叶酸同型半胱氨酸与哈萨克族食管癌关系的研究

新疆医科大学31期硕士论文开题报告题目：叶酸、同型半胱氨酸与哈萨克族食管癌关系的研究教研室营养与食品卫生学教研室研究生姓名专业营养与食品卫生学研究方向营养与健康指导教师姓名及职称*****·买买提明教授******·夏合丁教授课题开始时间2010年1月2目录立题依据……………………………………………………………...3研究目的………………………………………………………………5研究内容………………………………………………………………5研究方法…………………………………………………………….....5预期结果………………………………………………………………7质量控制………………………………………………………………9可行性分析……………………………………………………………10创新之处………………………………………………………………10经费预算………………………………………………………………11进度安排………………………………………………………………11参考文献………………………………………………………………123一、立题依据：1.叶酸叶酸(folicacid,FA)是由蝶啶、对氨基水杨酸及谷氨酸基组成的一种水溶性B族维生素,自20世纪问世以来,主要应用于FA缺乏所致的巨幼红细胞性贫血。由于FA是辅酶家族的重要成员,FA经二氢叶酸还原酶及维生素B12作用,形成四氢叶酸(THFA),THFA与多种一碳单位(包括CH3、CH2、CH、CHO等)结合成THFA类辅酶传递一碳单位,参与机体很多重要反应及核酸、氨基酸(蛋氨酸、丝氨酸、组氨酸等)的合成。因此,FA缺乏会引起机体多系统受损。叶酸在细胞生长、分化、修复和宿主防御等方面扮演重要角色,对于嘌呤和嘧啶的合成、dUMP向dTMP的转化、DNA甲基化过程具有决定性的作用。叶酸作为甲基供体在基因调控所需的甲基化过程中起重要的作用,一旦叶酸缺乏将会导致DNA甲基化的模式转变,DNA链乃至染色体断裂,所以普遍认为叶酸缺乏具有诱变效应并与人类肿瘤的发生密切相关[1]。有研究证明,叶酸缺乏与多种肿瘤的发生呈显著正相关[2,3]。叶酸缺乏和/或叶酸代谢障碍可能通过破坏DNA的正常甲基化和基因组的完整性而致癌[4]。故每日吃一份含有叶酸0.4mg的谷类早餐或服用小剂量合成叶酸5～10mg，是预防或减少消化系统疾病危险的一种有效方法[5]。2.同型半胱氨酸同型半胱氨酸(Hcy)又称高半胱氨酸,来自于食物中的蛋氨酸,是体内蛋氨酸循环的重要中间产物。叶酸或维生素B12、维生素B6缺乏均可导致高同型半胱氨酸血症。已有文献报道,高同型半胱氨酸血症是乳腺癌等恶性肿瘤的危险因素[6]。体内同型半胱氨酸经三条途径进行代谢[7]：1.再甲基化途径；2.转硫化途径；3.释放。影响Hcy水平的主要因素为遗传因素、食物营养缺乏、年龄与性别、肾功能损伤、药物等。3.叶酸与同型半胱氨酸叶酸缺乏可以使同型半胱氨酸向胱氨酸转化出现障碍，导致同型半胱氨酸在血中堆积，形成高同型半胱氨酸血症。高浓度同型半胱氨酸不仅会损害血管内皮细胞，而且可激活血小板的黏附和聚集，因而被认为是动脉粥要硬化及心血管疾病的重要致病因素[8]。44.叶酸、同型半胱氨酸与食管癌食管癌(esophagealcancer,EC)是食管鳞状上皮的消化系统恶性肿瘤，以进行性下咽困难为最典型的临床症状，主要流行于发展中国家,在世界范围内其发病率位居所有肿瘤的第8位,每年约有46万例食管癌新发病例,被认为是继胰腺癌之后第二位难以治愈的消化道恶性肿瘤[9]。食管癌预后较差,即使在发病早期进行手术,其5年生存率也低于5%,全世界每年约有40万人死于食管癌[10],严重威胁人类的健康和生命。中国每年约有25万新诊断的食管癌病例，是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家，占全世界的50％以上，发病率仅次于胃癌、肺癌、肝癌之后居第4位[11-14]。食管癌的发病率有明显的地域差别，其中新疆是中国食管癌高发区之一,新疆的哈萨克族是食管癌最高发民族,其调整死亡率为68.88/10万，部分地区(塔城地区托里县)高达90.75/10万[15]。