细胞工程考试

11细胞全能性：营养生长中心形成层薄壁细胞厚壁细胞特化细胞；受精卵生殖细胞体细胞2培养基一般由无机营养、碳源、维生素、植物生长物质、有机附加物等五类物质组成。3快繁技术分为4个阶段：无菌培养物的建立，培养物的增殖，诱导生根，试管苗的移栽。4根据外植体的不同，植物组织培养可以分为几种？比较常用的是哪些？植物组织培养可以分成植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养六大类。5植物组织培养有哪些特点？植物组织培养具有经济高效，管理方便，利于自动化，技术含量高，实验误差小，人工控制能力强，生长周期短，生长速度快，实验重复性好等特点。6植物组织培养基的基本类型及其组成：①MS、MT、White、Nirsch、Blaydes、N6、B5、NT②大量元素、微量元素、维生素、氨基酸、糖和水7组织培养中，pH有什么作用？如果pH过高或过低会有什么后果？①由于PH值直接影响培养材料对营养的吸收，因此影响到新稍的生长、繁殖。植物在自养条件下是可以自行调节体内酸碱度的，但在立体条件下，则失去自行调节能力，因此配置培养基时，调节培养基PH值是必要的。②不同植物对培养基PH值的要求是不一样的，大多在5.0—6.5，PH值适度因材料不同而异。PH过高时，培养基会变硬；PH过低时，则影响培养基的凝固。8实验人员进入接种室接种之前,应做哪些准备工作?进入接种室前，操作人员应先用肥皂水洗净双手，操作前再用70%酒精擦洗双手。接种服、帽子、口罩等要经常清洗，保持干净，并利用高温湿热灭菌方法，定期灭菌。也可以紫外线照射灭菌。操作时操作人员应穿好工作服，带好工作帽，把接种器械沾以70%酒精灼烧灭菌，灭菌过的器械接种前严禁再度感染，并要特别注意防止“交叉传染”造成的污染。9在接种过程中,通过哪些措施来防止细菌对接种工具、接种材料的污染?首先接种前一定要用消毒水擦拭，70%~75%酒精进行喷洒杀菌降尘，不管是开母苗之前还是接种过程或是开关子瓶培养基，都应该在酒精灯上操作。操作过程中所有的动作都应尽量的小幅度，特别是不能横扫所有灭过菌的东西；接苗是手指不能接触到瓶口，如果镊子不小心碰到瓶口或台面那就不要犹豫，直接换掉；分切的整个过程动作要快，时间越长越容易污染。每份切完一瓶都要进行台面的清洁及消毒。210对外植体表面消毒时为什么常用〃两次消毒法″?使用消毒剂的原则是既要达到消毒目的，又不能损伤植物组织和细胞，还要符合就地取材的原则。对一些容易污染、较难灭菌的外植体进行表面消毒时，用单一消毒剂不能收到好的效果，所以常选用两种消毒剂交替浸泡法。一般，首先用75％乙醇浸泡外植体数秒钟至30s，然后置于0.1％氯化汞溶液5～10min或含有2％活性氧的次氯酸钠溶液5～30min，然后用无菌水洗涤。11外植体用消毒剂消毒后,为什么要用无菌水漂洗?为什么常在消毒溶液中加入l-2滴表面活性剂(如吐温)?①消毒水都具有很强的烧蚀性，在杀灭细菌的同时，也会作用于正常的细胞组织，影响正常细胞的成长或再生，所以外植体消毒后一般要用无菌水漂洗，以清除残留的具有杀伤力的消毒剂。②消毒液的作用是杀菌，但是有可能所要杀菌的物体表面存在一些油脂污物，这些油脂覆盖着细菌，起到了一定的保护作用。而细菌本身也是有机物，有一定拒水性，消毒液不容易深入到菌团内部去。消毒液中加入表面活性剂的目的主要是将消毒液渗透、扩撒到菌团内部，充分发挥消毒液的作用。12什么是细胞株？什么是细胞系？两者相同吗？①细胞系：指从原代培养物经传代培养后得来的一群不均一的细胞，是由原先存在于原代培养物的各种细胞类型所组成的。②细胞株：通过选择或克隆化培养，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群。③区别:a它们都是传代培养里面的概念.都是10代以后的b细胞株是传代培养里10~50细胞株&细胞系c对于细胞繁殖而言,传到10代就很不容易了,所以细胞株是极少数的细胞d50代以后,细胞繁殖会出现另一个危机,基本上没有什么细胞能再传下去了.但是,有细胞发生了基因突变,像一个癌细胞一样无限地分裂下去,这就是细胞系.13简述动物细胞传代培养的操作程序及注意事项？①在传代培养前，首先将培养瓶置倒置显微镜下，观察细胞是否已长成致密单层，如已长成单层，则可进行细胞的传代培养。