呼吸道病毒标本采集运输、保存与实验室结果判读

湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道病毒标本采集运输、保存与实验室结果判读湖南省疾病预防控制中心微生物检验科黄一伟2015-12-10湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention相关呼吸道病毒概况湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道病毒呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变，或仅以呼吸道为入侵门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。拒统计，90%以上的急性上呼吸道感染由病毒引起。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道病毒的分类正粘病毒科流感病毒（A、B、C）副粘病毒科副流感病毒（I-IV）、呼吸道合胞病毒、偏肺炎病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒小RNA病毒科肠道病毒（脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒）、鼻病毒、心病毒腺病毒科腺病毒冠状病毒科SARS-CoV,229E,OC43,NL63,HKU1细小病毒博卡病毒（1-4）呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属疱疹病毒科单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒水痘－带状疱疹病毒、披膜病毒科风疹病毒多瘤病毒WU、KI湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道病毒感染的特点病毒的多样性和变异性；在引起成人感冒的病毒群中：鼻病毒占30%-35%，冠状病毒占20%-30%，其他病毒占10%-15%。大部分情况下，病毒入侵部位、入侵后繁殖部位、由此引发的组织和免疫病理改变以及表现出的临床症状和体征的部位基本在呼吸道，表现的病情较轻；一般无病毒血症；有些病毒还可引起肠道感染；免疫力不持久；湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention正粘病毒的基本特征流行性感冒病毒（简称流感病毒）：是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科理化特性：对热敏感,56℃30min可灭活；最适pH为7.0～8.0，＜3.0和＞10.0感染力很快被破坏；对紫外线敏感；对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention流行性感冒概述流行性感冒（简称流感）：是由甲（A）、乙（B）、丙（C）三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病。临床表现：起病急、高热（38～40℃）、肌痛、头痛伴有严重不适、干咳、咽喉痛或鼻炎，多数患者可在一到两周内恢复。潜伏期短（1-3天）、经呼吸道飞沫传播，传播迅速，抗原易变异，人群对变异株普遍易感，控制难度大，流感流行呈一定季节性。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention流感病毒概述分型与命名◆根据流感病毒感染的对象，可以将病毒分为人类流感病毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等类群。◆根据病毒粒核蛋白（NP）和膜蛋白（MP)抗原特性及其基因特性的不同，可以将病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。◆甲型流感病毒根据其表面结构（H和N）及其基因特性的不同可分为多种亚型。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention目前已从甲型流感病毒的天然宿主水禽中分离到16种HA与9种NA亚型的甲型流感病毒。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention•禽流感病毒H5N1、H9N2、H7N7以及H10N7等均有感染人的报道。•血清学的证据表明H4、H6以及H11亚型AIVs也可能感染过人。•根据禽流感病毒对鸡致病性的不同，AIVs可以分为低致病性禽流感病毒（LPAIV）和高致病性禽流感病毒（HPAIV）。•近几十年，不断有HPAIV和LPAIV感染人的报道，均是由禽直接传给了人，并没有病毒能在人群中有效传播的证据。•H7亚型AIVs也可按照地域不同分为两个基因谱系：北美谱系和欧亚谱系，且均有感染人的报道湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention副粘病毒的基本特征副粘病毒科(Paramyxoviridae)拥有2个病毒亚科6个属。副粘病毒的基因组为单股负链RNA，不分节段。基因组约15~20kb，编码的蛋白8~11个或更多。副粘病毒毒粒直径约150~350nm，含有螺旋状核壳。病毒颗粒呈多形性，但通常为圆形，均有包膜。即使在同一种病毒，毒粒的大小也不相同。细胞浆内复制。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention小RNA病毒的基本特征小RNA病毒(Picornavirus)小RNA病毒有9个属，其中已知5个含有人类病原。