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仅供医疗专业人士参考T790M血液检测:机遇与挑战EGFR突变型肺癌生物学和靶向治疗认知时间表TanCS,etal.LancetOncol.2015Sep;16(9):e447-59.基因检测改变了我们的临床实践EGFR突变和ALK检测不被常规推荐,除非不吸烟和小标本观念改变:检测已经成为必须腺癌、大细胞癌和组织学类型不明确型NSCLC:应进行EGFR突变、ALK、ROS1、广泛分子分析(BRAFV600E、MET扩增和外显子14点突变、RET重排、HER2突变)、PD-L1检测麟癌应该进行EGFR突变和ALK检测尤其在非吸烟人群或小标本或混合病理类型的标本中,其它检测包括广泛分子分析(BRAFV600E、MET扩增和外显子14点突变、RET重排、HER2突变)和PD-L1检测分子检测技术也随之不断发展金标准手术标本补充补充细胞学标本血液标本一、从组织检测发展到血液检测二、从定性检测到未来定量检测三、从单基因检测到多基因检测平台已知位点定性检测已知位点定量检测T790M突变检测的标本类型PirkerR,etal.JThoracOncol.2010;5(10):1706-1713.SavicS,etal.BrJCancer.2008;98(1):154-60.中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变中国专家共识.中华医学杂志.2015;95(45):3721-3725.组织活检(肿瘤蜡片)细胞学标本(恶性胸水)血液标本(ctDNA)检测结果可靠样本品质和肿瘤细胞含量与组织样本接近组织和胸水都取不到的患者,推荐使用血液样本侵入性,部分病人无法取样不是每个病人都有胸水无创,易采样标本获得分子检测金标准检测结果可靠,无法获得组织时可作补充DNA片段化/假阴性较多,需高敏感度技术质量控制可以使用ARMS方法进行检测可以使用ARMS方法进行检测可以使用dPCR或NGS等高灵敏度方法技术平台T790M突变检测的标本类型—血液检测组织活检(肿瘤蜡片)细胞学标本(恶性胸水)血液标本(ctDNA)检测结果可靠样本品质和肿瘤细胞含量与组织样本接近组织和胸水都取不到的患者,推荐使用血液样本侵入性,部分病人无法取样不是每个病人都有胸水无创,易采样标本获得分子检测金标准检测结果可靠,无法获得组织时可作补充DNA片段化/假阴性较多,需高敏感度技术质量控制可以使用ARMS方法进行检测可以使用ARMS方法进行检测可以使用dPCR或NGS等高灵敏度方法技术平台PirkerR,etal.JThoracOncol.2010;5(10):1706-1713.SavicS,etal.BrJCancer.2008;98(1):154-60.中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变中国专家共识.中华医学杂志.2015;95(45):3721-3725.“液体活检”入围2015年度MIT“十大突破技术”概要•T790M血液检测:机遇•Biomarker类型•临床应用•T790M血液检测:挑战•T790M血液检测:优化血液检测Biomarker-ctDNA&CTC&Exosome•循环肿瘤细胞(CTC):存在于外周血中各类肿瘤细胞统称,因自发或诊疗操作从实体瘤病灶脱落,进入外周血循环系统•循环肿瘤DNA(ctDNA):由肿瘤细胞释放到外周血中的DNA片段,来源于所有荷瘤部位,具有含量低,半衰期短,均质性等特点•外泌体(Exosomes):由细胞分泌或者脱落的囊状小泡,直径约30-100nm,携带肿瘤细胞DNA,RNA和蛋白质等信息WangJYetal.,FrontMed,2017,2095-0225JiaSYetal.,Oncotarget,2017,8,33循环肿瘤DNA(ctDNA)的来源与功能•ctDNA来源:1.凋亡/坏死肿瘤细胞;2.正常生长肿瘤细胞;3.循环肿瘤细胞•ctDNA功能:基于Oncogenictransformation方式在肿瘤转移方面发挥重要作用•ctDNA分布:广泛存在于血浆,脑脊液,唾液,尿液等,均已得到相关研究证实ChengFFetal.,Oncotarget,2016,7,30DiMeoetal.,MolecularCancer,2017,16,80循环肿瘤DNA(ctDNA)的特性总量少–500DNA拷贝数/200uL血浆ctDNA丰度低-0.01%-1%比例较多片段小–集中在170bp左右FractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,T790MNewmanetal.,NatMed(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011)FrankDetal.,NatMed(2008)半衰期短–约为114min,2小时Half-Life来源于血液ctDNA的信息分类:定量分析和序列分析JonothanC.M.WanetalNatureReviewCancer(2017)血液ctDNA检测可用于肿瘤早期诊断PhallenJetal.,SciTranslMed,2017,9本研究新建立一种超敏感,低出错的血液ctDNA检测方法-TEC-Seq入组对象:健康人群(44例),乳腺癌(45例),结直肠癌(42例),肺癌(65例),卵巢癌(42例)覆盖范围:58种常见驱动基因7ng29ng21ng66ng与传统NGS比较,TEC-Seq测序出错率降低至3×10-7false-positivemutationcalls/base(P0.0001)BCCCP0.0001血液ctDNA检测可用于临床疗效评估Xue.Y,Jie.W,etal,Oncotarget,2016,7,15.ddPCR定量监测血浆中ctDNA显示,EGFR突变高丰度预示应用TKI疗效好会有较长PFS精准定量检测,能够预测疗效!