含绿原酸的清热解毒类中药注射剂不良反应及其机理探讨

中国现代应用药学杂志2009年7月第26卷第7期ChinJMAP,2009,JulyVol.26No.7·555·6讨论6.1流动相的确定本试验曾经选用多种流动相梯度洗脱。首先选用了甲醇-水不同比例的梯度洗脱，但是各组分分离效果均不理想而且基线飘移过大；后改用乙腈-水作为流动相，不同比例进行梯度洗脱，发现总体效果改善，但是还有个别组分分离度不够好，后在水中加入0.1%的磷酸分离度有了进一步改善，昀后确定流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱。6.2检测波长的选择本试验采用PDA检测器，在200~400nm下采集其三维图谱，通过查看三维色谱图在所有波长下的峰数的多少、各组分分离的情况、各色谱峰的丰度，昀后选定检测波长为210nm。6.3提取溶剂的考察本试验曾采用甲醇、5%氨水甲醇、无水乙醇，95%乙醇作为提取溶剂，结果发现无水乙醇、95%乙醇作为提取溶剂所得的供试品溶液峰数相对较少；5%氨水甲醇作为溶剂的样品溶液所得的供试品溶液虽然使柴胡皂苷a、d的提取效率增高，但是在一定程度上抑制了其他组分的提取效率；而甲醇作为提取溶剂特征性明显、各组分分离的情况良好、各色谱峰的丰度适中，而且操作简单，因此决定采用甲醇作为提取溶剂。6.4提取方法的考察本试验曾采用甲醇作为提取溶剂用超声波振荡提取法和水浴加热回流提取法，发现两种提取方法所得图谱无明显差别。但是超声得到的图谱基线相对平稳一些，加之超声提取法操作简便，因此采用超声波振荡提取法。6.5柴胡指纹图谱的专属性从不同施肥柴胡药材的PDA叠加对比图以及国家药典委员会指纹图谱评价软件整体观察发现：不同施肥柴胡指纹图谱的整体面貌具有一致性，各样品共有峰的相对保留时间严格一致，其相对保留时间的RSD值均小于3%，说明不同施肥柴胡药材的化学组成一致性较好，不同施肥方法不会使柴胡化学成分发生变化。但从各样品共有峰的相对峰面积看却有较大差别，表明不同施肥方法对其化学成分的含量有较大影响，即对质量影响大。因此可用指纹图谱的方法，结合不同施肥柴胡药效成分含量的高低，来优选昀佳施肥方法以控制柴胡质量。REFERENCES[1]YUJD,YANGQ,WANGGL,etal.DeterminationofsaikosaponinsinsaikomedicinalmaterialsbyHPLCandthestudyonfingerprintofsapon-ins[J].ChinJInfTraditChinMed(中国中医药信息杂志),2004，11(2):137-138.[2]XIAOR,WANGCY,ZHANGZF，etal.StudiesonfingerprintsofBupleurumchinensefromHebeiprovincewithHPLC-UV[J].JChinMedMater(中药材),2006,29(2):119-123.收稿日期：2008-06-16含绿原酸的清热解毒类中药注射剂不良反应及其机理探讨李钦，张信岳，陈国神*(浙江省医学科学院，杭州310013)摘要：目的对3种含绿原酸的清热解毒类中药注射剂不良反应进行探讨。方法收集国内外公开发表的有关报道，对其不良反应进行归纳、分析、总结。结果3种中药注射剂均含有绿原酸成分，但是绿原酸是否为致敏原，以及所引起的不良反应是过敏反应还是类过敏反应，学术界尚存在不同的看法。结论正确评价绿原酸在中药注射剂不良反应中的地位并予以合理使用，以及进一步区分过敏反应和类过敏反应是目前亟待解决的问题。