常规冰冻制片常见问题分析湘雅医院病理科付春燕

常规及冰冻切片制片中常见的问题分析及解决方法中南大学湘雅医院病理科傅春燕常规、冰冻制片常见问题及对策•冰晶的问题----冰冻切片制片时如何减少冰晶•染色的问题----怎样使切片染色更漂亮•标本切开与固定----如何做好标本的切开与固定一、冰冻切片制片中冰晶的问题冰晶的产生：当组织缓慢冷冻时，组织间隙的水份凝固形成的，这时由于电解质析出，渗透压升高，细胞内的水分子渗透到细胞外，使组织间隙的冰晶变得更大，挤压周围组织，使组织细胞的形态发生明显的改变，严重影响病理诊断。所以良好的冰冻切片制作取决于标本的冷冻速度，要想组织在冷冻过程中不产生或者少产生冰晶，就必须使组织快速冷冻，而且冷冻得越快越好。如何使组织快速冷冻如何减少冰晶1、标本送检的要求临床医师取组织后尽量避开水源，不能水洗，不能加放固定液，送检标本时不要用生理盐水浸泡，不要用湿纱布包裹组织，由于液体浸泡后，组织内水分增加，冷冻后组织内冰晶就会增多。2、取材不能太大、太厚组织块的大小、厚薄决定了冷冻的速度，太大、太厚的组织由于冷冻时间长，难免有冰晶的产生。所以，取材组织块小于1.5*1.5*0.3cm。取材3mm厚取材4mm厚3、使用吸水纸可以吸干组织表面的水分4、样本托和打底胶预冷打底胶预冷胶未预冷补胶要少动作要快•补加胶的时候，动作要快，而且不能补加太多的胶，因为胶的量越多冻得越慢，（可以是周围加胶，也有两头加的）放标本动作要快•特别是一个样本托要放几块组织时，动作要快5、使用速冻台和冷冻锤加快组织的冷冻•每台冰冻切片机都有一个速冻台，好的冰冻切片机可以在几分钟内将速冻台的温度下降至-50℃～-60℃度之间。•冷冻锤从上面压在组织上，可以使组织上下两面同时冷冻一台冰冻切片机有多个冷冻锤6、液氮和急冻剂使用液氮和急冻剂来快速冷冻组织7、专用冷冻机使用专用冷冻机可以使组织标本在1分钟之内冷冻好总结：减少冰晶的措施•1、组织不能水洗，组织取材要小、薄（在能满足诊断的基础上尽量小、薄）并用吸水纸吸干组织表面的水份•2、样本托、打底胶要预冷、补胶量要少，（在保证切片完整）•3、放多块组织和补加胶时动作要快•4、充分利用速冻装置如：冷冻台、冷冻锤、来加快组织的冷冻•5、购置专用冷冻机、急冻剂、专用液氮灌二、常规与冰冻制片中常见问题切片染色的问题脱蜡试剂的问题怎样使切片染色更漂亮1、正确选择染色试剂苏木素、伊红的配方2、注意染色过程中的细节问题1、苏木素、伊红配方的选择（1）改良Gill苏木素液：苏木2.5克溶于乙二醇250ml中。硫酸铝铵17.6克溶于蒸馏水730ml,以上二液充分溶调后混合，加碘酸钠0.2克，使用前加冰醋酸20ml.（2）酸化沉淀伊红液贮备液：伊红20克，蒸馏水500ml,经充分溶解后加浓盐酸10ml，用玻棒不断搅拌，过夜析出沉淀，弃去上清液，用蒸馏水反复洗沉淀三次，用滤纸过滤，弃去滤液，沉淀与滤纸一同放入烤箱，干燥后，用95%乙醇1000ml配成饱和液，即贮备液。工作液：取贮备液1份与95%乙醇2--3份，混合2、注意染色的细节•脱蜡彻底（热片和震动）•染色前用滤纸刮去苏木素液表面的氧化膜•苏木素染色（过染）、分化，蓝化、镜下观察，流水冲洗10分钟以上•分化液为0.5%盐酸酒精•伊红过染时，可用70%酒精洗至理想颜色•染色时要注意试剂的量是否足够•手工染色时，为了保证各缸试剂的浓度，尽量不要把前一缸的试剂带入后一缸内•使用新鲜的试剂，定期更换染色试剂染色试剂的更换•除了二甲苯换掉第一缸，后面的二甲苯往前移外，其他的试剂都换新的。•废液倒掉后，试剂瓶要清洗干净并且擦干。•更换试剂后要预先试染一批切片。•更换试剂时要注意不要弄错试剂摆放的顺序。•由于天气的原因，试剂容易挥发，要及时添加或更换。细节决定成败在常规和冰冻切片制片过程中，切片染色也是比较重要的一个环节，如果这个环节没做好，也一样地影响病理诊断，所以，我们在实际工作中除了注重常规的组织标本的前期处理、冰冻切片的速冻方法外，我们还要正确选择染色液的配方，并且在染色过程中把每一个细节都做得很好，我们的切片质量肯定会好的。谢谢