月大小鼠2.试剂：苏丹Ⅲ染液70%乙醇溶液甲醛钙蒸馏水3.器具：显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定20分钟。2.吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。3.用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。4.用苏丹Ⅲ染色30分钟5.吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察。实验结果A．10倍下的脂肪细胞B．40倍下的脂肪细胞显微镜下，在毛细血管两侧，可观察到圆形的脂肪细胞，细胞内有橙色的脂肪粒，细胞核被挤到细胞边缘不明显。细胞外也有分散的脂肪粒。讨论与反思1.解剖小鼠时肠系膜容易破损，应该用镊子小心操作。2.应选取尽可能薄的，有明显血管的肠系膜。3.染色时应不断滴加染液，使其保持湿润，染色效果更好。4.高倍镜下很难观察到单层的细胞，可能是由于肠系膜取材过厚，导致多层细胞堆叠在一起。AB