关键词：绿原酸；双黄连注射剂；清开灵注射剂；鱼腥草注射液；不良反应中图分类号：R994.11文献标志码：B文章编号：1007-7693(2009)07-0555-04AdverseEffectandMechanismofChlorogenicAcidinClearingHeatandDetoxicationTraditionalChineseMedicineInjections作者简介：李钦，女，硕士生，研究实习员Tel:[phone]E-mail:[e-mail]*通信作者：陈国神，男，研究员Tel:[phone]E-mail:[e-mail]·556·ChinJMAP,2009July,Vol.26No.7中国现代应用药学杂志2009年7月第26卷第7期LIQin,ZHANGXinyue,CHENGuoshen(ZhejiangAcademyofMedicalSciences，Hangzhou310013,China)ABSTRACT:OBJECTIVETodiscusstheadverseeffectandmechanismofchlorogenicacidinthreeclearingheatanddetoxicationtraditionalChinesemedicineinjections.METHODSAdverseeffectandmechanismofchlorogenicacidwerereviewedbycollectingandsummarizingtherelatedreportsinChinaandabroad.RESULTSAllthethreekindsofChinesemedicineinjectionscontainchlorogenicacid,buttherearedifferentpointsofviewonwhetherchlorogenicacidistheoriginalsensitizerandwhetheritcausesallergicreactionoranaphylactoidreactiona.CONCLUSIONItisimportanttoevaluateadverseeffectofchlorogenicacidintraditionalChinesemedicineinjectionsanddistinguishtheallergicreactionandanaphylactoidreaction.KEYWORDS:Chlorogenicacid；Shuanghuanglianinjection；Qingkailinginjection；Houttuyfonateinjection；adverseeffect中药注射剂是指以中医理论为指导，采用现代科学技术和方法，从中药或天然药物的单方或复方中提取的有效物质制成的，供注入体内的溶液、乳状液及供临用前配制溶液的粉末或浓溶液的灭菌制剂。随着临床中药注射剂应用的不断增多，中药注射剂品种的增加，随之而来的是相关不良反应(ADR)报告逐年增加。据统计，从1960—1993年780篇3009例中药不良反应报道中，因中药注射剂引起的仅占6.3%；1990—1999年460篇1291例中药不良反应报道中，因注射剂而引起的猛增到55.62%；2003—2005年80篇120例中药不良反应报道中，中药注射剂引起的不良反应更增至66.7%[1]。以上数据充分说明中药注射剂存在严重的隐患。另据叶正良等统计报道，在1030例ADR中列入前三名的药物分别为双黄连注射液342例，占33.2%，清开灵注射液139例，占13.5%，鱼腥草注射液85例，占8.3%[2]，这3种注射液均属于清热解毒类中药注射剂。由于中药注射剂上市前缺乏足够的安全性评价与临床验证，很难预测大量应用于临床后的安全性，因此有必要对现有不良反应报道进行综合分析并探讨其共性机制。本文试图通过对上述3种清热解毒类中药注射剂的现有临床不良反应进行综合分析，寻找出一些共性的问题，并对其不良反应机制作一探讨。13种清热解毒类中药注射剂不良反应分析1.1双黄连注射剂双黄连注射剂是由金银花、黄芩、连翘提取物制成的中药制剂，主要成分为绿原酸、连翘盼、连翘苷、黄酮苷、黄芩苷等。临床所见不良反应类型包括皮疹、腹泻、腹痛、呕吐以及皮肤瘙痒、头晕、胸闷等，偶尔发生过敏性休克。2001年11月，国家药品不良反应检测中心发布了第一批药品不良反应通报品种，其中包括双黄连注射剂。