0208甲硝唑检验标准操作规程

8-1长春中保牧生物科技有限公司GMP管理文件题目甲硝唑检验标准操作规程编码：SOP-ZL-0208-00共8页制定审核批准制定日期年月日审核日期年月日批准日期年月日颁发部门办公室颁发数量生效日期年月日分发单位办公室、质量部一目的：制定甲硝唑检验标准操作规程,规范公司甲硝唑的检查验收标准。二参考标准：《甲硝唑质量标准》（编码SMP-ZL-0208-00）三适用范围：适用于甲硝唑的质量检查。四责任者：质量部经理、QC五内容：1名称：甲硝唑汉语拼音：Jiaxiaozuo英文名称：Metronidazole结构简式及分子量：C6H9N3O3171.16本品为2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇。按干燥品计算，含C6H9N3O3不得少于99.0%。2.性状2.1取本品适量，置白色的纸上，目测观察，应符合“本品为白色至微黄色的结晶或结晶性粉末；有微臭，味苦而略咸。”2.2溶解性：本品在乙醇中略溶，在水或三氯甲烷中微溶，在乙醚中极微溶解。2.3熔点2.3.1仪器和用具：熔点仪温度计熔点测定毛细管2.3.2操作步骤：2.3.2.1取供试品适量，置熔点测定用毛细管，轻击管壁或借助长短适宜的洁净玻璃管，垂直放在表面皿或其他适宜的硬质物体上，将毛细管自上口放入使自由落下，反复数次，使粉末紧密集结在毛细管的熔封端。装入供试品的高度为3mm。2.3.2.2装好样品的毛细管用橡皮圈固定，紧贴在铂电阻温度计旁2.3.2.3样品放好后，按下测量键，仪器即处于测量状态，开始以设定速率等速升温。8-2操作者可通过传温液杯前放置的放大镜观察样品的熔化过程。当样品熔化时可利用初熔、终熔键记录初熔点、终熔点的值，在测试状态下，每按下一次初熔（终熔）键，即记录上当前温度为初熔（终熔）点，同时对应的指示灯亮，测量完毕回到准备或复位状态时可用初熔（终熔）键读出刚记录下的初熔（终熔）点的值。2.3.2.4熔点测出后，按下准备键，液体即开始降温直至温度预置值，传温液至达预置值后延时约两分钟后，蜂鸣器报警，提示使用者目前传温液温度已达到预置温度可进行下次测量。2.3.2.5通过放大透镜观察毛细管中的样品熔化情况，记录供试品初熔至全熔时的温度，重复测定3次，取其平均值，即得供试品的实测熔点，与其实际熔点相比较，得出温度计的校正值。2.3.3结果与判定应符合“本品的熔点为159～163℃。”的规定。2.4吸收系数2.4.1试剂与试液盐酸溶液(9→1000)：取盐酸9ml，加水使成1000ml，即得。2.4.2仪器和用具紫外-可见分光光度计、容量瓶、烧杯2.4.3操作方法取本品，精密称定，加盐酸溶液（9→1000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含13µg的溶液，照紫外-可见分光光度法的检验操作规程检查，在246nm的波长处测定吸光度。2.4.4计算公式CLAEcm/%11A：溶液所测定的吸光度值C：溶液的浓度L：比色池的厚度2.4.5结果与判定：应符合“吸收系数（%11cmE）为365～389”的规定。3.鉴别3.1鉴别（1）3.1.1仪器与用具电子分析天平量筒（5ml）滴管8-33.1.2试剂与溶液氢氧化钠试液：取氢氧化钠4.0g，加水使成1000ml，即得。稀盐酸：取盐酸9.0ml加水使成1000ml，即得。3.1.3测定方法取本品约10mg,加氢氧化钠试液2ml微温，观察；即得紫红色溶液，记录；再滴加稀盐酸使成酸性，观察，记录；即变成黄色，再滴加过量氢氧化钠试液，观察，记录；则变成橙红色。3.1.4结果与判定：应符合“加氢氧化钠试液2ml微温，、即得紫红色溶液，再滴加稀盐酸使成酸性，即变成黄色，再滴加过量氢氧化钠试液，则变成橙红色。”的规定。3.2鉴别（2）3.2.1仪器与用具电子分析天平量筒（10ml）3.2.2试剂与溶液硫酸溶液（3→100）：取硫酸3.0ml，缓缓加入到水中，边加边搅，定容到100ml，混匀，即得。三硝基苯酚试液：即为三硝基苯酚的饱和水溶液。3.2.3测定方法取本品约0.1g，加硫酸溶液（3→100）4ml,应能溶解；加三硝基苯酚试液10ml，放置后，观察。3.2.4结果与判定应符合“即生成黄色沉淀。”的规定。3.3鉴别（3）3.3.1仪器与用具紫外-可见分光光度计、容量瓶、烧杯3.3.2测定方法取吸收系数项下的溶液，照紫外-可见分光光度法检验标准操作规程，在200nm~300nm范围内进行光谱扫描，扫描在277nm的波长处有最大吸收，在241nm的波长处有最小吸收。