王秀梅[16]等曾探讨了叶酸代谢过程中重要的酶体系亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性与哈萨克族食管癌易感性，采用1∶2配比的病例对照研究方法,共调查92例食管癌患者和184名正常对照。应用聚合酶链-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)方法检测基因型。结果发现食管癌组中，MTHFR677CC、CT、TT基因型频率分别为52.2%，43.5%，4.3%，(χ2=10.492,P=0.005)，与正常对照中的70.7%，24.5%，4.7%相比较，有显著性差异。表明叶酸缺乏及MTHFRC677T基因多态性是哈萨克族食管癌发生的危险因素。高长明等[17]曾探讨了叶酸代谢过程中重要的酶体系亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)A1298C多态性及血浆同型半胱氨酸水平与食管癌的关系。采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态分析法对141例食管癌患者(食管癌组)及228例无肿瘤史的一般人群(对照组)进行亚甲基四氢叶酸还原酶基因A1298C等位基因检测，并同时用高效液相色谱法测量两组人群血浆中的同型半胱氨酸水平。结果发现食管癌组MTHFR1298AA、AC和CC基因型分别为63.8％、34.0％和2.1％，于对照组的7l.9％、28.1％和O.O％相比较，差异有显著性(PO.05)，食管癌组血浆同型半胱氨酸水平为(14.98士3.86)umol／L，于对照组相比较差异有显著性(PO.01)。表明MTHFRAl298C多态是食管癌发病的遗传危险因素。5二、研究目的：2.1了解新疆伊犁地区新源县哈萨克族食管癌患者的膳食结构及营养状况，血清叶酸、血浆同型半胱氨酸水平。2.2分析新疆伊犁地区新源县哈萨克族食管癌患者的膳食结构和营养状况，为哈萨克族食管癌患者的合理营养平衡膳食提供依据。2.3探讨血清叶酸、血浆同型半胱氨酸及MTHFRA1298C多态性与哈萨克族食管癌的关系。三、研究内容：3.1问卷调查：获得知情同意后对研究对象进行流行病学调查，调查内容主要包括：基本情况（姓名、性别、年龄、婚姻状况、职业、工作压力、家庭月平均收入等）、生活饮食情况（吸烟、饮酒、饮茶、蔬菜水果的消费量、叶酸服用史）、遗传史和慢性病史（是否有肿瘤家族史，家族成员与本人现患疾病史）。一生中连续或累计吸烟6个月以上者定义为“吸烟者”，“饮酒者”定义为每周至少饮酒2次，连续饮酒1年及以上者。3.2膳食调查：采用24小时膳食回顾调查法记录研究对象连续3日的膳食种类和重量，记录前由经统一培训的专业人员讲解“24小时膳食调查登记表”。3.3检测研究对象的血清叶酸、血浆同型半胱氨酸水平，MTHFRA1298C多态性。四、研究方法：4.1研究对象:（1）来源在伊犁地区新源县居住超过5年以上的哈萨克族居民。（2）研究对象的选择根据伊犁地区新源县人民医院提供的食管癌病例资料，从中选择在2008年10月至2009年11月间，经该院确诊的哈萨克族食管癌患者88例为病例组，按1：2匹配原则选择该县无肿瘤史的176例哈萨克族健康人群为对照组。1.病例的选择①诊断标准：参照王世鑫《食管癌诊断标准与治疗方案》。6②纳入标准（1）按照上述标准纳入食管癌病例，并经过病理组织学诊断确诊为食管鳞癌者；（2）选择在伊犁地区新源县居住超过5年以上的哈萨克族居民。2.对照的选择（1）选择在伊犁地区新源县居住超过5年以上的哈萨克族健康居民；（2）排除食管癌和其它肿瘤家族史，排除近期（一个月）有感染、发热、自身免疫性疾病和活动性疾病者；（3）年龄与病例组相差±5岁者。4.2流行病学方法：采用1：2配比的病例对照研究方法。4.3资料收集：问卷调查表和24小时膳食回顾调查表到课题开展地伊犁地区新源县调查收集。采集研究对象的血样后送往北京大学生殖健康研究所，进行血清叶酸和血浆同型半胱氨酸的检测。