生化分析仪的原理及常用检测方法

生化分析仪的原理及常用检测方法韦志鹃2019-1-11分类连续流动式•按结构原理分分立式——常用离心式干片式——急诊常用小型•按测定速度分中型大型超大型（模块式）•按自动化程度分半自动全自动基本原理•临床生化分析仪最常使用的是——分光光度法•分光光度法——是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。光吸收曲线Lamber-Beer定律：分光光度法基本定律描述物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物质的浓度及其液层厚度的关系Lamber定律：A∝lBeer定律：A∝C入射光强度I0透射光强度I物体截面为S厚度为lLambert-Beer（朗伯-比尔）定律•当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比•A=kcb•A---吸光度k---吸光系数c---溶液浓度b---液层厚度吸光系数•定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。•K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律•郎伯-比尔定律表明：当液层厚度固定时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。即：A/C=const•故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与已知浓度的标准溶液吸光度进行比较，就可以算出该溶液的浓度。生化测定方法终点法：一点终点法二点终点法速率法：一点终点法•一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。•通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。•一点终点法通常是单试剂项目采用的方法一点终点法反应曲线二点终点法•第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度Am，经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。•第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。•两点终点法，它是双试剂项目常选用方法两点终点两点终点法•计算公式：C=(An-K0*Am)*KK0---体积校正因子K0=(Sv+R1)/(Sv+R1+R2)免疫比浊法通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的方法：散射比浊：特定蛋白分析仪透射比浊：自动生化分析仪通常作两点终点法分析，多采用多点校准。应用：用Ab测定Ag（主要为微量蛋白：IG、C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求Ab过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加而递增，光散/透射射强度与抗原量成正比。固定时间法•指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，利用这两点吸光度差值计算结果。如：苦味酸法测肌酐固定时间法连续监测法•根据反应速度与待测物的浓度成正比，通过测定一段时间内吸光度的变化速率（△A/min）来计算待测物的浓度。•酶活性测定常用酶促反应曲线连续监测法零级反应期---酶促反应速度达到并保持恒定速率进行反应，单位时间内的变化速率恒定不变。在零级反应期单位时间内的吸光度变化(反应速率△A/min)与酶活力呈正比。连续监测法•测定时间的选择：监测时间应根据所用仪器不影响检测速度和结果的准确性选在时间反应进程曲线的线性期。通常：延迟时间：30-60秒监测时间：120秒1.连续监测法•即零级反应速率法,亦称斜率法在较长反应时间区段内(90-180秒)，每隔一定时间(5~30秒)读取一次吸光度值，至少读取4点，得到3个以上△A，最后算出反应速率△A/min。uTuuuVVltALU610/1.连续监测法特点•与固定时间法相比，属于即时观测，无需停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂，且可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直线的线性期，检查到是否偏离零级反应。