②为了维持细胞系的正常生长，一般要在细胞进入衰退期以前及时进行下一轮的传代培养。③无菌操作、及时观察细胞的生长状态14细胞凋亡的实践意义？参与体内细胞数量的调节，清除体内多余、无用的细胞；清除体内衰老、病变的细胞；维持组织器官中细胞数目的相对稳定；在发育和机体的稳态调节中发挥重要的作用315接种的植物材料如何进行预处理?如何接种?A、预处理：①对采来的植物材料进行适当的预处理：除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。②用洗衣粉水等浸洗上述植物材料约5min，再用自来水冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。B、接种：①将经预处理过的植物材料放入烧杯，加入一定量的表面活性剂的消毒液并开始计算灭菌时间。也可在使用上述灭菌剂之前，先将植物材料浸于70%乙醇灭菌10~30秒。②在灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动，促进植物材料各部分与消毒液充分接触，驱除气泡，使灭菌彻底。在灭菌时间结束前1min时，将消毒液慢慢倒入废物缸。接着立即倒入适量无菌水，轻搅植物材料以清洗去除灭菌剂残留。无菌水的清洗时间每次约3min；清洗5次。③逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于下面垫有经灭菌处理的培养皿的无菌纱布或滤纸上，将植物切成恰当的大小形状。在完成切割后，将解剖刀和小镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，待用。④接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在靠近酒精灯外焰处转燎数秒。在酒精灯焰附近处，打开瓶塞；再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼烧灭菌；用大镊子夹紧一外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固体培养基；将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，待用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将其置于超净工作台的适当位置。16什么是细胞凋亡？细胞凋亡与细胞坏死的区别？①细胞凋亡：即细胞程序性死亡，是通过细胞内固有的生理、生化反应或某种酶的活化而导致的细胞死亡。②区别：a细胞凋亡指的细胞的程序性死亡，细胞被自身的酶降解，按一定的步骤“自杀”，其死亡细胞仍为一整体，最终被白细胞吞噬。b细胞死亡是由外界条件引起的，细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应。说白了细胞凋亡通常是正常的，而坏死则是不正常的。17细胞凋亡的特点：核固缩、胞质浓缩、细胞体积急剧变小、细胞骨架解体等特征18固体培养基的配制步骤：①按母液顺序和规定量，用量筒和移液管提取母液，放入1000ml的容量瓶中；②加入植物生长调节剂，加入的种类与数量，视培养物不同而异，有时也可不加。③加入蔗糖30g，溶解定容至1000ml，再放入7g琼脂。④调整PH值，经酸度计测试，用0.1mol/LNaOH（HCl）把培养基PH值调整至5.8-6.0。⑤在电磁炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂不断熔化。⑥分装培养基，把配好的培养基分装到50-150ml的培养瓶中，分装后立即加盖封口，用记号笔注明培养基名称。4实验一MS培养基母液的配制与保存、固体培养基的配制在经常需要配制培养基时，为了使用方便，一般将常用药品配制成比所需浓度高10~100倍的母液，这样，每种药品称量一次，可以使用多次，同时也可减少多次称量所造成的误差。配制培养基时，按比例吸取母液即可。培养基又分为基本培养基、完全培养基、固体培养基、液体培养基。