重大传染病疫情、食物中毒现场采样及实验室生物安全

重大传染病疫情、食物中毒现场采样及实验室生物安全呼伦贝尔市疾病预防控制中心洪丽云一、重大传染病疫情的采样•传染病概念：传染病是指具有传染性的致病性微生物或生物，如细菌、病毒、立克次体、寄生虫等侵入人体，致使人体健康发生某些损害，并能危及其他不特定人群的生命和健康，甚至对整个社会造成严重影响的疾病。•传染病分类：按人接触的传播途径不同分•经呼吸道传播的传染病、经肠道传播的传染病、经虫媒传播的传染病、经血液传播的传染病•（一）呼吸道传染病标本的采集和现场检测用品•呼吸道传染病概述：呼吸道传染病是指病原体从人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等部位侵入后引起的有传染性的疾病。（所有呼吸道传染病都经空气，包括飞沫、尘埃、气溶胶等传播方式）•经呼吸道传播的疾病主要有：肺鼠疫、传染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、肺炭疽、肺结核、流行性脑脊髓膜炎、百日咳、白喉、猩红热、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹等法定管理的传染病，以及军团病、普通感冒、腺病毒、呼吸道合胞病毒感染、水痘等等非法定管理的但较为常见的传染病，上述传染病在某种情况下均可引发突发公共卫生事件1、传染性非典型肺炎的现场采样和现场检测用品准备•传染性非典型肺炎（又称“严重急性呼吸道综合征”SARS）•概述：是由新型冠状病毒引起的一种以肺炎为主要表现的急性呼吸道传染病，是21世纪出现的第一个严重危害人类健康的新发吸道传染病。它是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病按甲类传染病管理的病种之一。•SARS以发热、肺部进行性炎症和呼吸困难为主要临床表现，一定条件下传染性强，主要通过呼吸道近距离接触（飞沫）传播，呈医院和家庭聚集性，病死率高，人群普遍易感；SARS以显性感染为主，潜伏期（1—12天）内未发现有传染性。目前研究表明，SARS冠状病毒来源于动物，果子狸等可能是主要的载体之一，但病毒的原始来源及流行规律尚未完全清楚。目前SARS尚无特效治疗、预防药物和疫苗。2003年1月，广东省首次报告SARS病例，截止2003年6月，中国、越南、加拿大等国出现了SARS病例或局部暴发，2003年12月—2004年1月广东省再次出现4例社区感染SARS病例，2003年9月—2004年4月间，新加坡、中国台湾、北京分别发生实验室SARS感染事件。（1）现场检测用品准备：•a、SARS病例或密切接触者采样登记表•b、采血用品：10ml外螺旋带密封垫圈螺口塑料管、医用5ml或10ml一次性注射器针管或5ml真空针管、2ml螺口血清管、带有冰排的冰壶或冰包、止血带、棉拭子、酒精；•c、采集鼻咽拭子用物品：鼻咽拭子保存管（套装）或15ml螺口管、3—5ml样本运送液（常用pH7.4—7.6的Hank，s，Eagle，s或水解乳蛋白或MEM）或等渗盐溶液或磷酸盐缓冲液、15ml螺口管、棉拭子；•d、粪便、痰液、尸检组织保存管：50ml外螺旋带密封垫圈螺塑料管；•e、其他：油性记号笔、一次性纸杯、一次纸漏斗、冰壶；污物袋；样品编号标签或条码纸。（2）现场个人防护用品：手套、防护眼镜、符号“N95标准的防护口罩、鞋套、白大衣、隔离衣、洗手液、75%酒精等、消毒液等。•（3）采集患者样本一式三份，其中两份分别送两家有SARS检测认定资格的实验室同时进行平行检测，一份样品备复核；•（4）实验标本的采集：•SARS预警病例、疑似病例、病例和密切接触者的标本包括血液、鼻咽拭子或含漱液、粪便。a、鼻咽拭子：将棉签平行于上颚插入鼻孔，保持几秒钟，吸收分泌物。b、口咽拭子：适度用力用棉签拭子拭抹咽后壁和扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入无菌、内装3—5ml样品运送液带垫圈的螺口塑料管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。C、痰液：患者将痰液咳入无菌、内装4—5ml样品运送液、带垫圈的50ml螺口塑料管中，旋紧管盖并密封。