血液中的突变状态与疗效的关系.原始血液突变定量分析与疗效关系(vs.),P=0.167(vs.),P=0.020(vs.),P=0.454EGFR中位OS(月)血浆WT23.8月(19.9-27.4)(n=19)血浆MT35.6月(26.9-44.1)(N=54)EGFR中位PFS(月)血浆WT6.7月(5.0-8.4)(n=19)血浆MT12.5月(11.0-14.3)(N=54)1.00.80.60.40.20.001230241861.00.80.60.40.20.0024726036121.00.80.60.40.20.001230241861.00.80.60.40.20.0048247260361248P<0.001P=0.0280%(n=19)0-5.15%(n=27)>5.15%(n=27)0%(n=19)0-5.15%(n=27)>5.15%(n=27)PFSPFSOSOS(vs.),P0.001(vs.),P0.001(vs.),P=0.021月月月月血液ctDNA检测可用于治疗动态监测T790M和L858R在泰瑞沙治疗后1个月内已无法检测到;影像学证实泰瑞沙耐药时,T790M和原发L858R重新出现EGFRT790M在影像学证实泰瑞沙耐药时检测不到,但原发19del的水平升高;进展期活检发现MET扩增ChiaPLetal.,LungCancer.2016,98:29-32.概要•T790M血液检测:机遇•Biomarker类型•临床应用•T790M血液检测:挑战•T790M血液检测:优化挑战1:血液标本相对脆弱,非常容易受到外界干扰,造成假阴性123451-3号标本可用,4-5号严重溶血不可用采血管选用不当,或温度过高或过低、或运输过程剧烈摇晃,造成溶血或轻微溶血。重度的图示为脂血+溶血现象患者身体原因,造成脂血,影响cfDNA提取效率挑战2:不同试剂盒对cfDNA提取效率及cfDNA片段捕获能力不同,影响检出率SoberLetal.,JMolDiag,2016NormannoNetal.,Oncotarget,2017,8,76种不同试剂盒对于cfDNA提取效率影响6种不同试剂盒对于KRAS检出率的影响6种不同试剂盒对于cfDNA片段捕获能力比较挑战3:AURA回顾性研究显示血检敏感性和特异性仅70%提示TKI耐药患者仅做血检不足以判断T790M突变状态Plasma(BEAming)Tumor(ARMS)Exon19del+Exon19del-Exon19del+112(82.3%)2Exon19del-2478(97.5%)L858R+L858R-L858R+63(86.3%)5L858R-10138(96.5%)T790M+T790M-T790M+111(70.3%)18T790M-4740(69.0%)OxnardGR,etal.JClinOncol.2016Oct1;34(28):3375-82.较Cobas组织T790M检测,Cobas血液T790M检测存在一定比例假阴性ChengYing,etal.2017CSCO局部晚期或转移性NSCLCEGFR突变阳性EGFRTKI治疗后进展PS:0-2EGFRT790M+veAZD929180mgqd(≥2线)PDN=2000-3000ASTRIS研究:中国晚期NSCLCEGFRTKI耐药后T790M突变率主要终点:OS次要终点:PFS,安全性T790M检测标本:组织或血液标本(PD后获取的标本,标本获取至标本检测最好不要超过60天)T790M检测方法:中心实验室检测,cobas®EGFRMutationTestv202004006008001000120014001600血液检测组织检测T790M阴性T790M阳性393(27.5%)1034(72.5%)795(62.8%)471(37.2%)T790M血液检测突变率27.5%组织检测突变率62.8%挑战4:ctDNA检测平台难以兼顾检测敏感性和基因检测范围Zhang,etal.2017WCLC,abs:JCES01.25ADELOS研究:对比4中血浆ctDNA检测T790M的检测平台Osimertinib80mg/天口服第一次采血收集第N次血液收集CobasSuper-ARMSDigitalPCRNGST790M+(n=181)2次进展收集组织样本并进行NGS检测(n=56)收集组织或细胞学样本(NGS)T790M-(n=75)收集组织样本并进行cobas检测(n=22)•晚期/转移性NSCLC•既往EGFR-TKI治疗进展•N=256•8家医院3次4次5次6次EGFRT790M占EGFR-TKI获得性耐药的50~60%血浆ctDNA代表一种有前景的T790M供选择的检测方法奥希替尼是一种具有CNS活性的第3代EGFR-TKI,可有效地并选择性地抑制EGFR突变和EGFRT790M耐药突变ADELOS研究(NCT02997501)目的是评估4种利用血浆ctDNA检测T790M的检测平台,从而验证它们在中国人群的临床应用挑战5:血液检测难以发现的一些耐药突变METamplification3%Smallcell+MET1%Smallcell1%Smallcell+T790M2%MET+T790M3%Unknown18%HER28%T790M60%HER2+T790M4%•11例c-Met过表达患者接受TKI+c-Met抑制剂治疗−缓解率(RECIST):45.5%−疾病控制率:54.5%−疾病进展:45.5%•其中5例c-Met过表达且不伴T790M的患者,
本文标题:T790M血液检测:机遇与挑战
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