3.3.3结果与判定应符合“在277nm的波长处有最大吸收，在241nm的波长处有最小吸收。”的规定。3.4鉴别（4）按《红外分光光度法检验标准操作规程》检验。应符合“本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集112图）一致。”的规定8-44.检查4.1乙醇溶液的澄清度与颜色4.1.1澄清度检查法原理:本法系在室温条件下，将用水稀释至一定浓度的供试品溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管（内径15～16㎜，平底，具塞，以无色、透明、中性硬质玻璃制成）中，在浊度标准液制备后5分钟，在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为1000lx，从水平方向观察、比较，用以检查溶液的澄清度或其浑浊程度。除另有规定外，供试品溶解后应立即检视。4.1.2溶液颜色检查法原理:本法是控制药品有色杂质限量的方法。有色杂质的来源:一是由生产工艺中引入,二是贮存中由于药品不稳定而产生。4.1.3试剂与试液硫酸肼10%乌洛托品溶液aK2Cr2O7（AR级）bCuSO4（AR级）cNa2S2O3(AR级)dCoC12eEDTA-2Na4.1.3.1比色用重铬酸钾液【配制】取基准重铬酸钾，研细后，在120℃干燥至恒重，精密称取0.4000g置500ml量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。每1ml溶液中含0.800mg的K2Cr2O7。4.1.3.2比色用硫酸铜液【配制】取硫酸铜约32.5g，加适量的盐酸溶液（1→40）使溶解成500ml，精密量取10ml，置碘量瓶中，加水50ml、醋酸4ml与碘化钾2g，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失。每1ml硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于24.97mg的CuSO·45H2O。根据上述测定结果，在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液（1→40），使每1ml溶液中适含62.4mg的CuSO4•5H2O，即得。4.1.3.3比色用氯化钴液【配制】取氯化钴约32.5g，加适量的盐酸溶液(1→40)使溶解成500ml，精密量取2ml，置锥形瓶中，加水200ml，摇匀，和氨试液至溶液由浅红色转变至绿色后，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH6.0）10ml，加热至60℃，再加二甲酚橙指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液显黄色。每1ml乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）相当于11.90mg的CoC12·6H2O。根据上述测定结果，在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液（1-40），使每1ml溶液中适含59.5mg的CoC12·6H2O,即得。4.1.4浊度标准贮备液的制备称取于105℃干燥至恒重的硫酸肼1.00g,置100ml量瓶中,加水适量使溶解,必要时可8-5在40℃的水浴中温热溶解,并用水稀释至刻度,摇匀,放置4～6小时;取此溶液与等容量的10%乌洛托品溶液混合，摇匀，于25℃避光静置24小时，即得。本液置冷处避光保存，可在两个月内使用，用前摇匀。4.1.4.1浊度标准原液的制备取浊度标准贮备液15.0ml,置1000ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取适量,置1㎝吸收池中,用分光光度计在550nm的波长处测定,其吸收度应在0.12～0.15范围内。本液应在48小时内使用,用前摇匀。4.1.5仪器与用具量瓶（100ml）（1000ml）水浴锅紫外分析仪4.1.6测定方法取本品，加乙醇溶液并稀释制成每1ml中约含5mg的溶液，照溶液的澄清度检查法测定。溶液如显色；照溶液颜色检查法检查。4.1.7结果与判定应符合“溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录ⅨB）比较，不得更浓；”应符合“如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液（附录ⅨA第一法）比较，不得更深。”