d、下呼吸道样品（适用于气管插管病人）：收集气管吸取液或支气管灌洗液5—10ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管中，立即密封。d、血清：采集5—10ml全血放入带垫圈的螺口管中，不加抗凝剂，待血液凝固后，分离血清，放置到-20℃以下冰箱冷冻保存，血凝块经灭菌处理后弃掉。采集时间：•第一份血清应在入院后24小时内采集；第二份血清应在发病后10—14天采集；第三份血清应在发病后22—28天或出院当天采集。f、全血：应在入院后24小时内采集5—10ml全血放入已加抗凝剂、带垫圈的螺口管中，在4℃条件下立即送至有关实验室。g、粪便样品：采集5—10g粪便放入无菌塑料瓶内，在4℃条件下立即送至有关实验室。h、尸检组织样本：病人死亡后应尽早进行解剖，采集肺、气管、心脏、脾、肝、脑、肾和淋巴结等重要器官样本，采集每一部位时都应更换消毒器械，每种组织应多部位采集，每份样本应采集20—50g，淋巴结2个，分别置于分别置于50ml螺口塑料管中，立即置于-70℃以下或冷藏送至有关实验室。•（5）标本运输：样本运输时须进行三层以上的包装。样本采集后加无菌外包装，置于专用密闭盒（金属或硬塑料材质）内，用具有吸水性和柔软的物质填充固定，置于保温箱内；由2人以上专人专车运送；短途（市内）运送加冰保冷即可；长途运送需加干冰保冷；空运需符合民航总局检疫部门有关传染性物质运输的规定。2、人感染高致病性禽流感的现场采样和现场检测用品准备：•人感染高致病性禽流感概述：是由禽流感病毒某些亚型毒株在人群中所引起的疾病，所表现的临床症状随病毒亚型不同而异。至今已发现能感染人的禽流感病毒有：H7N7H7N2H7N3H5N1H9N2亚型毒株。1981年美国和英国就已相继报道禽H7N7亚型能直接感染人，因仅是个别偶发病例没有引起人们的重视。1997年我国香港特区发生人禽H5N1禽流感18例，其中死亡6例。2004年初至2005年5月，越南和泰国共发生人禽H5N1流感60余例，其中死亡40例。人感染高致病性禽流感已引起全世界瞩目，尤其水禽被认为是甲型流感病毒基因的贮存库，流感病毒大流行株出现被认为可能与禽流感病毒密切相关。人感染高致病性禽流感是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病按甲类传染病管理的病种之一。（1）现场检测用品准备•a、人感染高致病性禽流感病例或密切接触者采样登记表•b、采血用品：10ml外螺旋带密封垫圈的螺口塑料管、医用5ml或10ml一次性注射器针管或5ml真空针管、2ml螺口血清管、带有冰排的冰壶或冰包、止血带、棉拭子、酒精；•c、采集鼻咽拭子用物品：鼻咽拭子保存管（套装）或15ml螺口管、3—5ml样本运送液（常用pH7.4—7.6的Hank，s，Eagle，s或水解乳蛋白或MEM）或等渗盐溶液或磷酸盐缓冲液、15ml螺口管、棉拭子；•d、粪便、痰液、尸检组织保管：50ml外螺旋带密封垫圈螺塑料管；•e、其他：油性记号笔、一次性纸杯、一次纸漏斗、冰壶；污物袋；样品编号标签或条码纸。•（2）现场个人防护用品：手套、防护眼镜、符号“N95标准的防护口罩、鞋套、白大衣、隔离衣、洗手液、75%酒精等消毒液等。•（3）采集患者样本一式三份，其中两份分别送两家有人感染高致病性禽流感检测条件的实验室同时进行平行检测，一份样品备复核；•（4）实验标本的采集：•人感染高致病性禽流感预警病例、疑似病例、病例和密切接触者调查的标本包括鼻咽拭子或含漱液、血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。a、鼻咽拭子：将棉签平行于上颚插入鼻孔，保持几秒钟，吸收分泌物。b、口咽拭子：适度用力用棉签拭子拭抹咽后壁和扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入无菌、内装3—5ml样品运送液带垫圈的螺口塑料管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。c、气管分泌物：收集气管吸取液或支气管灌洗液5—10ml放入无菌采集带垫圈的50ml螺口塑料管中，立即密封。d、血清：5—10ml全血放入带垫圈的螺口管中，不加抗凝剂，待血液凝固后，分离血清，放置到-20℃以下冰箱冷冻保存，血凝块经灭菌处理后弃掉；采集时间：第一份血清应在入院后24小时内采集；第二份血清应在发病后14—28天或出院当天采集。