光合细菌的分离培养与应用初探

光合细菌的分离培养与应用初探‘摘要光合细菌在无一氛条件下能分解利用氛、亚峭酸、硫化氮等有害物质,使养疽水休净化,同时能降低水质底质的生化耗氛号,从而间接提高溶解氧;光合细菌还可以门于欲虾经贝及禽言的养痊,对农作物与人体保健的应用亦有广阔的开发前景。关健词光合细菌,分离,培养,应用.光合细菌(P三B)是一种f贻以光作为能源,以C02或有机物作为碳源而进行生长繁殖的微生物.它能利用氨、亚硝峻和琉化氢等有害物质,故在有机质丰富的水体中可大量繁殖,使污水的BOD下降,在净化水质中起到了独特的作用.PSB菌体又是一种含蛋白质(滩%)、脂肪(8%)、大量胡萝卜索、B族维生素和辅酶Q及活性促生长抗病因子的特殊细菌.PSB的作用已引起水产养殖界和环境保护界的重视.PSB亦可作为鱼虾贝类和禽畜的饵(饲)料,对水稻、蔬菜均有增产作用.我们于1993年2月开始对PSB进行分离培养,并在生产上作应用试验,现将初步结果报道如下.1分离与培养1.1材料的采集分离材料采集于宁德市某豆腐作坊灼排水沟,附着于石头上呈橙黄色或乳白色的沉积物。1.2分离培养基的配制KZHpo‘0.69KHZpO;0.59(NH‘):50‘1.09Mgso‘0.29NaC10.29Na:S:0:0.19NaAeo.5~1.09pH6.7酵母膏0.19CaC工20.29蒸馏水lo00m18磅蒸压灭菌20分钟1。3分离方法称取沉积物19,加无菌水5ml充分振荡打散,制成悬浊菌液,然后悬浊菌液与液体培养按1:5比例装入40x18omm的大试管中,在液面上加一层灭菌的液体石蜡形成厌氧,置温度28~30OC,光照强度为800oLox进行厌氧培养,三天后培养液明显呈深红色.尔后,以培养液进行琼脂平扳划线分离、纯化,平扳培养基成份如下NH‘Cl1.09工交。HPO‘0.59MgCI:0.29NaCI2.09酵母膏0.19琼月旨l主一:·09水”01川劫戈份济解后,以1洲旁压力灭菌20分钟,然后无菌操作,加入(1)经过滤灭菌的收稿「J期:飞394年1月1994夕卜第6游第1户l阮少江光合务U菌的分离培养与应用初探3一!NaHCO35.o/6oml水;(2)沁ml经过滤灭菌的乙醇或戊醇或4%丙氨酸,用过滤灭菌的o.INH。PO‘调pH至7.0,趁热进行倒平板,待平板凝固后,在平板表面进行划线,然后在培养基表面用灭菌液体石蜡封面,培养条件同上,三天后出现红色小菌落,六天’后单菌落生长良好,挑取单菌落重复分离,直至得到纯单菌株.笔者共获得两株.1.4菌株特征1‘菌株特征菌体呈短杆状至球形,大小为0.5一1.2x2一2.5卜m,多见其特殊的“Z”形排列的链状,琼脂平板菌落圆形,直径。.3一1mm,表面微凸,呈绛红色,不透明.菌液暴露空气生长时,培养液由暗红色到紫红色.经鉴定为英膜红假单胞菌〔Rhodops“::domonasCapsujata(MolisCh)VanNiel1994〕.2’菌株特征菌体杆状,两端钝圆,偶见稍弯曲,大小为0.6一0.9x1.3一2.8件m,革兰氏}卿比,繁殖时,芽生,可见到呈哑铃状;琼脂平板厌氧光照28~300C培养六天,菌落圆形,边缘整齐,表面凸而状,不透明,呈深红色至暗红色,经鉴定为沼泽红假单胞菌〔R注。loPseudomomasPalustris(MolisCh)VanNiel1994〕.1.5实验室二级培养配制分离培养基分装于500ml锥形瓶,8磅灭菌20分钟,将培养4~6天生长良好的斜面菌种的菌落刮至事先准备好的培养基(或无菌水)的试管中,充分振荡,把菌体打散,然后接到锥形瓶中,使培养荃呈微红色,再加足培养基至满瓶,用塑料薄膜封口,橡皮筋扎紧,使之成无氧状态,培养条件同上.