小RNA病毒颗粒每个含有4种蛋白（VP1-VP4），各有60个拷贝，呈二十面体对称结构，直径大约30nm，无包膜。小RNA病毒基因组为单股正链RNA分子，大小约8kb，能够在细胞浆内翻译出病毒复制所需的所有病毒蛋白，因此具有感染性。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPreventionCox肠道病毒感染特点非脊髓灰质炎肠道病毒（NPEV），主要包括Cox、ECHO和一些新型肠道病毒；感染广泛，仅在美国每年症状性感染达500万～1000万。感染主要发生在夏秋季节，发病率和严重程度与年龄成反比，幼儿是主要受害者；可引起普通感冒、心肌炎、无菌性脑膜炎、脑炎等多种疾病。绝大部分感染是无症状性的，很难与鼻病毒感染区分。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention在液体中稳定；脑脊液、血清、全血、尿可以放在原始采集管中送交实验室；直肠或咽拭子、鼻洗液等放入VTM；样本采集肠道病毒湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention鼻病毒病毒复制及症状特征主要在鼻部，人普通感冒有1/3～1/2由鼻病毒引起；1960年代分离成功，至1987年已经鉴别了100血清型；根据基因特征可将这些血清型分为A、B两属；2007年发现C属，目前不能培养温带地区感染高峰为每年9月，春天有第二次感人那高峰，夏天可持续发生；无组特异性抗原，型见可有交叉，血清型变化频繁；病毒经呼吸道分泌物从人传播到人；潜伏期2～3d,病毒排出高峰期与急性鼻炎一致；4～5d时检测不到病毒或维持低滴度达2周，症状一般维持7d;下呼吸道感染也常发生。尤其是对于婴幼儿、老年人、慢性病患者或原有肺病患者，常与RSV感染不易区分；没有胞膜，对有机溶剂有抵抗力。感染特点湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention症状出现后1～6d均可分离到病毒，病毒排泌1～3d明显；标本应在鼻部采集而不是咽部采集；鼻洗液是鼻病毒分离最好的标本；样本4℃可保存24～48h。鼻病毒样本采集湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention线型双链DNA，不分节段，基因组长30000~42000bp，编码约30种蛋白；病毒无包膜，二十面立体对称，直径约70~90nm，具12个顶角和纤维刺突。腺病毒湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention潜伏期5~8d；通常为局部感染；约5%的儿童急性呼吸道疾病及约10%的婴幼儿腹泻由腺病毒引起；咽炎，急性呼吸系统疾病（3，4，7，21，1，2，5，6），滤泡性结膜炎，流行性角膜结膜炎，咽结膜热，尿路感染（子宫颈炎、尿道炎、出血性膀胱炎）以及无症状持续感染；脑膜脑炎可为腺病毒呼吸道感染的并发症。腺病毒感染特点湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention鼻咽拭子或抽出物、鼻拭子或抽出物、眼分泌物拭子、粪便或直肠拭子、尿、尿道或宫颈拭子以及活检或尸检组织都是可根据病人症状获得的合适标本。疾病早期正确收集样品并立即冷冻送往实验室可大大提高病毒检出率。用血清学方法建立或证实诊断需要配对的血样。第一份样品在症状出现后应立即尽快收集，第二份应在2-4周后收集。样本采集腺病毒湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention冠状病毒单股正链RNA，27-31KD,5’端甲基化“帽子”，3’端polyA尾。根据基因序列和血清学，分成三组，感染人类的分属于I和II组，包括229E、NL63、OC43、HKU1和SARS-CoV。Woo,etal.ExpBiolMed.2009,234:1117–1127湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention可引起呼吸道、肠道感染，也可能引起神经症状。非SARS-CoV病毒，通过呼吸道飞沫传播，尚无动物模型，多数感染较轻，为自限性，可加重慢阻肺等疾病。分布广泛，主要发生在冬季和早春，美国数据表明，占成人上呼吸道感染的10~24%。病毒分离可用人胚肾细胞或器官培养。冠状病毒感染特点湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道病毒标本采集、运输、保存湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention流感样病例定义•是指发热（体温大于等于38℃），•伴咳嗽或咽痛之一者。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention不明原因肺炎病例定义•同时具备以下4条,不能明确诊断为其它疾病的肺炎病例:•(1)发热(腋下体温≥38℃);•(2)具有肺炎的影像学特征;•(3)发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少;•(4)经规范抗菌药物治疗3-5天，病情无明显改善或呈进行性加重。湖南省疾病预防控制中心HunanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention呼吸道症候群病例定义（一）急性感染表现（至少符合下列的一项）：发热（从发病开始有报告和记录），WBC升高或降低，或WBC分布异常，寒战，体温降低（考虑年龄）（二）呼吸道临床表现（至少符合下列的一项）：咽部不适、咽干或咽痛，鼻塞、流涕，鼻/咽/喉明显充血、水肿，咳嗽（新发或咳嗽加重），咳痰