的规定。4.2有关物质4.2.1仪器与用具高效液相色谱仪电子分析天平容量瓶（100ml、50ml）刻度吸管（2ml、5ml、）4.2.2试剂与溶液甲醇4.2.3对照品溶液的制备取2-甲基-5-硝基咪唑对照品约20mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。4.2.4供试品溶液的制备取本品约100mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，精密量5.0ml置25ml容量瓶中，用流动相定量稀释至刻度，即制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；4.2.5测定方法4.2.5.1色谱条件与系统适用性8-6用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20:80）为流动相；检测波长为315nm。理论板数按甲硝唑峰计算不低于2000，甲硝唑峰与2-甲基-5-硝基咪唑峰的分离度应大于2.0。4.2.5.2操作方法分别精密量取供试品溶液2ml与对照品溶液1ml,置同一100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20µl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使甲硝唑色谱峰的峰高约为满量程的10%；再精密量取供试品溶液和对照溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。4.2.6结果与判定应符合“供试品溶液的色谱图中如有与2-甲基-5-硝基咪唑保留时间一致的色谱峰，其锋面积不得大于对照溶液中甲硝唑峰面积的0.5倍（0.1%）；各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中甲硝唑峰面积（0.2%）。”的规定。4.3干燥失重4.3.1仪器与设备：称量瓶、干燥箱、电子天平（感量0.1mg）。4.3.2操作方法：4.3.2.1取称量瓶3个置105℃干燥至恒重。4.3.2.2取供试品1g，精密称定，混合均匀（如为较大的结晶，应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒），置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，在105℃干燥至恒重，计算。（做2份）4.3.3计算公式：100%样品重量样品干燥后重量样品干燥前重量干燥失重%4.3.4结果与判定：应符合“减失重量不得过0.5%。”的规定。4.4炽灼残渣4.4.1原理：炽灼残渣系指有机药物经高温炭化或无机物加热分解或挥发后遗留下的不挥发物。经加硫酸并炽灼后所得的无机物残渣（多为金属的氧化物或硫酸盐）。4.4.2试剂和溶液硫酸分析纯、变色硅胶4.4.3仪器和设备8-7瓷坩锅（30ml）、干燥器（内盛有变色硅胶）、电子分析天平、高温炉、电炉（1000W）、坩锅钳4.4.4测定方法取本品1.0g，照炽灼残渣检查法的检验操作规程（编码：SOP-ZL-0117-02）检验。炽灼残渣（%）=1213×100%式中W1：空坩埚恒重，g；W2：炽灼前坩埚和残渣质量，g。W3：炽灼后坩埚和残渣质量，g4.4.5结果与判定：应符合“遗留残渣不得过0.1％”的规定。4.5重金属4.5.1重金属系指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。以铅为代表。重金属检查法是利用重金属在一定实验条件下,与硫代乙酰胺或硫化钠作用生成黄褐色胶态溶液或浑浊的原理,通过与一定量标准铅溶液在同样操作条件下制成的对照液比较,以判断重金属杂质的限量。反应式：Pb2++S2-→PbS↓4.5.2试剂和溶液硝酸、硫酸、盐酸均为分析纯试剂；氨试液：取浓氨溶液400ml,加水使成1000ml,即得；酚酞指示液：取酚酞1g,加乙醇100ml使溶解,即得；醋酸盐缓冲液（pH3.5）：取醋酸铵25g,加水25ml溶解后,加7mol/L盐酸溶液38ml,用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5照电位滴定法与永停滴定法的标准操作规程（编码：SOP-ZL-0126-02）,