经培养3~4天后,培养液呈暗红色或紫红色,菌体含量可达1.5火10’个/ml.1.6扩大培养(批量生产培养)用暴晒两天不灭菌的自来水配制墙养毖,分装于透明大塑料袋(透光度强),每袋10kg,接入二级菌种,接种量与培养液的体积按1:5的比例,排尽袋中的空气,用橡皮筋扎紧袋口,用钨光灯提供光源,光照强度为100。。Lux,经常摇动培养液,防止沉淀,经三天培养,培养液呈暗红色或紫红色,菌体含量可达1.0xlo7‘2.0xl0了个/。1.可供扩大培养用的培养基有培养基1(NH;):50‘1.09MgSO‘o.ZgN二HCO。5.09KZHPO‘0.59NaCI0.29蛋自陈1.59酵母膏0.19自来水IO00mlpH7.1~7.28磅灭菌20分钟培养基ZM;50、0.5:KHZ尸O;0.魄NaAc2.魄酵母膏1.帷自来水1000mlpH8.058访灭菌20分钟2应用试验今年七月初,笔者在宁德市漳湾镇、七都镇和扛浦县!‘璧乡等地的长毛对虾池中试验.试验选择在小潮水时进行,按skg/亩的光合细菌量均匀拌入泥砂中,泼撒于池中,换水死角多撒,或直按把光合细菌菌液通入池底,一匕天后,试验池的水质比对照池的水质明显改善.今年全国海域的对虾养殖受病毒侵染和海水污染等多种因素影响,对虾严重死亡(有些地方绝收),但试验池中的对虾比对照池中的对虾推迟10~15天死亡,而且试验池中棍养的好比对照池明显肥大.3结果与讨论(下转第51页)瓤二爪1994年第6卷第1期郑立文实习生教学工作探讨51几年就真正掌握教学艺术.根据一些经验理论认为,一位新的教师至少要两年之后才能成为胜任教学的教师.之后随着教学时间的推移,逐步积累经验,最终才会成为较熟练的有经验的教师.因此,要成为一名真正的合格的专业教师需要相当长的教学实践活动.况且,实习只是掌握教学艺术的入门阶段,是教学经验的初次实践阶段,是不可能期望实习生通过几天的实习就能成为熟练掌握教学技能的教师.因此,实习生不应该为_L好几节课而沽沽自喜,自我满足.而应该努力完善教学技巧和教学方法.7要制定好教学计划和时间计划实习期间制定计划很关键.实习生教学失败多数是由于缺乏充分的计划所致.实习过程,每位实习生都必须制定具体的详细的计划.比如:这节课,学生要掌握书上什么内容,采用什么教学法,如何运用教学法以及需要哪些参考资料.这些方面不仅要了解而且还要详细写下来.还要尽可能地预计偶然发生的特别情况,不要有侥幸的心理.因此,卖习生应提前写好计划,包括重点、难点、关键以及其他细节.实习阶段,许多学生感到时间非常紧张,这一问题主要是没有预先安排时间所致.因此,实习生必须安排好课前、课中和课后要完成的各项任务所需要的时间,确保有合理的时间来顺利完成各项士作.特别要注意,安排时间要尽量充裕「、实际一些,如果时间计划上要求过了头,比不做计划还糟糕.(待续)(上接第31页)3.1PSB分布在富含有机质的环境中,尤其在豆腐制品作坊的废水沟中普遍存在,证明该菌是以有机物作为碳源和光合作用的供氢体,故属于光能异养型的光合细菌.3.2厌氧和光照是光合细菌生长的必备条件.在分离纯化时,厌氧条件尤为重要,在有氧时菌落呈自色并略具荧光、发亮),不转变为红色,这是由于氧气抑制色素形成的结果.PSB利用接近红外线700~goonm的射线,炎光灯一般缺乏红外线,用一般钨灯光即可.3.3PSB在液体静置培养时,常出现贴壁现象,这一般认为属于正常现象.出现沉淀应查找原因,有可能是菌种老化或培养基成份不适宜所致,其中生长因子不适或不平衡是发生沉淀的重要原因.3.4使用PSB净化养殖池塘水质的效果十分显著,据报道可使池塘氨氮含量平均降低o.4mg八,溶解氧增加i.Zmg八;换水量可减少20%~30%.3.5PSB除净化水质外,日本、台湾已进行规模生产,直接作为饵(饲)料投喂对虾、河蟹、鱼类、贝类、禽畜,同时也用于人体保健,都取得极大成功.据报道PSB在农作物上亦有广泛应用.开发PSB新用途有待今后进一步研究试验.林梦藻、郑铀官副教授参加并指导本试验,同时审阅本文,在此表示衷心感谢,