XXXX版中国药品检验标准操作规范3(可复制)

4指示液_4.1中性红指示液取中性红l.Og,研细，加95%乙醇60ml使溶解，再加水至100ml。变色范围PH6.8〜8.0(红—黄）。•4.2甲基红指示液取甲基红0.lg,95%乙醇300ml,蒸馏水适量，溶解后，加水至500ml。4.3亚甲篮指示液取亚甲篮0.5g,加水溶解成100ml。4.4酚磺酞指示液取酚磺酞l.Og，加lmol/L氢氧仏钠溶液2.82ml溶解，再加水至100ml。变色范围pH6.8〜8.4(黄—红）。4.5溴甲酚紫指示液取溴甲酚紫1.6g，加95%乙醇溶解成100ml。变色范围口115.2~6.8(黄—紫）。4.6溴麝香草酚篮指示液取溴磨香草酚篮0.4g，加1mol/L氢氧化钠溶液0.64ml溶解，再加水至100ml。变色范围pH6.8〜8.4(黄—篮）。4.7酸性品红指示液取酸性品红0.5g,加水100ml溶解，再逐渐加1mol/L氢氧化钠溶液16ml,每加1滴需将溶液充分摇匀后再加第二滴，直至溶液呈草黄色；于沸水内保持15rnin，静置2h后，滤过，即得。优点：无色，在倒管内早期发酵易观察，不易被还原。变色范围卩116.0~7.4(红4黄）。4.8厌氧指示液.#①液取葡萄糖0.6g，加蒸馏水10ml。②液取氢氧化钠溶液(0.1mol/L)6ml,加蒸馏水至100ml。③液取亚甲蓝指示液(4.3)3ml,加蒸馏水至100ml。临用时取①、②、③液各2ml混合，装试管内煮沸，当蓝色退为无色时，立即置于厌氧培养基容器内。4.9曙红钠指示液取曙红钠2.0g,加水溶解成100ml。5培养基及其制备方法培养基应通过质量鉴定，适合规定菌的生长，并具有典型菌落形态特征或典型生化反应特性。可按下列处方配制，亦可用符合规定的脱水培养基。配制培养基时，除另有规定外,培养基制备的高压蒸气灭菌温度为121°C15rnin。5.1营养肉汤培养基胨10g肉浸液1000ml氯化钠5g取胨和氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2士0.2,灭菌。5.2营养琼脂培养基照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加人15〜20g琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2士0.2，灭菌。5.3半固体营养琼脂培养基照上述营养琼脂培养基的处方及制法，其中琼脂加人量为0.3%〜0.5%。5.4玫瑰红钠琼脂培养基胨5g玫瑰红钠（四氯四碘荧光素钠）0.0133g葡萄糖10g(或0.133%玫瑰红钠溶液）10ml•401•磷酸二氢钾（KH2P04)lg琼脂15〜20g硫酸镁（MgS04•7H20)0.5g水1000ml除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加人葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。5.5酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基胨10g琼脂15〜20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖10g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加人葡萄糖，分装，灭菌。5.6胆盐乳糖培养基(BL)磷酸二氢钾（KH2P04)1.3g牛胆盐（或去氧胆酸钠0.25g)1.3g水1000ml胨乳糖氯化钠磷酸氢二钾(K2HPOJ20g5g5glg除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热溶解后，调节pH使灭菌后为7.2±0.2,煮沸，滤清，加人乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。5.74-甲基伞形酮葡萄糖苷酸蛋白胨培养基胨10g磷酸二氢钾（无水kh2po4)0.9g硫酸氨5g磷酸氢二钠(无水Na2HP04)6.2g硫酸锰0.5mg亚硫酸钠40mg硫酸锌0.5mg去氧胆酸钠lg硫酸镁0.lg4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸lg氯化钠lOg水1000ml氯化钙50mg除4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸外，上述各成分溶解于1000ml水中，调节pH使灭菌后为7.3±0.1，加人4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸,溶解后，每管分装5ml,115°C灭菌20min。5.8曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基10ml曙红钠指示液2ml20%乳糖溶液5ml亚甲蓝指示液1.3〜1.6ml取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60°C，按无菌操作加人灭菌的其他三种溶液，摇匀，倾注平皿。