双黄连引起的不良反应特点是：从开始注射到发生不良反应的时间，昀短仅几秒钟，昀长的在首次使用后的2周以后发生。首次使用的85％发生者似无致敏过程[3]。1.2清开灵注射剂清开灵注射剂是第一期《药品不良反应信息通报》中的一种[4]，源自古方“安宫牛黄丸”，主要成分为牛黄，水牛角，珍珠粉，黄芩，橘核，金银花，板蓝根等。临床所见的主要不良反应为过敏反应(占35.66%)，主要表现为皮疹、丘疹、风团瘙痒、荨麻疹样药疹、药物热伴畏寒、过敏性休克并致死亡；其次为消化系统反应(占32.87%)[5]，有人认为在使用清开灵注射剂时，有无过敏史不是不良反应会否发生的判断标准，但有过敏史者所发生的不良反应较严重[6]。1.3鱼腥草注射液鱼腥草注射液曾是国内广泛使用的一种中药制剂，其过敏反应报道逐年增加，严重者可致过敏性休克。主要不良反应：①过敏反应：主要表现为胸闷、憋气、气喘；紫癜、关节疼痛、皮肤瘙痒、大片红斑等；②消化系统反应：主要表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻；③呼吸系统反应：主要表现为咳嗽、气促、呼吸困难或急性肺水肿、喉水肿；④心血管系统反应：胸闷、心悸、血压异常等；⑤皮肤损害：主要表现为过敏性红斑、紫癜、斑丘疹等皮疹、皮炎；⑥其他反应：脉管炎[7]。2绿原酸的致敏性及其机理通过上述3种清热解毒类中药注射剂的不良反应分析发现，首先与这些制剂较高的临床应用率是相关的；其次，它们都含有绿原酸(Chlorogenicacid，CA)可疑致敏成分。这些注射液引起的不良反应是否与CA有关，现作以下分析。2.1绿原酸概况CA是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类次生代谢化合物，在植物界广泛分布，有抗菌和抗病毒等活性。尤其在金银花、中国现代应用药学杂志2009年7月第26卷第7期ChinJMAP,2009,JulyVol.26No.7·557·忍冬藤、茵陈、鱼腥草、栀子等清热解毒类中药中含量较高，通常将其作为有效成分的定性或定量指标。CA是植物次生代谢产物，在植物中广泛分布，从蕨类植物到高等双子叶植物均有报道[8]。CA极性较大，有一定的水溶性，因而在非清热解毒、抗菌抗病毒类注射剂中，制剂工艺中不将CA去除。如刺五加注射剂以黄酮类成分为主，但原药材中含CA，成品中也有可能含有CA[9]。2.2绿原酸致敏性研究概况2.2.1关于绿原酸是否是致敏原的争论长期以来，学术界关于绿原酸是否会引起不良反应存在截然相反的两种观点。Freedman等对已知的咖啡中的酚类化合物进行了系统的评价，认为绿咖啡豆的水提取液高度致敏，可疑化合物注入已知对绿咖啡过敏的10个工人的皮肤中，只有绿原酸产生了阳性反应。交叉中和试验则表明，绿咖啡的抗体可被CA中和，试验者认为该结果提示CA可能是绿咖啡中的主要过敏原[10]。因CA广泛存在于多种植物中，Freedman等对其他含CA的植物蓖麻子和橙子进行了研究发现，蓖麻子有致敏性，如呼吸道症状、荨麻疹等。有报道称对于咖啡粉尘过敏的患者对蓖麻油也产生皮内阳性反应，对蓖麻油和绿咖啡过敏的大部分患者，对橙子也产生阳性的皮内反应。通过纸层析和红外色谱分析方法进行研究，认为CA也是蓖麻油和橙子中的组分，CA可与蓖麻油和橙子水提取得到完全的交叉中和反应[11]。对于口服CA常不引起过敏而静注或吸入引起过敏的现象，经过研究表明，志愿者或家兔口服给予含CA的浓黑咖啡，血中未检出CA，但家兔静注给药血中则可检出CA。由此推测CA哺乳动物胃肠道给药不能直接到达循环血，可能在肠中破坏或转化[12]。对CA的过敏性进一步研究，家兔以CA-弗氏佐剂联合物致敏表现出明显的抗体形成，而仅以CA(不与弗氏佐剂结合)不产生抗体，对致敏的家兔进行皮内试验，可见Arthus型反应。ASA试验则表明致敏家兔心内注射绿原酸攻击产生不平静、极度呼吸困难直到死亡，PCA试验(心内注射药物进行攻击)则表明当抗血清稀释度为1∶1