e、尸检组织样本：病人死亡后应尽早进行解剖，采集肺、气管、心脏、脾、肝、脑、肾和淋巴结等重要器官样本，采集每一部位时都应更换消毒器械，每种组织应多部位采集，每份样本应采集20—50g，淋巴结2个，分别置于50ml螺口塑料管中＄立即置于%70℃以下或冷藏送至有关实验室。（5）标本运输：•样本运输时须进行三层以上的包装。样本采集后加无菌外包装，置于专用密闭盒（金属或硬塑料材质）内，用具有吸水性和柔软的物质填充固定，置于保温箱内；由2人以上专人专车运送；短途（市内）运送加冰保冷即可；长途运送需加干冰保冷；空运需符合民航总局检疫部门有关传染性物质运输的规定。采集的标本若不能在24小时内送达实验室，则应尽快在-70℃以下保存。（二）肠道传染病标本的采集和现场检测用品•肠道传染病概述：肠道传染病是病原体经口侵入肠道并引起腹泻/或其他脏器及全身性感染的一类疾病，包括《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病中的霍乱，乙类传染病中的伤寒和副伤寒、细菌性痢疾和阿米巴痢疾、脊髓灰质炎、甲、戊型病毒性肝炎，丙类传染病中的除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病，以及其他通过肠道传播的传染病。引起这些感染的病原体中，细菌性病原体包括霍乱弧菌、痢疾杆菌、致病性大肠杆菌、伤寒杆菌和副伤寒杆菌、空肠弯曲菌、非伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌等，病毒性病原体包括脊髓灰质炎病毒、甲型和戊型肝炎病毒、轮状病毒等，寄生虫性病原体包括阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫等。肠道传染病通常表现的症状有呕吐、腹痛、腹泻等，有时引起脱水、毒血症等并发症，严重会造成死亡。一些肠道传染病病原体会导致系统性感染，如伤寒和副伤寒杆菌引起发热及肝脾肿大、甲肝病毒引起肝炎、脊髓灰质炎病毒引起弛缓性肌肉麻痹等。1、霍乱的现场采样和现场检测用品准备•霍乱概述：霍乱是由霍乱弧菌引起的一种急性肠道传染病，以发病急、传播快、波及范围广为特征，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一，也是《国际卫生条例》规定的国际检疫传染病之一，《国内交通卫生检疫条例》也将其列为检疫传染病。目前引起霍乱暴发流行的菌株为O1、O139群。霍乱弧菌经水和食物传播，引起大流行的规律目前尚不十分明确，在我国引起霍乱流行的自然因素和社会因素依然存在。•（1）现场检测用品准备：•标本采样记录表、标本采样用拭子（注意用于PCR检测标本采集的拭子，应使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒）、吸管、带盖可密闭的塑料管、自封式塑料袋、标签纸、油墨耐水的记录笔、装有运送培养基密闭试管、空培养皿和装好选择性（包括强性和弱性）培养基的培养皿、增菌培养基和装有增菌液的培养瓶（当现场有实验室和培养条件但不具备培养基时）、标准诊断血清和鉴别诊断用试剂、其他实验室需要的试剂与耗材。（2）标本的采集•采集的标本包括：粪便、呕吐物、肛拭子和血清等。•对病人接触的可疑食品、水体等，应规范采集标本进行病原分离。•方法：•a、粪便：水样便以吸管吸取1—3ml，成型便采集成人拇指大小的便量，置于灭菌管内或经增菌后送检。任何容器均应加橡皮塞或将螺旋盖旋紧。采集肛拭子标本，以直肠拭子用保菌液或生理盐水湿润后，由肛门插入直肠内3—5cm处采集，转动取出，插入保菌液或无菌试管内送检。粪便标本应在2小时内尽快送检，否则标本放入Cayr-Blair运送培养基中。•b、呕吐物标本：以吸管吸取1—3ml，置可密闭样品管立即送检。沾染粪便的衣物、物品、地面，以及尸体肠内容物等也可作为检材。•c、食品标本：采集50—100g置可密闭灭菌广口瓶、塑料瓶或厚的自封式塑料袋内，常温下迅速送实验室。•d、水产品标本：通常选取活的或新鲜水生动物为采集对象，冰冻水生动物也可作采集标本。采集水生动物鳃部和／或肠内容物等，置于采样瓶（管）或食品采样袋中密封，常温下送检；同时，以无菌棉签涂抹五只（条）以上的某类水生动物体表和／或水生动物肛门，置于碱性蛋白胨水中送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。•ｅ、水体标本：用灭菌的50