5.9麦康凯琼脂培养基(MacC)胨20g乳糖10g牛胆盐5g水1000ml除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分混合，加热溶解，调节pH使灭菌后为7.2士0.2，加人琼脂,加热溶化后，再加人其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至60°C,倾注平皿。5.10三糖铁琼脂培养基（TSI)胨20g硫酸亚铁0.2g•402•1%中性红指示液琼脂氯化钠2.5ml15〜20g5g牛肉浸出粉乳糖蔗糖葡萄糖水5g10g10glg1000ml硫代硫酸钠0.2%酚磺酞指示液琼脂氣化钠0.2g12.5ml15〜20g5g除三糖、指示液和琼脂外，取上述成分混合，加热溶解，调节pH使灭菌后为7.3士0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加人其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层(2~3Cm)短斜面。5.11四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)胨5g硫代硫酸钠30g牛胆盐lg碳酸钙10g水1000ml加人上述成分,混合,微温溶解，灭菌。临用前，取上述培养基混勻分装，每10ml加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g,溶于20ml水中）0.2ml和亮绿试液0.1ml，混勻。5.12沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)胨5g硫代硫酸钠8.5g牛肉浸出粉5g中性红指示液2.5ml乳糖10g亮绿试液0.33ml牛胆盐8.5g琼脂15〜20g枸橼酸钠8.5g枸橼酸铁铵lg水1000ml除乳糖、指示液和琼脂外，取上述成分混合，加热溶解，调节pH使灭菌后为7.2士0.1,滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加人其余各成分，摇匀，冷至60°C,倾注平皿。5.13胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)枸橼酸钠lg枸橼酸铁铵lg中性红指示液3ml琼脂15〜20g硫代硫酸钠2.3g胨牛肉浸出粉乳糖蔗糖去氧胆酸钠水20g3g10g10glg1000ml除糖、指示液和琼脂外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.2士0.1，加人琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇勻，冷至60°C，倾注平皿。5.14溴代十六烷基三甲胺琼脂培养基胨20g溴代十六烷基三甲胺lg牛肉浸出粉3g琼脂15〜20g氯化钠5g水1000ml除琼脂外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.5±0.1，加人琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60°C，倾注平皿。5.15亚碲酸盐肉汤培养基临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml加人新配制的1%亚碲酸钠（钾）试液0.2ml，•403•混匀，即得。10%氯化钠卵黄液琼脂水23g650ml除10%氣化钠卵黄液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.6±0.1，灭菌，待冷至60°C，以无菌操作加人10%氯化钠卵黄液，充分混匀，勿振摇，倾注平皿。10%氣化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋一个，以无菌操作取出卵黄，放人10%氯化钠溶液100ml中，充分混勻。5.17甘露醇氯化钠琼脂培养基肺10g酚磺酞指示液2.5ml牛肉浸出粉lg琼脂15〜20g甘露醇10g氯化钠75g水1000ml除甘露醇、指示液和琼脂外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.4±0.2，加入琼脂，加热溶化后,滤过，分装，灭菌，冷至60°C,倾注平皿。5.18蛋白胨水培养基胰蛋白胨10g氯化钠5g水1000ml取上述成分混合，加热溶化，调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。5.19磷酸盐葡萄糖胨水培养基胨10g磷酸氢二钾(K2HP04)3.8g葡萄糖5g水1000ml取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。