培养物仅能吸收接触培养基部分及周围小部分营养，不能充分利用培养容器中的养分，而且培养物生长过程中，排出的有害物质的积累，造成自我毒害，必须及时转移。配制好的培养基分装于各培养瓶，扎口，经高压灭菌后，在黑暗条件下保存备用。实验二胡萝卜的组织培养胡萝卜跟部具有完整的分生组织细胞，这一类的细胞具有全能性，能在无菌的环境下，添加相关的植物激素刺激诱导分生区细胞分裂形成愈伤组织。实验三蔷薇的快繁植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。实验四菊花的组织培养凡是暴露在(未经处理的)空气中的物体,曾经接触过自然水源的物体都是有菌的。培养基中含有大量的有机物,特别是含糖量较高,是得种微生物滋生、繁殖的极好场所。而接种材料需要在无菌得件下培养很长的时间,如果培养基被微生物所污染,便达不到培养的预期结果,因此,培养基的灭菌,是植物组织培养中十分重要的环节。培养基灭菌的方法有多种,我们这里主要用的是高压蒸气灭菌法。实验五悬浮细胞的培养在固体培养基中，植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布，随着植物对营养物质的吸收，离遇上组织越远，营养物质的含量组建增高。而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响。当植物的组织在液体培养基中生长时，可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。5实验六细胞传代培养细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也使细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养是指将细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养过程。传代培养的第一步是制备细胞悬液，当细胞生长成致密单层时，很容易被胰蛋白酶和金属离子螯合剂（EDTA，乙而胺四乙酸盐）所破坏。因为EDTA对钙、镁离子具亲和力，而这两种离子又是细胞保持紧密结合的贴壁生长所必需的因素。所以一般采用胰蛋白酶和EDTA的混合物（也可分别单独使用）作为消化液，将细胞分散后进行传代培养。体外培养的各种细胞株或细胞系，它们的传代方法基本相同，所不同的是它们所需的营养液各异。实验七细胞的形态观察动物细胞在体外培养过程中有着各种不同的形态特征，可以通过相差显微镜直接进行活体观察，或通过特定的化学染色进行观察。细胞化学染色方法很多，其中Giemsa、HE、吖啶橙等是常用的染色方法。实验八细胞的活性测定（一）FDA-PI双色荧光检测法是利用FDA能被活体细胞所吸收，掺入活细胞后，在细胞内醋酸酯酶等作用下，释放出荧光素，在蓝色光激发下发射出黄绿色的荧光来，细胞活性越高，则酶活性越高，黄绿色荧光越强；PI只能进入有缺损的膜或固定的死亡细胞，在蓝色光激发下发射出桔红色的荧光。实验九细胞的活性测定（二）MTT检测法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶对噻唑蓝（tetrazolium，简称MTT）还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒（Formazan），经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在波长490nm处测定其光吸收值，其值可间接反映细胞的活性状态以及活性细胞的数量。实验十细胞凋亡的诱导及生化检测凋亡的细胞散在正常组织中，凋亡小体很快被巨噬细胞或临近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能，无炎症反应，不遗留瘢痕。凋亡细胞的形态学表现为核固缩、胞质浓缩、细胞体积急剧变小、细胞骨架解体等特征。细胞凋亡时生化方面的变化也是复杂、多样。1977年，Kaiser等报道，用糖皮质激素诱导细胞凋亡伴随有胞浆钙离子升高。1990年，Wyllie报道，胸腺细胞发生凋亡时，其DNA琼脂糖凝胶电泳呈特征性“梯状”条带（ladder）。细胞凋亡时，一些依赖于钙、镁离子的内源性核酸内切酶被激活，将细胞