（1）问卷调查：采用入户问卷面访调查方法。调查员在街道居委会工作人员的配合下入户,根据知情同意原则,向研究对象解释调查的意义,征得其同意后对其使用统一设计的调查问卷进行面对面调查。调查表由调查员负责填写，经研究对象核实后签字，调查结束后当场收回。（2）膳食调查：采用24小时膳食回顾调查法，由经统一培训的调查人员面对面询问研究对象连续3日的膳食种类及重量，填写“24小时膳食调查登记表”后经研究对象核实签字，调查结束后当场收回。（3）标本采集与检测方法：①采用乙二胺四乙酸钠(EDTA)抗凝管收集研究对象的清晨空腹静脉血5ml,2500r／min离心10min后取上清液分装并置于-80℃深低温冰箱保存待用。采用ELISA检测血清中叶酸水平，高效液相色谱法（HPLC）检测血浆同型半胱氨酸水平。试剂盒由美国ADL公司生产。②MTHFR1298A→C：抽研究对象的清晨空腹静脉血3ml,置乙二胺四乙酸钠(EDTA)抗凝管中,4℃3000r／min，离心15min后，取血清、白细胞层于80℃冻存备用。用DNA提取试剂盒(QIAGEN公司QIAampDNA提取试剂盒)提取白细胞DNA,多功能紫外分光光度计测量所提DNA的浓度和纯度,DNA置冰箱低温保存备用。用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测研究对象的MTHFR1298A7→C基因型。4.4数据资料整理分析（1）膳食调查结果处理：调查结果采用营养计算器软件V2.0（以《中国食物成分表2002》为基础数据库设计的，参考标准是DRIS）计算，计算出平均每人每日食物消耗量和各种营养素摄入量，并且同中国营养学会推荐的中国居民膳食营养素参考摄入量（DRIS）进行比较。（2）资料的统计分析：调查问卷经检查核对后，使用EpiData建立数据库,进行数据清理、逻辑检错排除无效问卷，录入数据使用Spss17.0软件进行统计处理，以α=0.05为检验水准：①计量资料当服从正态分布以均数±标准差（x±S）描述，两样本均数比较用两独立样本的t检验；②将计量资料分组变成计数资料进行卡方检验，计算OR值，95%置信区间（95%CI）。③运用多因素logistic回归筛选食管癌的危险因素，并计算其相对危险度。五、预期结果5.1研究对象的性别、年龄构成。表1食管癌组与对照组的性别年龄构成组别例数性别年龄（岁）男女范围x±S对照组早期食管癌组中期晚期统计量Χ2=t=P值5.2研究对象膳食结构及各营养素摄入量。表2膳食构成食管癌组对照组摄入量(g)构成比(%)摄入量(g)构成比(%)粮谷类蛋类乳类8畜禽类鱼类蔬菜水果其它合计表3每日热能及营养素摄入量（x±S）与膳食热能及营养素参考摄入量(DRIs)比较(%)供给量标准(DRIs)食管癌组相当于DRIs（%）对照组相当于DRIs（%）能量(kcal)蛋白质(g)脂肪(g)碳水化合物(g)膳食纤维(mg)胆固醇(mg)钙(mg)钾(mg)钠(mg)铁(mg)锌(mg)硒(μg)表5蛋白质来源构成分类食管癌组对照组摄入量(g)占蛋白质的百分比(%)摄入量(g)占蛋白质的百分比(%)植物性蛋白质动物性蛋白质合计表4三大产热营养素摄入量（x±S）及产热比例(%)食管癌组对照组产热营养素摄入量(g)热能(Kcal)占热能的百分比（%）摄入量(g)热能(Kcal)占热能的百分比（%）蛋白质脂肪碳水化合物9表6维生素摄入量（x±S）供给量标准(DRIs)食管癌组相当于DRIs（%）对照组相当于DRIs（%）VA(μgRE)VE(mg)VB1(mg)VB2(mg)VB6(mg)VB12(mg)Vpp(mg)Vc(mg)叶酸(μgDFE)5.3食管癌组与对照组叶酸、血浆同型半胱氨酸水平比较。表7食管癌组和对照组叶酸与血浆同型半胱氨酸水平比较组别食管癌组对照组OR(95%CI)P值（n）（n）叶酸低中高血浆同型半胱氨酸低中高5.4食管癌组与对照组MTHFRA1298C基因型的分布。表8食管癌组与对照组MTHERA1298C基因型的分布nAAACCC早期食管癌组中期晚期对照组5.5多因素logi