5.20枸橡酸盐培养基氯化钠5g枸橼酸钠(无水）2g硫酸镁（MgS04•7H20)0.2g溴麝香草酚蓝指示液20ml磷酸氢二钾(K2HP04)3.8g琼脂15〜20g硫酸二氢铵(NH4H2P04)lg水1000ml除指示液和琼脂外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为6.9士0.1,加人琼脂，加热溶化，加人指示液，混匀。分装于小试管，灭菌，制成斜面。注:所用琼脂应不含游离糖，用前用水浸泡冲洗。5.21.1乳糖发酵培养基胨20.Og0.04%溴甲酚紫指示液25ml乳糖10.0g水1000ml除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分微温溶解，调节pH使灭菌后为7.2士0.2,加入指示液，混匀。分装于含小倒管的小试管中，灭菌。5.21.2乳糖胆盐发酵培养基胨20.0g0.04%溴甲酚紫指示液25ml乳糖10.0g牛胆盐5.0g水1000ml除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分微温溶解,调节pH使灭菌后为7.2土0.2，加人指示液，混勻。分装于含小倒管的小试管中，灭菌。5.225%乳糖培养基胨0.2g溴麝香草酚蓝指示液6ml氯化钠0.2g乳糖5g憐酸氢二钠0.2g水100ml除乳糖和指示液外,混合各成分，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.4，加人乳糖/指示液，混匀，分装于含小倒管的灭菌小试管中，115°C灭菌15min。5.23脲(尿素）琼脂培养基胨lg酚磺酞指示液6ml葡萄糖0.2g20%无菌脲溶液5g氯化钠5g琼脂15〜20g磷酸二氢钾（KH2P04)2g水900ml除脲和琼脂外，取上述成分混合，调节pH使灭菌后为7.2土0.1，加人琼脂，加热溶化并分装于锥形瓶，灭菌。冷至50〜55°C，加人灭菌脲溶液，混匀，分装于灭菌试管中，制成斜面。5.24氰化钾培养基胨lg磷酸氢二钠（Na2HP04)5.64g氯化钠5g氰化钾试液15ml磷酸二氢钾（KH2P04)0.225g水1000ml除氰化钾试液外，取上述成分混合，调节pH使灭菌后为7.5土0.1，灭菌，冷却后，加人氰化钾试液，分装于12mmX100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡胶塞塞紧，置4°C保存。同时，不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基，分装于灭菌试管中。5.25赖氨酸脱羧酶试验培养基胨lg1.6%甲酚紫指示液lml酵母浸出粉lgL-赖氨酸(dl-赖氨酸）0.5(l)g葡萄糖lg水1000ml除赖氨酸外，取上述成分混合，加热溶解后，加入L-赖氨酸（DL-赖氨酸），调节pH使灭菌后为6.8，同时以不加赖氨酸培养基作为对照，分装于灭菌的小试管内，每管2.5ml，并滴加一层液体石蜡，121°C灭菌lOmin。5.26绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂）胨20g甘油10ml氯化镁(无水）L4g琼脂15〜20g硫酸钾(无水）10g水1000ml取胨、氯化镁和硫酸钾加人水中，微温溶解，调节PH使灭菌后为7.3±0.1，加人甘油和琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，制成斜面。5.27明胶培养基胨5g明胶120g牛肉浸出粉3g硝酸钾2g水1000ml•405•取上述成分加人水中，浸泡约20min，随时搅拌，加热溶解，调节pH使灭菌后为7.3士0.1，分装于小试管，每支4〜5mi，灭菌。放冷后置冰箱保存。5.28硝酸盐胨水培养基胨10g亚硝酸钠0.5g酵母浸出粉3g硝酸钾2g水1000ml取胨和酵母浸出粉加人水中，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.3士0.1,加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解，混勻。分装于含杜氏管的小试管，灭菌。5.29梭菌增菌培养基牛肉浸出粉10.Og盐酸半胱氨酸0.5g胨10_0g氯化钠5.0g酵母浸出粉3.0g醋酸钠3.0g可溶淀粉l.Og琼脂0.5g葡萄糖5.0g纯化水1000ml取上述成分,混合，加热煮沸使溶解，调节pH使灭菌后为6.8士0.2，加热溶化，滤过，分装，灭菌。5.30哥伦比亚琼脂培养基酪蛋白胰酶消化物10.0g肉胃酶消化物5.0g心胰酶消化物3.0g氯化钠5.0g玉米淀粉l.Og琼脂15.Og酵母浸出粉5.0g水1000ml除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后为7.3士0.2，加人琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45〜50°C，加人相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混勻，倾注平皿。5.31血琼脂培养基营养琼脂100ml无菌脱纤维兔血(或羊血）5〜10ml制法将营养琼